视网膜节的形态分析
February 19th, 2012
该视频演示了三种类型，其中包括视网膜内的核层厚度测量，定量视网膜神经节细胞（RGCs）的数量，并测量视网膜神经节细胞的大小，形态分析。该技术可以提供一个简单，但科学的形态分析的平台。
嗨，我是来自香港大学解剖学系神经退行性疾病实验室的 Regina。今天，我将向您展示如何进行 Retinal 会话的进度分析。让我们开始吧 在进行任何分析之前，先进行视网膜样本退缩和四个 MyFitness 并进行 h 和 e 染色。
之后，视网膜会话分为四个区域。它们是上外围区、上中区、下部中区和下外围区。定义区域后，在装饰的明亮光束显微镜下以 10 倍 40 倍的放大倍率获取每个区域的图像。
现在我们准备好分析视网膜形态信息了。本次会议将演示如何测量内核层的视网膜厚度。打开名为 thorough investigator 的软件。
选择 40 种类型，然后从主两个菜单中选择 image open。在选项卡文件下，选择要分析的所需视网膜区域的图像。从两个主栏的下拉列表中选择等值线的类型。
确保自动移动已打开。您可以通过单击放大按钮来放大图像。您可以使用缩小按钮来缩小图像显示的一侧。
描摹和试样都可以通过敲击原因移动按钮沿四个不同的方向移动。在跟踪窗口中单击鼠标右键，然后选择 Simple crack trace。沿内层的内边界绘制连续线。
如果出现错误，请在描摹窗口中将其中断，然后按 und undo 按钮擦除最后一个绘制点。继续跟踪，直到线路的最后一个点。绘图完成后，在描摹窗口中将其中断，然后选择一个开放的轮廓，然后单击放大启动图像。
按钮 左键 在描摹窗口中单击。要放大图像，请在 Marcus 的标记 2 条处选择一个标记。在交界点处。
添加所有标记后，选择标记 2 条位置和光标处的标记图标。在其中一个标记的中心，选择选项卡下的 quick measure angles（快速测量角度），右键单击描摹窗口，然后选择 continuous 选项。通过首先单击与所选标记相邻的标记中心来测量角度。
对于线段的末端，将最靠近关注点的中心移动。标记和裂纹。再次，将橡皮筋线延伸到 inia 层的外边界，将角度调整至 90 度。
在欲望中伸出左裂缝。放置一个显示角度测量值的对话框，将在单击后立即弹出。按住鼠标左键的同时按 Enter 键。
单击跟踪窗口，以便将线条从一端绘制到新的选择端。在跟踪窗口中将其中断，然后选择一个打开的控件。我们必须对每个区域的内核层手指进行四次测量，其中将绘制四条线。
从控制基地夜到印度核层的外边界 并发射图像，以便您可以清楚地看到边界。如果线的尖端不在内核层的外侧，我们可以将它们链接起来，或者在编辑模式下缩短线。选择编辑模式并选取线条。
单击描摹窗口，在电控搜索点中选择，在外边界添加一个点，而点编辑应沿同一条线。删除原始点。然后可以获得 Align with a new lift。
通过单击缩小图像的一侧 缩小 缩小 按钮。选择 编辑 模式 并绘制最后一条线段。绘制订单行后，选择编辑模式。
右键单击跟踪窗口，我们相应地放置四个线段。我们现在可以通过按下 CONT 测量按钮来获得四个测量值。选择这四个测量值，然后单击 Copy 将它们粘贴到 Specialist 专家处。
要单击球，请在选项卡文件下选择 Save as。跟踪数据可以保存为数据文件。在这一部分中，我们将量化打开的红尾 gagan 细胞选择图像的数量。
在选项卡文件下，选择要分析的所需视网膜区域的图像。首先，我们必须确定哪些是生活方式，哪些是死亡细胞。那些细胞呈粗略的运行形状，带有微妙的细胞核，显然没有被观察到，被看作是生命的视网膜帮细胞。
那些比较小的和浓缩的细胞被认为是那个细胞。从两个主栏的下拉列表中选择等值线的类型。沿着左侧纤维层的边界绘制一条线，并使用选项和开放轮廓进行描摹。
添加每一端，在线的尖端添加一个标记，在团队附近的位置添加另一个标记。选择标记 2 条上的标记图标。将光标置于标记的中心。
在提示处，选择选项卡下的 quick measure angles（快速测量角度）。在描摹窗口中右键单击两个，然后选择一个连续选项，只选择橡皮筋线并测量 19 度的角度。在捕获美元框后立即按 Enter 键。
但请记住，鼠标同时还剩下。断开描摹窗口，以便可以从尖端特别延长一条新线。在跟踪窗口中中断，然后选择一个打开的控件。
以与另一端完全相同的方式绘制另一条新线。我们创建了两个边界，在该边界内计算 ratin gagan 细胞的数量。选择一种类型的标记，并将一个标记附加到每个五个单元格。
选择一个边界作为排除线，该边界是像元接触的不是当前边界。为死细胞选择另一种类型的标记。每种类型的标记空间的数量将显示在标记图标旁边。因此。
在标记 2 条上，选择编辑模式并选取等值线基线。在跟踪窗口中中断它并重新结束该行。等值线基线的名称可以通过按下等值线测量按钮来获得。
然后，可以表示名称的每毫米单元格数。因此，让我们在 tab 文件下另存为。描摹和标记数据可以保存为数据文件。
这部分将演示如何测量视网膜组联细胞选择图像打开的细胞侧。在选项卡文件下，选择要分析的所需视网膜区域的图像。根据上一部分中描述的标准选择活呼吸 gang 单元。
因此，在生命单元格中，从主要两个条的记点中选择等高线的类型。沿着单元格的圆周在大约右端画一条等高线，踢描摹窗口并选择结束关闭等高线。单元格的 area 将显示在控制测量对话框中的 area 项下。
本视频演示了三种可以客观分析视网膜的简单方法。希望这个视频是关于的。
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
概述
本视频演示了视网膜的三种形态测量分析类型，包括测量内核层厚度、定量视网膜神经节细胞（RGCs）数量以及测量RGCs的大小。该技术为这些分析提供了科学平台。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 视网膜形态测量
- 细胞定量
背景
- 视网膜健康对视力至关重要。
- 形态测量分析有助于理解视网膜疾病。
- 视网膜神经节细胞对于传递视觉信息至关重要。
- 测量RGCs可以提供对神经退行性疾病的洞察。
研究目的
- 展示视网膜分析的形态测量技术。
- 定量视网膜神经节细胞及其大小。
- 测量内核层厚度。
使用的方法
- 视网膜样本的制备。
- 苏木精和伊红（H&E）染色。
- 将视网膜分为定义区域进行分析。
- 在各种放大倍数下获取图像。
主要结果
- 成功测量内核层厚度。
- 视网膜神经节细胞的定量。
- 评估不同视网膜区域RGCs的大小。
- 展示视网膜形态测量的系统方法。
结论
- 所呈现的技术对视网膜分析有效。
- 这些方法可以帮助理解视网膜病理。
- 未来的研究可以在这个框架上进行进一步研究。
常见问题
Executive Industry Relevance
Objective morphometric analysis of retinal sections enables precise quantification of neuronal loss and structural changes, supporting target validation in neurodegenerative disease models. By reducing measurement variability and increasing sensitivity to minimal changes, this approach enhances predictive confidence in evaluating therapeutic efficacy. It provides a translatable platform for assessing retinal pathologies across drug discovery stages.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses by quantifying retinal ganglion cell density and soma size alterations in disease models.
- Operational Value: Supports biological de-risking through reproducible measurement of inner nuclear layer thickness and cell layer morphometrics.
- Predictive Value: Facilitates portfolio triage by delivering absolute, copyable morphometric data for cross-study comparison.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Prepares validated biological systems for downstream workflows via standardized region-based image acquisition and tracing protocols.
- Quantitative Output: Generates absolute length and size measurements directly exportable to analytical files, improving data consistency.
- Scalability: Enables reliable compound evaluation through reduced observer variability and increased sensitivity in detecting minimal retinal changes.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Aligns with translational biomarker strategies by linking RGC loss and layer thickness changes to therapeutic outcomes in glaucoma and excitotoxicity models.
- Preclinical Continuity: Supports risk-adjusted advancement decisions through objective, repeatable morphometric endpoints across retinal regions.
- Mechanistic De-risking: Focuses on predictive valuation by isolating structural changes independent of functional assays.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification to preclinical evaluation, providing structural readouts that complement functional assessments in retinal disease models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by quantifying cell number, size, and layer thickness in defined retinal regions.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility through standardized H&E-stained section analysis and software-guided tracing.
- Analytics: Provides quantitative dependent variable measurements (cell count, soma size, layer thickness) enabling statistical comparison across treatment groups.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity via disease-relevant structural endpoints in NMDA-induced excitotoxicity, ischemia-reperfusion, and glaucoma models.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for retinal morphometry across multiple disease models and therapeutic interventions.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduction of mechanistic ambiguity in retinal neurodegeneration.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of morphometric measurements across operators and sites.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk via early structural biomarker detection.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on quantifiable retinal structural changes.
Implementation Considerations
- Required expertise in histology, microscopy, and morphometric software operation (Stereo Investigator).
- Instrumentation needs include brightfield microscope, computerized tracing system, and image analysis software.
- Cross-team standardization requires protocol adherence for region definition, tracing technique, and measurement replication.
- Adaptation considerations across model systems involve adjusting magnification, region sampling, and cell identification criteria.
- Practical limitations include dependency on tissue section quality and staining consistency for accurate border delineation.
