Name: Epstein - Barr病毒生长转化的淋巴细胞系的建立 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: 学习利用Epstein-Barr病毒转化人B细胞建立淋巴母细胞系的方法。通过流式细胞术检测CD23高表达CD58阳性细胞，可在感染后三至四天预测转化成功，为病毒学与免疫学研究提供高效实验方案。

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本研究由NIH资助，资助编号为K08 AI062732、K12 HD001401和1UL1RR024139-02，以及查尔斯·H·胡德基金会向S.B.-M.提供的儿童健康研究资助，同时由纽约州立大学石溪分校研究基金会资助。

1. EBV 毒株制备
<ol>
	<li>采用无菌技术，将指数生长期的 B95-8 细胞（ATCC # CRL 1612；13）以 3 × 105 个细胞/ml 的密度传代培养于 75 cm2 组织培养瓶中。细胞培养于完全 RPMI 1640 培养基中，该培养基含有 10% 经热灭活的胎牛血清（FBS）、青霉素/链霉素（分别为 100 U/ml 和 100 μg/ml）以及两性霉素 B（0.5 μg/ml），在 37°C、5% CO2 条件下培养。</li>
	<li>48 小时后，将细胞重悬于新鲜的完全 RPMI 1640 培养基中，密度为 1 × 106 个细胞/ml。为诱导病毒产生，在标准 CO2 培养箱中用 20 ng/ml 的佛波醇-12-十四烷酰-13-乙酸酯（TPA）刺激细胞 1 小时。随后用 RPMI 1640 洗涤细胞三次，以去除 TPA。</li>
	<li>将细胞重悬于原始体积的完全 RPMI 1640 培养基（来自步骤 1.2）中，并将培养瓶置于 CO2 培养箱中继续培养 96 小时。该方法已被证实可产生高滴度的感染性病毒颗粒6。</li>
	<li>在 4°C 条件下以 600 × g 离心 10 分钟，分离含 EBV 的细胞培养上清液与细胞。将上清液经 0.45 微米滤膜过滤，分装后于 -70°C 保存，可稳定保存一年以上。 
	替代方法：可从 ATCC（VR-1492）获取含 EBV 的 B95-8 细胞上清液，并按照 ATCC 推荐的稀释比例使用。</li>
</ol>
2. 外周血单个核细胞（PBMC）的分离
<ol>
	<li>使用肝素化注射器或肝素化采血管从供体采集10 ml血液。在50 ml锥形管中，于室温下用20 ml PBS稀释血液。</li>
	<li>在稀释后的血液下方小心加入15 ml Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液。于室温下以225 × g 离心30分钟，不启用刹车。</li>
	<li>收集中间白膜层，并转移至新的50 ml锥形管中。用PBS补足体积至50 ml，于室温下以600 × g离心10分钟。</li>
	<li>倒去上清液。将沉淀细胞重悬于50 ml PBS中，于室温下以600 × g 离心10分钟进行洗涤。以相同方式再洗涤两次。</li>
	<li>将洗涤后的细胞重悬于1 ml完全RPMI培养基中。取5 μL细胞悬液，用台盼蓝稀释成1/10稀释液，使用血细胞计数板计数活细胞数。</li>
	<li>在25 cm2组织培养瓶中，用完全RPMI培养基调整体积，使细胞浓度达到2 × 106/ml。</li>
</ol>
3. EBV 感染
<ol>
	<li>将FK506（AG Scientific）加入2.6中的细胞悬液，使其终浓度为20 nM。将培养瓶置于37°C的CO2培养箱中孵育1小时。</li>
	<li>快速解冻一份EBV。从培养箱中取出培养瓶，按1/10稀释度将EBV加入细胞中。通常此稀释度可提供50-100的感染复数（MOI）。轻轻晃动培养瓶混匀，然后将其直立放回37°C的CO2培养箱中。</li>
</ol>
请注意，用于预测成功结果的第4步为可选步骤。如果需要执行第4步，则需额外培养一管未感染的外周血单个核细胞（PBMC），浓度为2 × 106 个细胞/ml，作为对照。
4. 鉴定增殖中的细胞群体（可选步骤）
<ol>
	<li>配制 FACS 缓冲液：PBS + 5% FBS。4°C 保存。</li>
	<li>为第 4.6 步染色细胞，分别配制以下各 50 μL 体积的抗体混合液。抗体稀释应在含 1 mg/ml 小鼠 IgG（Sigma）的 FACS 缓冲液中进行，以抑制抗体的非特异性结合。
	<ol class="lroman">
		<li>用 PE 标记的抗 CD23 抗体单染（1/50 稀释）</li>
		<li>用 FITC 标记的抗 CD58 抗体单染（1/50 稀释）</li>
		<li>用 PE-Cy5 标记的抗 CD19 抗体单染（1/50 稀释）</li>
		<li>同时用抗 CD23、CD58 和 CD19 抗体三重染色（每种抗体均 1/50 稀释）</li>
		<li>用与 CD23-PE 匹配的 PE 标记同型对照抗体单染（浓度与抗 CD23 抗体相同）</li>
		<li>用与 CD58-FITC 匹配的 FITC 标记同型对照抗体单染（浓度与抗 CD58 抗体相同）</li>
		<li>用与 CD19-PE-Cy5 匹配的 PE-Cy5 标记同型对照抗体单染（浓度与抗 CD19 抗体相同）</li>
		<li>用三种同型对照抗体同时三重染色。</li>
	</ol>
	将上述抗体混合液暂时避光保存于 4°C。</li>
	<li>EBV 暴露后第三天，轻轻摇动培养瓶以获得更均匀的细胞悬液。从培养瓶中取出 2 ml 至 2 ml 离心管中。在室温下以 3000 rpm 离心 3 分钟。</li>
	<li>吸除上清液，将细胞重悬于 FACS 缓冲液中，浓度为 5 × 106 至 1 × 107 个细胞/ml。</li>
	<li>将八份 50 μl 的细胞悬液分别移入单独的离心管或 96 孔 V 型底板中。以 1500 × g 离心 3 分钟。</li>
	<li>弃去上清液，涡旋振荡离心管或板。将每管/孔中的细胞重悬于 50 μL 含适当抗体稀释液（按 4.2 步骤配制）的 FACS 缓冲液中。</li>
	<li>将离心管或板置于冰上避光孵育 30 分钟。以 3000 rpm 离心 3 分钟，去除上清液，加入 200 μL FACS 缓冲液。再次离心并去除上清液完成洗涤。重复此洗涤步骤共三次。</li>
	<li>将细胞重悬于 200 μL FACS 缓冲液中，使用流式细胞仪获取数据，每管采集 20,000 个事件。</li>
	<li>使用 WinMDI（适用于 PC 的 FACS 数据分析免费软件）分析数据。根据前向散射和侧向散射图选出生存细胞群体。然后，通过与抗 CD19 抗体匹配的同型对照抗体染色的细胞进行比较，选出生存细胞中 CD19+（B 细胞标志物）表达的细胞。以 CD23 荧光强度为横轴、CD58 荧光强度为纵轴，绘制 CD19+ 生存 B 细胞的散点图。通过与 EBV 暴露后经匹配同型对照抗体染色的细胞比较，确定 CD23+ 和 CD58+ 细胞。在 EBV 暴露的培养物中出现 CD23hiCD58+ 细胞（图 2C），可预测 EBV 感染的生长转化细胞成功扩增。相比之下，当细胞未暴露于 EBV（图 2A）或暴露于非永生化型 EBV 毒株时（图 2B），不会出现 CD23hiCD58+ 细胞。实验已证实 CD23hiCD58+ 细胞可发生增殖并最终建立淋巴母细胞样细胞系（LCL）（14）。</li>
</ol>
5. LCL 的扩增与冷冻保存
<ol>
	<li>通过光学显微镜观察细胞：EBV 感染一周后，可在光学显微镜下观察到细胞簇。图 3 显示了培养瓶中早期显微细胞簇的一个示例（图 3B）。</li>
	<li>随着时间推移，显微镜下可见的细胞簇逐渐增大，最终在培养瓶中肉眼可见细胞团块。图 3C 显示了已建立的淋巴母细胞样细胞系（LCL）在光学显微镜下的较大细胞簇。</li>
	<li>细胞换液：在第 12 天，将培养瓶中的培养基体积加倍。随后使用完全 RPMI 培养基将培养体系扩大 2–3 倍。</li>
	<li>细胞换液频率应根据细胞生长速度确定。当培养基变黄时，通常需要按上述方法更换培养基，一般每周一次。然而，某些细胞系可能需要更频繁或更少的换液。在接下来的几周内，将培养体积逐步扩大至 75–100 ml。</li>
	<li>冷冻保存：冻存细胞时，在室温下以 600 × g 离心 10 分钟。弃去上清液，将细胞沉淀重悬于预冷的冻存液中（含 90% FBS 和 10% 二甲基亚砜），细胞密度为 1 × 107 个细胞/ml。将冻存管置于液氮中保存。</li>
</ol>
6. 代表性结果：
成功的结局可通过 CD23hiCD58+ 细胞的存在来预测。在暴露于 EBV 后第 3-4 天，活细胞中约有 2-3% 应具有此表型（图 2C）。暴露于 EBV 后观察到的其他 CD23+、CD23-、CD58+ 和 CD58- 细胞亚群增殖极少14。未感染的细胞（图 2A）以及暴露于来自 HH514-16 细胞的 EBV 的细胞（图 2B），由于该 EBV 为非永生化毒株，均未显示 CD23hiCD58+ 细胞的存在。
您也可以通过光学显微镜观察细胞，以监测实验是否成功：如前所述，在EBV感染后一周内，可在光学显微镜下观察到培养瓶中出现少量细胞簇（图3B）。随着时间推移，细胞逐渐发育为LCL，显微镜下的细胞簇会变得更大（图3C），最终在培养瓶中可肉眼观察到细胞团块。
<img alt="EBV转化过程示意图；PBMC培养、冷冻保存、淋巴母细胞样细胞系。" src="/files/ftp_upload/3321/3321fig1.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="图1"> 
图1. 淋巴母细胞样细胞系的建立与冷冻保存流程。外周血通过Ficoll密度梯度离心分离，从已形成的密度梯度中获取位于白膜层的PBMC，先用FK506处理，随后加入EBV。经EBV处理的细胞在37°C、5% CO2条件下培养，以建立并扩增淋巴母细胞样细胞系（LCL），用于后续冷冻保存。
<img alt="流式细胞术散点图：CD23 与 CD58 标记物分析，比较 EBV 暴露条件。" src="/files/ftp_upload/3321/3321fig2.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="图 2"> 
图 2. 鉴定在暴露于 EBV 后预期发生增殖的一群 B 细胞亚群。在第 3 天收集未感染的 PBMC（A）或在 FK506 存在下暴露于来源于 HH514-16 细胞（B）或 B95-8 细胞（C）的 EBV 的 PBMC。细胞使用针对 CD19、CD23 和 CD58 的荧光染料偶联抗体进行染色。在圈选活细胞后，分析未感染（A）和 EBV 暴露（B 和 C）的 CD19+ B 细胞中 CD23 和 CD58 的表达情况。仅在暴露于具有转化能力的 EBV（来源于 B95-8 细胞）的细胞中观察到一群表达 CD58 且高水平表达 CD23（CD23hiCD58+）的 B 细胞亚群。
<img alt="显示不同汇合度下细胞集落的细胞培养显微图像；细胞生长模式分析。" src="/files/ftp_upload/3321/3321fig3.jpg" data-altupdatedat="1761809329000" data-alt="Figure 3"> 
图3. EBV感染细胞中细胞簇的可视化观察。PBMC经FK506处理后感染EBV。通过相差显微镜（10倍放大）在感染后一周观察未感染（A）和EBV暴露（B）的细胞。C显示五周龄的淋巴母细胞样细胞系。

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<li>Tosato, G., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+Epstein-Barr+virus+%28EBV%29-immortalized+B+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Generation of Epstein-Barr virus (EBV)-immortalized B cell lines.</a> Current Protocols of Immunology. Chapter 7, 22-22 (1991).</li>
</ol>

未声明利益冲突。

本文所述方法利用供者的外周血，通过快速永生化和冻存技术生成淋巴母细胞样细胞系（LCL）。通过使用T细胞免疫抑制剂FK506以及高滴度的感染性病毒，我们能够促进外周血单个核细胞中EB病毒（EBV）感染的B细胞增殖。这些干预措施提高了该方法的效率，从而实现细胞的快速扩增，用于后续实验。
传统上，EBV感染后约一周，通过光学显微镜观察细胞簇的形成来监测生长转化6, 15。然而，细胞聚集并非EBV介导的生长转化的特异性指标。我们此前已通过流式细胞术稳定地鉴定出增殖的细胞群体14，该方法可在B细胞感染EBV后第三天即准确且特异地判断转化是否成功。

<table><tbody><tr><td>两性霉素B</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>BP 928-250</td><td></td></tr><tr><td>二甲基亚砜</td><td>西格玛奥德里奇</td><td>D 2650</td><td></td></tr><tr><td>热灭活胎牛血清</td><td>西格玛奥德里奇</td><td>F 4135</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll Hypaque 淋巴细胞分离液</td><td>Mediatech公司</td><td>25-072</td><td></td></tr><tr><td>FK506</td><td>A.G Scientific</td><td>F 1030</td><td></td></tr><tr><td>小鼠血清来源的IgG</td><td>西格玛奥德里奇</td><td>I 8765</td><td></td></tr><tr><td>与PE偶联的小鼠抗人CD23抗体</td><td>BD生物科学</td><td>555711</td><td></td></tr><tr><td>与PE偶联的小鼠同型IgG1抗体</td><td>BD生物科学</td><td>554680</td><td></td></tr><tr><td>与FITC偶联的小鼠抗人CD58抗体</td><td>派瑞，赛默飞世尔科技</td><td>MA1-82159</td><td></td></tr><tr><td>与FITC偶联的小鼠同型IgG1抗体</td><td>BD生物科学</td><td>550616</td><td></td></tr><tr><td>与PE-Cy5偶联的小鼠抗人CD19抗体</td><td>BD生物科学</td><td>555414</td><td></td></tr><tr><td>与PE-Cy5偶联的小鼠同型IgG1抗体</td><td>Dako</td><td>X 0955</td><td></td></tr><tr><td>青霉素/链霉素</td><td>吉布科，生命技术公司</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640培养基</td><td>西格玛奥德里奇</td><td>R 8758</td><td></td></tr><tr><td>十四烷酰佛波醇乙酸酯（TPA）</td><td>Calbiochem</td><td>407952</td><td></td></tr><tr><td>FACS缓冲液（1×磷酸盐缓冲液 + 5%胎牛血清）</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

建立爱泼斯坦-巴尔病毒生长转化的淋巴母细胞样细胞系

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

B细胞感染EB病毒（EBV）后会引发增殖并随之发生永生化，从而建立淋巴母细胞样细胞系（LCL） 体外由于LCL潜伏感染EBV，因此可作为研究EBV潜伏感染以及病毒驱动的B细胞增殖和肿瘤发生的模型系统。1LCL 已被用于多种免疫学检测中以呈递抗原2, 3此外，LCL 可用于生成人单克隆抗体4, 5 并在获取原始生物材料受限时提供一种潜在的无限来源6, 7.
已有多种方法被用于建立LCL。早期的方法包括使用有丝分裂原，如植物血凝素、脂多糖8和美洲商陆有丝分裂原9，以提高EBV介导的永生化效率。近年来，其他研究者则使用环孢素A等免疫抑制剂来抑制T细胞对感染B细胞的杀伤作用7, 10-12。
从EBV感染到建立细胞系需要相当长的时间，这促使人们需要更快、更可靠的方法来实现EBV驱动的B细胞生长转化。通过联合使用高滴度EBV和一种免疫抑制剂，我们能够持续地感染外周血中的B细胞，并成功转化生成淋巴母细胞样细胞系（LCL）。该方法仅需少量外周血单个核细胞，在体外（in vitro）进行感染后即可观察到细胞簇的形成。在T细胞免疫抑制剂FK506存在的情况下，EBV与CD23共同作用可促进转化。传统上，增殖性B细胞的生长通常通过在EBV感染约一周后显微镜下观察细胞微小簇来监测。数周后，LCL的细胞团块可肉眼可见。本文描述了一种检测方法，可在显微镜下尚未观察到细胞簇之前，早期判断EBV介导的生长转化是否成功。感染后第三天即可观察到CD23hiCD58+细胞，提示转化成功。

我们介绍了一种利用EB病毒（Epstein-Barr virus）生成转化B细胞系的方法。同时，我们还展示了一种新颖的检测方法，可在感染后仅三天就识别出将要发生转化的B细胞。

B细胞感染EB病毒（EBV）可导致其增殖并继而发生永生化，从而建立淋巴母细胞样细胞系……

本实验的总体目标是生成EB病毒永生化的人B淋巴细胞系，即淋巴母细胞样细胞系（LCL）。该过程首先从人外周血中分离单个核细胞。接下来，在感染 EB 病毒后的三到四天，在 FK506 和免疫抑制剂存在的条件下，用 eps EB 病毒感染细胞，此时会出现一个细胞亚群，其标志为 CD23 高表达、CD58 阳性，并预测将发生 CD23 高表达的增殖。可通过流式细胞术对 CD23 高表达、CD58 阳性细胞进行计数，以预测实验成功结果。增殖的细胞还可通过成功转化的细胞培养物中形成的淋巴母细胞系簇，在显微镜下及肉眼水平进一步识别。最后一步是扩增淋巴母细胞系以进行冷冻保存。在我的实验室中，我们建立淋巴母细胞系（LCLs）以研究宿主与EB病毒之间的相互作用。淋巴母细胞系在科学界也具有广泛的普遍意义，尤其对病毒学家、免疫学家和癌症生物学家而言。作为 Macintosh 实验室的一名博士后 O 学者，我将演示建立淋巴母细胞系的操作流程。从供者体内抽取 10 毫升血液后，将含肝素的血液加入一个 50 毫升的锥形管中，然后以 1:2 的比例稀释。向管中加入 20 毫升室温 PBS，随后在稀释后的血液下方轻缓加入 15 毫升 FICO HIA 淋巴细胞分离液，然后在室温下以 225 × g 离心 30 分钟（不使用刹车），以形成密度梯度。接下来，移除血沉棕黄层，并将其转移至一个新的50毫升锥形管中。用PBS补足体积至50毫升，然后在600 × g离心10分钟，使细胞沉淀。倒掉上清液，将沉淀重新悬浮于50毫升PBS中，再在相同条件下洗涤细胞两次。现在将细胞重悬于1毫升完全RPMI培养基中。取5微升细胞与台盼蓝按1:10比例稀释，用血细胞计数板计数活细胞，然后用完全RPMI培养基调整体积，使细胞浓度达到每毫升2×10⁶个细胞，并将细胞转移至25平方厘米的组织培养瓶中。将EB病毒（Epstein-Barr virus）加入含有FK 506的组织培养瓶中，使其终浓度为20 µM，然后将培养瓶置于37°C、5%二氧化碳培养箱中孵育1小时。在细胞即将完成孵育时，迅速解冻一份从B95-8细胞中收获的EB病毒等分试样。随后将培养瓶从培养箱中取出，以1:10的稀释比例将EB病毒加入细胞中，轻轻晃动培养瓶使EB病毒充分混入溶液，然后将瓶盖稍松（若使用非透气型培养瓶）并直立放回培养箱中，继续培养2至3周，之后进行细胞扩增并用于冷冻保存。EB病毒（Epstein Barr virus）感染一周后，通过光学显微镜可观察到细胞簇，如本图所示的早期显微细胞簇。随着时间推移，显微镜下的细胞簇逐渐增大，最终在培养瓶中肉眼可见团块状结构，如本图所示，可观察到较大的淋巴母细胞样细胞系（LCL）簇。在第12天，为维持细胞生长，应将培养瓶中的支持性培养基体积加倍。当培养基变为黄色时（通常约为每周一次），即需进行换液，以促进细胞扩增，此时应将培养液体积增加两至三倍。在接下来的几周内，使用完全RPMI培养基将培养物体积扩增至70至100毫升，置于75平方厘米的培养瓶中，以获得可用于冷冻保存的细胞。成功的培养结果可通过CD23阳性及高表达CD58的细胞存在来预测，如该散点图所示：在暴露于EB病毒（Epstein-Barr virus）后的第3至第4天，约有2%至3%的活细胞具有此表型。在暴露于EB病毒后，其他CD23阳性、CD23阴性、CD58阳性及CD58阴性亚群细胞的增殖极为有限；而未感染的细胞或感染了非永生化型EB病毒的细胞则不表现出高表达CD23。CD58 阳性细胞。也可通过光学显微镜观察这些细胞。如前所述，在感染 Epstein-Barr 病毒一周内，通过光学显微镜即可在培养瓶中观察到成簇的小群细胞。随着时间推移，细胞逐渐发育为淋巴母细胞样细胞系（LCL），显微镜下的细胞簇会变得越来越大，以至于在培养瓶中可肉眼观察到细胞团块。好了。通过观看本视频，您应已充分了解如何从人血液中分离外周血单个核细胞，以及如何从人B细胞生成EB病毒转化的淋巴母细胞样细胞系，尽管其他实验室也已报道过淋巴母细胞样细胞系的建立方法。本方案的优势在于，它为研究人员提供了一种方法，可在B细胞感染EB病毒后三到四天内，尽早预测实验是否成功。

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Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

Epstein - Barr病毒生长转化的淋巴细胞系的建立

一种快速、简便且经济高效的方案，用于制备供体来源的多病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞（rCTL），以输注给存在CMV、Adv或EBV感染风险的异基因造血干细胞移植（HSCT）受者。该制备工艺符合GMP标准，有助于推动T细胞免疫治疗在专科中心以外的更广泛应用。...

多病毒特异性T细胞的制备用于预防和治疗异基因造血干细胞移植后病毒感染

本文描述了首个符合药品生产质量管理规范（GMP）的从脐带血中制备病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的方法，脐带血是主要含有初始T细胞的来源。...

扩增靶向巨细胞病毒、EB病毒和腺病毒的脐带血细胞毒性T淋巴细胞

来源：Xu, C., et al. 建立慢性活动性EB病毒感患者NK细胞和T细胞系的高效简便方法。J. Vis. Exp.

利用流式细胞术对EBV感染的细胞系进行表型分析

卡波西肉瘤（KS）是一种由致癌病毒人类疱疹病毒8型/卡波西肉瘤相关疱疹病毒（HHV-8/KSHV）感染引起的肿瘤。此处描述的内皮细胞培养模型特别适用于研究KSHV转化宿主细胞的机制。...

一个 体外 研究卡波西肉瘤相关疱疹病毒诱导细胞转化的模型

开发了一种简单的红细胞裂解方法用于建立B淋巴母细胞系（B-LCLs），该方法具有高永生化效率，仅需少量血液样本，并可缩短从起始到冻存所需的时间。...

一种简单的红细胞裂解方法用于建立B淋巴母细胞样细胞系

建立了一种高效获取慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）患者NK细胞和T细胞克隆的简易方法，该方法仅需少量外周血和低剂量IL-2。...

一种从慢性活动性EB病毒 感染患者建立NK和T细胞系的高效简便方法

本文描述了用于研究在EB病毒永生化的人B淋巴细胞以及由肌肉活检获得的卫星细胞分化成的肌管细胞中内源性表达的RYR1突变功能效应的方法。...

内源性表达的人源RYR1变异体的功能表征

我们介绍一种结合免疫磁珠和荧光激活细胞分选的方法，用于分离和分析外周血单个核细胞中的特定免疫细胞亚群（单核细胞、CD4+ T细胞、CD8+...

儿童传染性单核细胞增多症外周血样本中免疫细胞亚群的分离

本方案通过佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯诱导人P3HR1细胞系的病毒裂解周期，从而分离出EB病毒颗粒。随后从病毒制备物中提取DNA，并进行实时PCR以定量病毒颗粒浓度。...

从P3HR1细胞系中分离与定量EB病毒

在本视频中，我们演示了一种建立小鼠胸腺淋巴瘤细胞系的实验方案。通过遵循该方案，我们已成功从小鼠胸腺淋巴瘤模型 Atm-/- 和 p53-/-...

从 Atm-/- 和 p53-/- 小鼠中建立胸腺淋巴瘤T细胞系

学习利用Epstein-Barr病毒转化人B细胞建立淋巴母细胞系的方法。通过流式细胞术检测CD23高表达CD58阳性细胞，可在感染后三至四天预测转化成功，为病毒学与免疫学研究提供高效实验方案。

建立爱泼斯坦-巴尔病毒生长转化的淋巴母细胞样细胞系

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