向小鼠视网膜下腔递送荧光染料

取一只麻醉后的小鼠，修剪其胡须以方便观察眼睛。

将小鼠置于显微镜下的加热垫上，以维持其体温。

散大瞳孔以方便观察视网膜，然后润滑眼球以防止干燥。

捏住结膜（一层透明膜），并做切口。

在旋转眼球的同时，切开下方的滕囊并去除结缔组织层。

这暴露了巩膜（眼球的外层），并可接近视神经附近的注射位点。

制作巩膜切口，将含有荧光染料的注射器插入视网膜感光细胞层与视网膜色素上皮层之间的视网膜下腔。

注射染料以制造可控的视网膜脱离，然后撤出针头。

冲洗眼睛并使用抗生素以预防感染。

让小鼠恢复并给予镇痛处理。小鼠已准备好进行成像，以确认视网膜下注射成功。

开始此操作时，修剪麻醉小鼠的胡须以方便观察，并使用循环水垫将动物体温维持在37摄氏度。接着，用2.5%去氧肾上腺素滴眼液散瞳。

然后滴加甲基纤维素眼药水以防止干燥，并尽量减少麻醉引起的暂时性白内障。手术前对器械进行灭菌。之后，在生物安全柜中配制稀释的荧光素溶液。用适当剂量的荧光素填充注射器。

接下来，进行脚趾夹捏以确认动物已深度麻醉，并将小鼠摆放至待注射的眼睛朝上且在解剖显微镜下清晰可见的位置。用一对尖头镊子轻轻夹住颞侧结膜。

然后使用弯头Vannas剪刀做约90度的环形切口。在下方的Tenon囊上重复此操作。接着，用细尖镊子切除周围结缔组织，同时将眼球向鼻侧旋转。操作至距视神经约0.5毫米的注射部位时，需格外小心，避免损伤眶后静脉窦。

一个关键步骤是暴露注射部位，这需要在不损伤眼球本身或相关结构的情况下旋转眼球，尤其要避免损伤眶内血囊。

在此操作中，使用22.5度的眼科刀轻轻刮擦眼球杯的巩膜，于注射部位制作一个小切口。该切口应仅需足够大，以允许针头尖端穿过巩膜即可。

接下来，将33号斜面针头插入巩膜切口，斜面朝向并与视网膜平行。通过均匀缓慢地推动针栓，注入所需量的0.01%荧光素钠溶液。

请注意，当针头位于视网膜下腔时，按压注射器推杆会感到轻微阻力。如果针头刺穿了视网膜，则不会感到阻力；但如果针头未穿透巩膜或视网膜色素上皮（RPE），则会感到较大阻力。

另一个关键步骤是靶向视网膜下腔的注射。此操作必须在不穿透神经感觉层视网膜进入玻璃体腔的情况下完成。

拔出针头前等待数秒，以尽量减少回流。

随后，用无菌生理盐水冲洗眼睛，并确保眼球已转回至正常位置。然后在注射眼的角膜表面涂抹一层厚厚的三种抗生素眼用软膏。

随后，将小鼠放入清洁的单独笼子中进行恢复。在麻醉恢复期间监测其呼吸和体温，并确认小鼠能够维持胸卧位。进行其他适当的术后监测和治疗，包括皮下注射卡洛芬以进行术后疼痛管理。