在大鼠模型中静脉注射重组腺相关病毒载体

0 次观看3:29 分钟 • August 7th, 2025

将一只已麻醉的大鼠侧卧放置,使其尾巴暴露出来。

找到尾部外侧静脉,沿其长度确定注射部位,并对局部区域进行消毒。

在注射部位上方施加轻微压力以扩张静脉。

取一支含有携带目的基因的重组腺相关病毒(AAV)载体的注射器。

将针头与静脉对齐,并刺入尾部皮肤。

解除对静脉的压力,以恢复正常的血流。

将针头插入尾静脉,并缓慢注射病毒。

注射后,拔出针头,按压注射部位以止血,并监测大鼠的恢复情况。

通过侧尾静脉将病毒注入血液,病毒随血液循环经过心脏进入大脑,最终到达神经元。

在神经元内部,病毒进入细胞核,释放其遗传物质,并促进神经治疗应用中靶蛋白的产生。

使用麻醉系统对大鼠进行适当的麻醉。通过夹捏脚趾无反应来确认麻醉深度足够。随后,将大鼠侧卧置于操作区域,并通过鼻罩维持麻醉。当大鼠侧卧时,应使一侧的尾静脉朝上。

注射部位位于尾部长度的三分之二处。用酒精消毒棉片擦拭注射部位。用一根手指紧贴尾侧静脉,牢固地夹住注射区域稍上方的尾部,以使静脉扩张。针头斜面向上,沿可见尾静脉的走向对齐针头方向。

穿刺尾静脉时,需格外小心,避免伤及另一只手的手指,该手正握住尾巴并压迫尾静脉。松开对尾静脉的压力,以恢复正常的血流。然后将针头插入静脉。为确认针头已进入尾静脉,可轻轻回抽针栓。若针头位于静脉内,血液将流入针头中。

必要时重新调整针头位置后,通过手握注射器末端紧贴尾部来固定针头。以每秒约20 µL的速度将载体缓慢注入尾部。

如果注射效果不佳,动物将仅被部分转导,实验结果可能无法使用。然而,通过练习,良好的注射操作具有很高的可重复性和可靠性。

如果已注射载体,从尾部拔出针头,并用纱布垫按压注射部位 30 至 60 秒,以帮助止血。关闭异氟烷麻醉和氧气。监测大鼠直至其恢复意识,然后将其放回笼中。将可能被 AAV 污染的材料弃置到适当的生物危害容器中,并用 70% 乙醇清洁工作台。