0 次观看 • 3:58 分钟 • August 7th, 2025
取一只已麻醉的大鼠，暴露其椎骨，并切除胸段 T7 至 T9 水平的棘突和椎板。
在 T8 上方和下方切断背根和腹根。
使用生理盐水以帮助止血，并用海绵吸除液体。
在 T8 和 T9 之间横断脊髓以切断神经纤维。
将压缩泡沫放入间隙中，并施加生理盐水。
出血停止后，移除泡沫并清除残留液体。
将预先制备好的带有开口窗的压电聚合物导管滑过脊髓头端残端。
将尾端残端插入导管的另一端。
通过导管窗口将悬浮于可注射基质中的施万细胞注入。
牢固地关闭窗户。
施万细胞定植于导管内，并分泌支持轴突生长的神经营养因子。
该导管提供结构引导，同时其压电特性可产生促进神经突生长的生物电信号。
轴突逐渐通过桥接区域再生，恢复了断端之间的连续性。
当所有椎板均已被去除后，确认横突之间的间隙可见，尤其是在 T8 节段，并检查 T7 至 T9 两侧的骨骼，确保无向外突出的骨碎片，此时背侧根应变得可见。使用斜角弹簧剪在 T8 上方和下方剪断背侧根和腹侧根。并向脊髓滴加生理盐水以帮助止血。
接下来，将斜角弹簧剪置于T8横突间隙处的脊髓上方，进行一次切割以完全切断神经组织。将一小块压缩泡沫放入由此产生的2至2.5毫米的间隙中，并立即向该区域添加生理盐水。
在等待离断的导管残端达到止血状态的同时，将吸收性三角条切成细长条状，并从 PBS 储存液中取出一根导管。将部分三角条放入导管内以吸除多余的 PBS，并确认预先切割的窗口已打开。
接下来，移除GFP施万细胞沉淀中的培养基，并将施万细胞重悬于10 µL冰冷的DMEM/F-12培养基中。向细胞悬液中加入10 µL冰冷的可注射凝胶，通过反复吹打充分混匀。然后将细胞悬液置于冰上。当脊髓残端准备就绪后，移除压缩泡沫，并使用较长的吸水棉片清除椎板切除区域的生理盐水和血液。
然后，使用微型刮勺轻轻抬起吻侧断端，将导管带有窗口的一侧朝上，套入断端。注意确保整个断端完全插入导管，并避免有过多血液进入导管内。轻轻抬起尾侧断端，将导管的另一端套在其上，注意确保整个断端完全插入，且窗口位于背侧表面。
然后，使用配备 Western blot 上样头的微量移液器，将 20 µL GFP 雪旺细胞可注射基质混合物通过预先切好的窗口之一注入导管中，并关闭窗口。