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神经科学
0 次观看 • 2:59 分钟 • August 7th, 2025
用含有携带目的基因的质粒载体和示踪染料的DNA混合物填充微量移液器，并将其固定在显微操作仪上。
将琼脂糖块置于显微镜下，并在其上方放置含有皮层中间神经元的琼脂糖包埋小鼠胚胎脑切片。
降低微量移液器，将DNA混合物注入中间神经元前体区域。示踪染料标记了注射位点。
将另一块琼脂糖置于培养皿电极上，并将一根琼脂糖柱置于盖电极上。
将切片转移至切块上，并将覆盖电极对准注射位点。
施加短暂的电脉冲以暂时通透细胞膜，使质粒能够进入细胞核。
将切片置于培养基中孵育，以维持细胞活性。
在细胞核内，质粒可启动基因表达，产生目标蛋白，并调控中间神经元前体细胞的功能。
注射时，将表达载体和对照载体的DNA分别配制成每微升含1微克的浓度，混合后加入快绿储备液，稀释至1/10。用10微升上述DNA混合液填充经拉制的玻璃微量移液管（内径0.5毫米，外径1毫米），并将该移液管装入气动皮升泵注射仪。将较大的琼脂糖块置于体视显微镜下，把待注射的脑片放置在琼脂糖块上。
随后，将25至50纳升体积的溶液注入所选的纹状体内侧隆起或尾侧 ganglionic eminence 区域的脑片中。注射后立即把小块琼脂糖放置在培养皿电极上，并使用平头显微铲将琼脂糖柱固定到可移动的覆盖电极上。
将带有支撑膜的注射后脑片转移至琼脂糖块上，并将带有琼脂糖柱的上层电极置于脑片的选定区域上方。随后以125伏特电压施加两次5毫秒的电脉冲，脉冲间隔500毫秒，进行电穿孔。电穿孔完成后，将带有支撑膜的脑片放回培养皿中，并将培养皿放回组织培养孵育箱。