0 次观看 • 3:33 分钟 • June 17th, 2025
用注射器吸取含有腺相关病毒（AAV）和局部麻醉剂利多卡因的溶液。
将一只清醒的小鼠置于俯卧位，并覆盖其上半身。
握住小鼠的骨盆带，剃除其下背部毛发以暴露皮肤，用碘酒和乙醇进行消毒。
找到下脊柱的间隙并轻轻按压以标记该位置。
旋转尾部以对齐脊柱，并将注射器垂直插入。
调整角度直至出现尾部抽动，以确认针头已进入脑脊液（CSF）流动的蛛网膜下腔。
缓慢注入溶液，以确保均匀分布。
病毒颗粒与神经元结合，进入细胞内部，并将其遗传物质释放到细胞核中，从而实现靶向基因表达。
利多卡因可暂时阻断神经信号，引起腿部短暂性瘫痪，从而证实药物已成功递送至脑脊液（CSF）中。
本方案确立了鞘内给药作为治疗中枢神经系统疾病的有效方法。
开始操作前，将一个27号针头连接至25微升Hamilton注射器上，并将针头斜面与注射器上的体积刻度对齐，然后小心地将8微升浓度为4×10¹⁰基因组拷贝/毫升的病毒溶液装入注射器中，注意避免产生气泡。
接下来，将一只清醒的、30至70日龄、体重12至30克的小鼠俯卧置于生物安全柜内的垫片上，并用无菌纱布覆盖其上半身，以安抚小鼠并防止被咬伤。牢固握住小鼠的骨盆带，一侧用拇指，另一侧用食指和中指，用拇指和食指绷紧双侧骨盆带之间的皮肤，然后剃除双侧骨盆带之间的毛发，并用含碘消毒剂和70%乙醇对暴露的皮肤进行消毒。
为直接进行鞘内递送腺相关病毒溶液，沿双侧骨盆带之间的中线触诊椎间隙，并用指甲在皮肤上按压出一个凹陷，以标记L5至L6椎间隙。轻微而轻柔地旋转尾部基部，以显露脊柱中线，并将针头斜面朝向动物头部。将小鼠牢固固定于位置后，使针头沿脊柱中线对齐，轻柔且垂直地插入凹陷中心，保持注射器处于中央矢状面。
当针尖接触到骨骼时，缓慢将角度减小至约30度，并将针滑入椎间隙。尾部突然抽动是成功进入硬膜内腔的标志。当针进入椎间隙时，针尖会感到被牢固地夹住。注射载体溶液后，保持针头在硬膜内腔内一分钟，然后一边缓慢旋转一边退出针头，以尽量减少渗漏。