Name: 1单侧损毁6 - 羟基多巴胺帕金森病小鼠模型的发展 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 学习单侧6-OHDA损毁内侧前脑束建立帕金森病小鼠模型的手术方法。该方案可实现纹状体多巴胺耗竭超过95%，死亡率仅13.3%，适用于行为学实验研究。

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本工作得到了加拿大外交和国际贸易部（加拿大政府）、多伦多大学康诺特基金、加拿大创新基金会、自然科学与工程研究理事会（NSERC）、克伦比尔基金会以及治愈帕金森信托基金的支持。

<ol><li>Costall, B., Naylor, R. J., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-specific+supersensitivity+of+striatal+dopamine+receptors+after+6-hydroxydopamine+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Non-specific supersensitivity of striatal dopamine receptors after 6-hydroxydopamine lesion of the nigrostriatal pathway.</a> Eur. J. Pharmacol. 35, 276-283 (1976).</li>
<li>Maneuf, Y. P., Mitchell, I. J., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+enkephalin+cotransmission+in+the+GABAergic+striatal+efferents+to+the+globus+pallidus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">On the role of enkephalin cotransmission in the GABAergic striatal efferents to the globus pallidus.</a> Exp. Neurol. 125, 65-71 (1994).</li>
<li>Robertson, G. S., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+L-dopa-induced+rotational+behavior+is+dependent+on+both+striatal+and+nigral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidence that L-dopa-induced rotational behavior is dependent on both striatal and nigral mechanisms.</a> J. Neurosci. 9, 3326-3331 (1989).</li>
<li>Ungerstedt, U., Arbuthnott, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+recording+of+rotational+behavior+in+rats+after+6-hydroxy-dopamine+lesions+of+the+nigrostriatal+dopamine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative recording of rotational behavior in rats after 6-hydroxy-dopamine lesions of the nigrostriatal dopamine system.</a> Brain Res. 24, 485-493 (1970).</li>
<li>Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+to+the+symptomatic+treatment+of+parkinsonian+syndromes%3A+alternatives+and+adjuncts+to+dopamine-replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Novel approaches to the symptomatic treatment of parkinsonian syndromes: alternatives and adjuncts to dopamine-replacement.</a> Curr. Opin. Neurol. 10, 340-345 (1997).</li>
<li>Besson, M. J., Graybiel, A. M., Nastuk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3H%5DSCH+23390+binding+to+D1+dopamine+receptors+in+the+basal+ganglia+of+the+cat+and+primate%3A+delineation+of+striosomal+compartments+and+pallidal+and+nigral+subdivisions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">[3H]SCH 23390 binding to D1 dopamine receptors in the basal ganglia of the cat and primate: delineation of striosomal compartments and pallidal and nigral subdivisions.</a> Neuroscience. 26, 101-119 (1988).</li>
<li>Gerfen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+and+D2+dopamine+receptor-regulated+gene+expression+of+striatonigral+and+striatopallidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">D1 and D2 dopamine receptor-regulated gene expression of striatonigral and striatopallidal neurons.</a> Science. 250, 1429-1432 (1990).</li>
<li>Schiffmann, S. N., Jacobs, O., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+restricted+adenosine+A2+receptor+%28RDC8%29+is+expressed+by+enkephalin+but+not+by+substance+P+neurons%3A+an+in+situ+hybridization+histochemistry+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal restricted adenosine A2 receptor (RDC8) is expressed by enkephalin but not by substance P neurons: an in situ hybridization histochemistry study.</a> J. Neurochem. 57, 1062-1067 (1991).</li>
<li>Hutchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neuronal+activity+in+segments+of+globus+pallidus+in+Parkinson%27s+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Differential neuronal activity in segments of globus pallidus in Parkinson's disease patients.</a> Neuroreport. 5, 1533-1537 (1994).</li>
<li>Pan, H. S., Penney, J. B., Young, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamma-aminobutyric+acid+and+benzodiazepine+receptor+changes+induced+by+unilateral+6-hydroxydopamine+lesions+of+the+medial+forebrain+bundle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Gamma-aminobutyric acid and benzodiazepine receptor changes induced by unilateral 6-hydroxydopamine lesions of the medial forebrain bundle.</a> J. Neurochem. 45, 1396-1404 (1985).</li>
<li>Pan, H. S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway+decreases+the+firing+rate+and+alters+the+firing+pattern+of+globus+pallidus+neurons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Unilateral lesion of the nigrostriatal pathway decreases the firing rate and alters the firing pattern of globus pallidus neurons in the rat.</a> Synapse. 2, 650-656 (1988).</li>
<li>Gong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li>
<li>Kreitzer, A. C., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid-mediated+rescue+of+striatal+LTD+and+motor+deficits+in+Parkinson%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid-mediated rescue of striatal LTD and motor deficits in Parkinson's disease models.</a> Nature. 445, 643-647 (2007).</li>
<li>Shen, W., Flajolet, M., Greengard, P., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomous+dopaminergic+control+of+striatal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dichotomous dopaminergic control of striatal synaptic plasticity.</a> Science. 321, 848-851 (2008).</li>
<li>Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+6-hydroxydopamine+lesioned+mice%3A+relation+to+motor+and+cellular+parameters+of+nigrostriatal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function.</a> Neurobiol. Dis. 16, 110-123 (2004).</li>
<li>Grealish, S., Mattsson, B., Draxler, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+behavioural+and+neurodegenerative+changes+induced+by+intranigral+6-hydroxydopamine+lesions+in+a+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterisation of behavioural and neurodegenerative changes induced by intranigral 6-hydroxydopamine lesions in a mouse model of Parkinson's disease.</a> Eur. J. Neurosci. 31, 2266-2278 (2010).</li>
<li>Dauer, W., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: mechanisms and models.</a> Neuron. 39, 889-909 (2003).</li>
<li>Francardo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+lesion+procedure+on+the+profiles+of+motor+impairment+and+molecular+responsiveness+to+L-DOPA+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol. Dis. 42, 327-340 (2011).</li>
<li>Jakowec, M. W., Petzinger, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-lesioned+model+of+parkinson%27s+disease%2C+with+emphasis+on+mice+and+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Med%22%5BJournal%5D)">1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned model of parkinson's disease, with emphasis on mice and nonhuman primates.</a> Comp. Med. 54, 497-513 (2004).</li>
<li>Visanji, N. P., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-Induced+Models+of+Parkinson%27s+Disease+in+Mice+and+Non-Human+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">MPTP-Induced Models of Parkinson's Disease in Mice and Non-Human Primates.</a> Curr. Protoc. Pharmacol. Chapter 5, 42-42 (2005).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav. Brain Res. 125, 109-125 (2001).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Paul, M. L., Currie, R. W., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+of+a+D1+dopamine+receptor+behavioural+response+is+dissociated+from+striatal+immediate-early+gene+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Priming of a D1 dopamine receptor behavioural response is dissociated from striatal immediate-early gene activity.</a> Neuroscience. 66, 347-359 (1995).</li>
<li>Breese, G. R., Traylor, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6-hydroxydopamine+on+brain+norepinephrine+and+dopamine+evidence+for+selective+degeneration+of+catecholamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 6-hydroxydopamine on brain norepinephrine and dopamine evidence for selective degeneration of catecholamine neurons.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 174, 413-420 (1970).</li>
<li>Breese, G. R., Chase, T. N., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+tyramine-3H+and+octopamine-3H+by+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Metabolism of tyramine-3H and octopamine-3H by rat brain.</a> Biochem. Pharmacol. 18, 863-869 (1969).</li>
<li>Frankin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , (2008).</li>
<li>Cornell-Bell, A. H., Finkbeiner, S. M., Cooper, M. S., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+induces+calcium+waves+in+cultured+astrocytes%3A+long-range+glial+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate induces calcium waves in cultured astrocytes: long-range glial signaling.</a> Science. 247, 470-473 (1990).</li>
<li>Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characterization+of+a+unilateral+6-OHDA-lesion+model+of+Parkinson%27s+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice.</a> Behav. Brain Res. 162, 1-10 (2005).</li>
<li>Tan, Y., Williams, E. A., Lancia, A. J., Zahm, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+altered+expression+of+tyrosine+hydroxylase+and+calbindin-D+28kD+immunoreactivities+and+viability+of+neurons+in+the+ventral+tegmental+area+of+Tsai+following+injections+of+6-hydroxydopamine+in+the+medial+forebrain+bundle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the altered expression of tyrosine hydroxylase and calbindin-D 28kD immunoreactivities and viability of neurons in the ventral tegmental area of Tsai following injections of 6-hydroxydopamine in the medial forebrain bundle in the rat.</a> Brain Res. 869, 56-68 (2000).</li>
<li>Thiele, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+two+different+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a model of L-DOPA-induced dyskinesia in two different mouse strains.</a> J. Neurosci. Methods. 197, 193-208 (2011).</li>
<li>Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+rodent+model+in+which+to+investigate+the+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+the+pathophysiology+of+L-dopa-induced+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a rodent model in which to investigate the molecular and cellular mechanisms underlying the pathophysiology of L-dopa-induced dyskinesia.</a> Adv. Neurol. 78, 53-61 (1998).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案描述了一种用于建立稳定的单侧6-OHDA损毁帕金森病小鼠模型的方法，该方法具有极高的可重复性、高损毁成功率以及低死亡率。6-OHDA损毁手术的成功可通过自发性旋转行为的测量进行简便评估，其中&gt;70%的同侧旋转行为提示损毁侧纹状体中多巴胺含量减少&gt;95%27。相较于通过计数黑质致密部中TH阳性细胞数量来评估损毁程度，对纹状体多巴胺水平的定量分析是衡量纹状体多巴胺耗竭程度最为准确的方法，因其可直接反映纹状体多巴胺水平28。鉴于本方案所采用的注射位点（中脑内侧前脑束，MFB）及损毁发展时间（21天）与已被充分表征的单侧6-OHDA损毁帕金森病大鼠模型一致1,4，可认为该小鼠模型与大鼠模型类似，能够重现帕金森病患者中观察到的药理学变化及脑环路改变。因此，本方法为在转基因小鼠中建立帕金森病症状模型提供了有效手段。鉴于转基因小鼠是研究分子和蛋白质在活体（in vivo）条件下从分子、细胞到整体组织水平功能的极为强大的工具，将这两种技术相结合，将极大有助于进一步阐明帕金森病症状产生的分子与细胞机制。
<p class="jove_conte...

<table><tbody><tr><td>盐酸去甲丙咪嗪</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D125</td><td>25mg/kg</td></tr><tr><td>盐酸帕吉林</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8013</td><td>5mg/kg</td></tr><tr><td>6-羟基多巴胺氢溴酸盐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H116</td><td>3mg/只小鼠</td></tr><tr><td>立体定位仪框架</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 900</td><td></td></tr><tr><td>小鼠耳杆套件</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 921 Zygoma Ear Cups</td><td> </td></tr><tr><td>小鼠门齿杆</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 923B</td><td> </td></tr><tr><td>小鼠麻醉面罩</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 923B</td><td> </td></tr><tr><td>预装引管套件（含250ml注射器）</td><td>Hamilton Co</td><td>PRMKIT 81120</td><td> </td></tr><tr><td>RN压缩接头套件（1 mm）</td><td>Hamilton Co</td><td>55750-01</td><td> </td></tr><tr><td>RN压缩接头套件中的PEEK管材&amp;lt;（1/16&lt;sup&gt;英寸&lt;/sup&gt;）</td><td>Hamilton Co</td><td>55751-01</td><td> </td></tr><tr><td>双通道小型中心接头RN连接器</td><td>Hamilton Co</td><td>55752-01</td><td> </td></tr><tr><td>鲁尔接头转小型中心接头RN适配器</td><td>Hamilton Co</td><td>55753-01</td><td> </td></tr><tr><td>1ml 25S型注射器，型号7001KH</td><td>Hamilton Co</td><td>80100</td><td></td></tr><tr><td>*33G可拆卸针头（RN），6支装。定制1英寸，45&amp;lt;&amp;#x00B0;斜面</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-05</td><td> </td></tr><tr><td>剪刀</td><td>Fine Science Tools</td><td>14084-08</td><td> </td></tr><tr><td>手术刀</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td> </td></tr><tr><td>手术刀片</td><td>Fine Science Tools</td><td>10035-20</td><td> </td></tr><tr><td>镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11608-15</td><td> </td></tr><tr><td>止血钳</td><td>Fine Science Tools</td><td>13004-14</td><td> </td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Abbott Laboratories</td><td>02241315</td><td>2-3%</td></tr><tr><td>缝线（Vicryl 4.0）</td><td>Syneture</td><td>SS-683</td><td> </td></tr><tr><td>灭菌器</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td> </td></tr><tr><td>输注泵</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PhD 22/2000</td><td> </td></tr><tr><td>针头（27G）</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td> </td></tr><tr><td>针头（25G）</td><td>BD Biosciences</td><td>305127</td><td> </td></tr><tr><td>注射器（1ml）</td><td>BD Biosciences</td><td>309692</td><td> </td></tr><tr><td>麻醉车</td><td>LEI medical</td><td>M2000</td><td> </td></tr><tr><td>拜耳新</td><td>CDMV, St. hyacinthe, QC</td><td>102207</td><td> </td></tr><tr><td>利多卡因</td><td>CDMV, St. hyacinthe, QC</td><td>3914</td><td> </td></tr><tr><td>聚维酮碘溶液</td><td>CDMV, St. hyacinthe, QC</td><td>19955</td><td> </td></tr></tbody></table>

帕金森病单侧损毁6-ohda小鼠模型的建立

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

帕金森病（PD）的单侧6-羟基多巴胺（6-OHDA）损毁大鼠模型已被证明在推动我们理解帕金森症状潜在机制方面具有不可估量的价值，因为它重现了帕金森病患者中观察到的基底神经节环路和药理学变化1-4。然而，纹状体内输出通路的皮质-纹状体突触上发生的精确细胞和分子变化仍不清楚，而纹状体作为基底神经节的主要输入区域，被认为是帕金森症状潜在病理异常发生的部位3,5。
在帕金森病（PD）研究中，随着细菌人工染色体（BAC）小鼠模型的发展，针对黑质-纹状体通路退变后基底神经节环路变化机制的理解取得了显著进展。这些BAC小鼠通过特异性启动子驱动绿色荧光蛋白在纹状体两条输出通路中过表达（直接通路：eGFP-D1；间接通路：eGFP-D2 和 eGFP-A2a）8，使得这两条通路可被独立研究。例如，近期研究表明，在帕金森病小鼠模型中存在突触可塑性的病理改变9,10。然而，这些研究使用的是幼年小鼠和帕金森病的急性模型。目前尚不清楚在具有稳定6-OHDA损毁的成年大鼠中所观察到的变化是否同样存在于这些模型中。其他研究团队曾尝试通过损毁内侧前脑束（MFB）建立稳定的单侧6-OHDA损毁成年小鼠PD模型，但该实验的死亡率极高，仅有14%的小鼠存活21天或更长时间11。较新的研究通过黑质内注射建立损毁模型，不仅死亡率较低，且多巴胺能神经元损失超过80%&gt;，但这些研究中左旋多巴（L-DOPA）诱导的异动症表达存在较大变异性11,12,13,14。另一种广泛使用的PD小鼠模型是MPTP损毁小鼠模型15。尽管该模型在评估潜在神经保护剂方面具有重要价值16，但在揭示PD症状潜在机制方面适用性较差，因为该模型常难以诱导出明显的运动功能障碍，且损毁程度存在较大个体差异17, 18。
本文通过将6-OHDA直接注射至内侧前脑束（MFB），建立了一种稳定的单侧6-OHDA损毁帕金森病（PD）小鼠模型，该模型可导致纹状体多巴胺水平持续减少&gt;95%（通过高效液相色谱法测定），并产生在已充分表征的单侧6-OHDA损毁PD大鼠模型中所观察到的行为失衡。这一新建立的PD小鼠模型将有助于深入理解帕金森症状发生机制，成为一项重要的研究工具。

本文描述了一种在小鼠中进行单侧内侧前脑束6-羟基多巴胺（6-OHDA）损毁的实验方案。该方法死亡率较低（13.3%），存活小鼠中有89%表现出纹状体多巴胺含量减少&#62;95%，且对侧旋转偏差达90.63±4.02%，偏向损毁侧。

帕金森病单侧损毁6-OHDA小鼠模型的建立

帕金森病（PD）的单侧6-羟基多巴胺（6-OHDA）损毁大鼠模型已被证明在推动我们……

本实验的总体目标是建立一种帕金森病小鼠模型。首先准备手术所需的药物，随后组装手术器械，接着进行单侧六羟基多巴胺损毁手术，并在术后给予适当护理。六只经羟基多巴胺损毁的动物可用于行为学实验。最终结果表明，单侧内侧前脑束的多巴胺耗竭程度超过95%。该操作过程中，个体必须注意的两个最重要方面，首先是适当的术后护理，以确保动物存活。其次，注意准备用于输注6-羟基多巴胺的设备，以确保神经毒素的递送完整。开始此操作前，先将手术器械在高压灭菌器中灭菌。接着，使用异丙醇彻底清洁所有台面和设备表面。然后通过在笼底铺上纸巾来准备术后小鼠恢复笼。将笼子放置在加热灯下或加热垫上，以设置麻醉推车。确保氧气进气管已连接并打开，且异氟烷储液罐已完全装满。随后，将氧气流速设置为1%，异氟烷浓度设置为2%至4%。下一步是组装输注装置。将一个RN金属螺母旋入峰流管的一端，接着装入峰流杯雌接头。然后安装标准PFA雌接头，调整两个雌接头的方向，使标准PFA雌接头上的锥形部分能够顺利插入峰流杯雌接头的对应配合部位。然后将配对好的峰形杯和标准PFA进样管分别插入双小接头RN连接器的两端，并拧紧双小接头RN连接器另一端的RN金属螺母。插入一支33号注射针，将针头穿过其中一个RN金属螺母并拧紧固定。确保33号针头与双小接头RN连接器呈180度角。然后在峰流路管的另一端，先旋入一个RN金属螺母，随后接上峰杯feral。接着将标准PFA feral插入第二个双小接头RN连接器的较深凹槽内，并拧紧RN金属螺母以固定连接。接下来，在第二个小型双路RN连接器的另一端，将诱饵插入小型RN接头，并拧紧诱饵的RN金属螺母，以确保连接牢固。输注装置的安装现已完成。另一个准备步骤是为输注装置预充液体。首先，用无菌水填充250微升和1微升的Hamilton注射器，确保其中无气泡。然后将250微升注射器连接到诱饵适配器上，并推动250微升注射器的推杆，使水从管路另一端的33号注射针头中释放出来。在将250微升注射器从液路接头中拔出的同时，继续推动水流通过系统。在液路接头末端留有一小滴水珠后，按压1微升注射器的推杆，直至排出一小滴水珠。随后，小心地将1微升注射器插入液路接头中。确保1微升注射器上的水珠与引物适配器上的水珠相接触。然后将1微升注射器完全插入引物适配器中，并确保小型双联RN接头耦合器内无气泡。现在将灌注装置固定到立体定位仪框架上，并将输注泵夹住带有33号注射针头的小型双联RN接头耦合器，固定于立体定位仪框架的操纵臂上。然后将1 µL微量注射器固定到灌流泵上。之后设置输液泵，使灌流速率为0.1 µL/min，在手术前30分钟开始灌流。称量动物并记录其体重。通过腹腔注射给予小鼠2.5毫克/毫升盐酸多巴胺与0.5毫克/毫升盐酸帕林混合液，剂量为10毫升/千克。随后，在耳杆和门齿杆下方放置一个温热的加热板，以维持动物在手术期间的体温，并使动物保持理想高度，以适配立体定位仪的耳杆和门齿杆。在注射盐酸多巴胺与盐酸帕林混合液后15分钟开始操作。将小鼠放入密闭的麻醉仓中，通过吸入异氟烷进行麻醉。当小鼠对后肢夹捏无反应且无眨眼反射时，表明麻醉已达到充分程度。然后剃除小鼠头部顶部的毛发。此时将小鼠置于立体定位仪中，将门齿杆插入其口腔，并在其面部放置麻醉面罩。然后调节异氟烷的流速。使用棉球将局部镇痛药利多卡因直接涂抹于皮肤。调节门齿杆和耳棒，使颅骨顶部处于水平位置。然后用碘伏溶液对皮肤进行消毒。接着插入耳棒。当头部完全放平且无法向任何方向移动时，表明耳棒已插入到位。随后，使用手术刀片沿头部中线切开，并将皮肤拉开。用纱布垫擦干颅骨表面。将1微升注射器的推杆向下推，然后将33号注射针插入含有15毫克/毫升溶液的1毫升试管中。用锡箔纸包裹六羟基多巴胺溶液。在保持33号注射针浸没于六羟基多巴胺溶液中的同时，缓慢回拉针栓。接着，将注射针尖推进至B区黑质致密部（bgma），并释放少量六羟基多巴胺溶液，以形成一个小液滴。然后缓慢降低注射针尖至枕骨大孔。当珠子接触到小脑延髓池时，停止推进针头并记录这些坐标。将注射针在背侧方向回撤两毫米，并沿矢状缝向头侧方向移动至人字缝。当针头位于Lambda点上方时，从注射针中挤出少量6-羟基多巴胺溶液，形成一个小液滴。然后缓慢降低针尖至Lambda点。当液滴接触Lambda点时，停止下针，并记录这些坐标。BMA 和 Lambda 的内外侧坐标以及背腹侧坐标应保持一致。若不一致，需相应调整门齿杆。对于前后坐标以及内外侧坐标的耳杆，将针头移至注射坐标位置。在相对于rema后1.2毫米、内侧1.1毫米处，从注射针头中挤出少量溶液，形成一个小液滴。将该小液滴降至颅骨表面，以标记钻孔位置。随后撤回针头，使用25号针头在颅骨上钻孔。将注射针回至注射坐标位置，并沿背腹方向插入负五毫米。随后，以每分钟0.1微升的速度，向内侧前脑束单侧注入0.2微升的6-羟基多巴胺或溶剂对照物。完成6-羟基多巴胺或溶剂对照物注射后，将针头留置原位五分钟，以允许其从注射部位充分扩散。此后，缓慢撤出针头，用三针缝合头皮切口，然后皮下注射1毫升乳酸林格液。最后，将动物从立体定位仪上取下，放入恢复笼中，直至意识恢复。在六羟多巴胺损毁手术后15至21天。当神经毒素引起的细胞死亡达到完全程度时，可通过测量自发的360度旋转行为来评估六羟基多巴胺损毁的效果。在此行为评估中，六羟基多巴胺诱导的多巴胺耗竭超过95%的小鼠，其同侧（IP）翻转旋转次数显著多于部分六羟基多巴胺损毁及假手术组小鼠。通过将每只小鼠的纹状体（SAL）多巴胺水平与其自发同侧翻转旋转百分比进行相关性分析发现，表现出70%或更高同侧翻转旋转率并接受六羟基多巴胺损毁的小鼠，其纹状体多巴胺损失超过95%。观看本视频后，您应能充分掌握如何在小鼠中有效实施立体定位及脑室内灌注控制的6-羟基多巴胺损毁操作，该方法可实现超过95%的多巴胺耗竭水平。此外，您还应理解如何对小鼠进行帕金森样行为学评估。

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1单侧损毁6  - 羟基多巴胺帕金森病小鼠模型的发展

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帕金森病大鼠模型中左旋多巴诱导异动症的诱导与评估

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