视网膜切片的形态计量分析

大家好，我是来自香港大学解剖学系神经退行性疾病实验室的Regina。今天我将向大家演示如何进行视网膜切片的进展分析。在开始任何分析之前，首先需要获取视网膜样本，并进行四次MyFitness处理，然后进行苏木精和伊红（H&E）染色。

随后，将视网膜区域分为四个部分，分别为上方周边区域、上方中央区域、下方中央区域和下方周边区域。在确定各区域后，使用装饰用明场显微镜在10倍40倍放大倍数下获取每个区域的图像。

现在我们已准备好分析视网膜形态信息。本节将演示如何测量内核层的视网膜厚度。打开名为 Thorough Investigator 的软件。

选择40种类型，然后从主工具栏的两个选项中选择“打开图像”。在“文件”选项卡下，选择一幅需要分析的视网膜区域图像。从主工具栏的下拉菜单中选择轮廓线类型。

确保已开启自动移动功能。可通过点击放大按钮来放大图像。可使用缩小按钮减小图像显示尺寸。

通过点击控制移动按钮，可使轨迹和样本沿四个不同方向移动。在轨迹窗口中右键点击，选择简单裂纹追踪。沿内层的内边界绘制轮廓线。

如果出现错误，可在追踪窗口中中断操作，然后按下撤销按钮以删除最后一个绘制点。继续追踪直至线条的最后一个点。绘制完成后，在追踪窗口中中断操作，选择一个开放轮廓，然后单击放大按钮以查看图像。

在追踪窗口中单击鼠标左键。要放大图像，请在 Marcus 的标记双栏中的第二个标记处进行选择。在连接点处。

添加所有标记后，选择位于标记二栏位置的标记图标和光标。在其中一个标记的中心位置，右键单击追踪窗口中的“选项卡二”，选择“快速测量角度”，然后选择连续选项。通过首先单击所选标记相邻标记的中心来测量角度。

对于线段的端点，将其尽可能移至关注区域的中心。标记并划开。再次将橡皮筋线延伸至内层的外边界，并调整角度直至达到90度。

向左移动至目标裂缝处。点击后将弹出一个同时显示角度测量值的对话框。按住鼠标左键不动，然后按下回车键。

单击追踪窗口，使线条从一端绘制到新选择的端点。在追踪窗口中将其打断，并选择一个开放的控件。我们需要在每个区域对内核层指状突起进行四次测量，即绘制四条线。

从控制基线的夜端垂直延伸至内核层的外边界，并调整图像以清晰显示该边界。如果线段的末端未到达内核层的外侧，可在编辑模式下将其延长或缩短。选择编辑模式并选中该线段。

单击轨迹窗口，在电控中选择搜索点，在外边界添加一个点，同时点的编辑应沿同一直线进行。删除原始点后，即可获得新的对齐位置。

通过点击缩小按钮来减小图像尺寸。取消选择编辑模式，然后绘制最后一条线段。绘制完顺序线后，选择编辑模式。

右键单击轨迹窗口，相应地放置四条线段。现在通过按下 CONT 测量按钮即可获得四个测量值。选择这四个测量值，然后单击复制，将其粘贴给专家。

单击球体后，在“文件”选项卡下选择“另存为”。追踪数据可保存为数据文件。在本部分中，我们将量化红尾伽甘细胞的数量，选择图像并打开。

在文件选项卡下，选择一张需要分析的视网膜区域图像。首先，我们需要区分哪些是存活细胞，哪些是死亡细胞。那些形态大致完整、轮廓清晰且细胞核明显可见的细胞，被视为存活的视网膜节细胞。

这些体积小且致密的细胞被视为该细胞。从主工具栏的下拉菜单中选择轮廓线类型。沿左侧纤维层的边界绘制轮廓线，并使用选项进行追踪，形成开放轮廓。

在每一端添加一个标记，一个标记位于线条的末端，另一个标记位于靠近团队的位置。在标记二栏中选择标记图标。将光标定位在两个标记的中心位置。

在末端，选择标签下的快速测量角度功能。在追踪窗口中右键单击，选择连续选项，仅使用橡皮筋线条，测量一个19度的角度。在美元框捕捉完成后，立即按下回车键。

但请记住，小鼠仍处于相同的位置。在追踪窗口中进行中断，以便能够从尖端特别延伸出一条新线。在追踪窗口中中断，并选择一个开放的控件。

以完全相同的方式在另一端绘制另一条新线。我们已创建了两个边界，用于计数其中的 rating gagan 细胞数量。选择一种类型的标记物，并将其中一个标记物附着在每五个细胞上。

选择一个边界作为排除线，细胞接触该线则不计入。为死亡细胞选择另一种类型的标记。每种标记的数量将与标记图标一起显示。据此。

在标记为“两栏”的位置，选择编辑模式并拾取轮廓基线。在追踪窗口中将其打断，并重新结束该线条。通过按下轮廓测量按钮，可获取轮廓基线的名称。

随后，细胞数量可表示为每毫米名称的数值。现在，让我们在文件选项卡下进行保存。追踪数据和标记数据可保存为数据文件。

本部分将演示如何测量视网膜节细胞所选图像的细胞侧面。在“文件”选项卡下，选择您希望分析的特定视网膜区域图像。根据前一部分所述标准，选择一个活体节细胞。

因此，在活细胞中，从主两条线的记录点处选择等高线类型。沿着细胞的周边绘制等高线，大约在轨迹窗口的右末端结束，并选择“结束并闭合等高线”。细胞的面积将显示在控制测量对话框的“面积”项目下方。

本视频展示了三种可客观分析视网膜的简单方法。希望本视频能对您有所帮助。