Name: 丝绸电影文化系统在体外分析和生物材料设计 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-24T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 19 s
Description: 了解丝素蛋白薄膜体外培养系统的构建方法及其在生物材料设计中的应用。该技术利用家蚕丝制备高生物相容性薄膜，为细胞生物学研究提供可定制的体外分析平台，并支持向体内实验的转化。

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本研究由美国国立卫生研究院（NIH）资助，项目编号为 K08EY015829、R21EY019561、R24EY015656、P41 EB002520 和 R01 EY020856，同时获得“防盲研究”职业发展奖以及三机构干细胞计划的支持。HCLE 细胞系由 Ilene Gipson 博士惠赠。作者谨此感谢康奈尔大学威尔医学学院的 Aihong Liu 博士在细胞培养方面的技术支持与指导，特殊外科医院的 Anthony Labissiere 在扫描电镜成像方面的技术协助，塔夫茨大学组织工程资源中心（TERC）在材料开发方面的技术支持，以及康奈尔纳米尺度科学与技术中心（CNF）在硅晶圆制造方面的协助。

1. 硅橡胶模具的制备
<ol>
	<li>制备或购买用于浇铸的所需拓扑表面。本出版物中将描述一种标准的100 mm蚀刻硅片（图1）。</li>
	<li>按照所购试剂盒提供的说明，以1:9的比例称取聚二甲基硅氧烷（PDMS）封装剂（组分A）和催化剂（组分B）溶液（9 g封装剂和1 g催化剂）。</li>
	<li>充分混合溶液以启动固化过程。</li>
	<li>将硅片表面置于浇铸皿中。</li>
	<li>在硅片表面称取4.5 g PDMS溶液。</li>
	<li>将PDMS溶液铺展，覆盖硅片表面直径为100 mm的区域。</li>
	<li>倾斜硅片以使PDMS溶液均匀铺展。</li>
	<li>用直径为100 mm的培养皿盖覆盖硅片。</li>
	<li>将浇铸装置放入60 °C烘箱中过夜，确保其在平坦表面上进行固化。</li>
	<li>在取出前，将固化的PDMS/硅片放入70%乙醇浴中。</li>
	<li>使用刀片先撬起边缘（整个圆周）开始从硅片上剥离PDMS。</li>
	<li>在70%乙醇浴中用镊子轻轻将PDMS剥离，注意不要撕裂硅橡胶铸件。</li>
	<li>使用14 mm打孔器冲出单个PDMS模具。该直径设计用于适配24孔板系统。</li>
</ol>
2. 蚕丝溶液的制备
<ol>
	<li>在玻璃烧杯中将 2 L 去离子水（dH2O）加热至沸腾7。</li>
	<li>将 5 g Bombyx mori 家蚕茧切成三等份。</li>
	<li>若蚕茧内表面附着大量昆虫残渣，表明污染严重，应予以丢弃。</li>
	<li>称取 4.24 g 碳酸钠。</li>
	<li>将碳酸钠缓慢加入沸腾的 dH2O 中，防止水沸腾溢出，并在继续操作前确保其完全溶解。</li>
	<li>将蚕茧碎片加入沸腾的 dH2O 中，持续煮沸 40 分钟，并使用聚四氟乙烯涂层搅拌子在煮沸过程中搅拌蚕茧。</li>
	<li>煮沸后，小心将 dH2O 倒入水槽，并用手挤干丝素提取物以去除多余水分。</li>
	<li>将丝素提取物在 1 L dH2O 中于实验烧杯中洗涤三次，每次 20 分钟，并使用搅拌子使烧杯内液体循环。</li>
	<li>洗涤后，用手挤干丝素提取物，并将丝纤维提取物置于化学通风橱中，干燥 12 小时。</li>
	<li>次日，称量干燥后的丝纤维，通常约为 ~3.5 g：___________-g</li>
	<li>配制 9.3 M LiBr 溶液，用于制备 20% w/v 的丝素溶液。使用以下公式计算所需质量与体积：
	<ol class="lalpha">
		<li>（第 10 步所得丝素提取物质量）×（4）= ___________-mL 总 9.3 M LiBr 溶液体积</li>
		<li>[(807.705) × (11.a 部分所得 LiBr 体积)] / 1000 = ___________ g 需加入 dH2O 的 LiBr 质量</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将称量好的 LiBr 加入以下体积的 dH2O 玻璃烧杯中：
	<ol class="lalpha">
		<li>（0.8）×（第 11.a 步计算体积）= ___________ mL dH2O</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将该溶液倒入适当大小的量筒中，并加水至第 11.a 步计算的最终体积。</li>
	<li>将丝素提取物放入烧杯中，倒入 LiBr 溶液，使用实验刮刀确保丝纤维完全浸没于 LiBr 溶液中。</li>
	<li>将溶解的丝素置于 60 °C 烘箱中加热 4 小时： 
开始时间：___________ 
结束时间：___________</li>
	<li>使用适当大小的注射器吸取 12 mL 丝素溶液。在注射器末端安装 18G 针头，然后将溶液注入透析盒（3,500 分子量截留，Slide-A-Lyzer，Thermo Scientific）。填充透析盒后，用已排空的注射器抽出盒内残留空气。</li>
	<li>将装有溶液的透析盒置于 1 L dH2O 中。</li>
	<li>在 1 小时、4 小时、8 小时后更换 dH2O，之后每 12 小时更换一次，共更换 6 次：
	<ol class="lalpha">
		<li>开始：___________</li>
		<li>1 小时：___________</li>
		<li>4 小时：___________</li>
		<li>8 小时：___________</li>
		<li>12 小时：___________</li>
		<li>12 小时：___________</li>
		<li>12 小时：___________</li>
		<li>结束：___________</li>
	</ol>
	</li>
	<li>透析结束后，用注射器缓慢从透析盒中收集丝素溶液。将溶液转移至可承受 10,000 g 离心力的离心管中。</li>
	<li>在 4 °C 条件下，以 10,000 g 离心 20 分钟，重复两次。每次离心后，将上清液转移至新管中。</li>
	<li>将丝素溶液储存于 4 °C 冰箱中。</li>
	<li>用移液器吸取两份 0.5 mL 丝素溶液至小型称量皿中，并将称量皿置于 60 °C 干燥烘箱中 12 小时，或直至丝素溶液完全干燥。</li>
	<li>称量两份样品中剩余的固体丝膜，以测定丝素溶液的重量/体积百分比蛋白浓度：
	<ol class="lalpha">
		<li>两份丝膜样品总质量：___________ mg</li>
		<li>（23.a 步所得质量）×（100）= ___________% 丝素</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 蚕丝膜的制备与培养体系的建立
<ol>
	<li>用透明胶带清洁PDMS铸模表面以去除灰尘。</li>
	<li>通过将 PDMS 基底浸泡于 70% EtOH 中并用 dH₂O 洗涤三次来清洗2O.</li>
	<li>将14 mm的PDMS模具放置于支架板上，支架板通常为24孔板盖。</li>
	<li>为了生成一个 50 μm 厚膜，涂布 70 μls 使用通常为1 mL注射器尖端的液体涂布工具，在PDMS模具上涂布8%的丝素溶液 2.</li>
	<li>将丝膜置于洁净的实验台面上，在150 Pa的气流压力下敞口干燥90分钟，或直至薄膜完全干燥。</li>
	<li>薄膜干燥后，将整套薄膜（包括PDMS模具）放入水退火 chamber 中 &gt;4 小时以生成不溶于水的薄膜。通常使用底部盛有水的干燥器腔室，在 25 kPa 的真空度下进行抽吸 15 .</li>
	<li>从水热处理室中取出丝膜，并放置于洁净的实验台面上。</li>
	<li>在35 mm培养皿中配制70%乙醇浴，将对照基质（如玻璃或塑料表面）和不锈钢环放入其中浸泡至少10分钟以灭菌。</li>
	<li>用镊子将丝素蛋白膜从PDMS模具上取下，浸入70%乙醇中，然后放入预先加入1 mL 70%乙醇的24孔板中，确保图案面朝上，以利于细胞黏附。</li>
	<li>将每片丝素膜样品放入相应的孔中后，在其上方放置不锈钢环形重物（内径 11.65 mm，外径 15.45 mm，厚度 1.18 mm）。</li>
	<li>让带环的样品孵育10分钟，以确保无菌。</li>
	<li>去除乙醇，每份样品用 1 mL PBS 洗涤 3 次，每次静置 5 分钟，以确保充分扩散。</li>
	<li>使用抽吸玻璃移液管去除 PBS，同时确保除去丝素蛋白薄膜样品下方的大部分气泡。</li>
	<li>准备细胞系以进行接种。以人角膜缘上皮细胞系（HCLE）为例，使用0.25%胰蛋白酶和乙二胺四乙酸（EDTA）溶液消化7分钟。加入与胰蛋白酶溶液等体积的含10%胎牛血清（FBS）的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）传代培养基以终止胰蛋白酶消化。将消化后的HCLE细胞离心，向细胞沉淀中加入8 mL无血清角质形成细胞培养基（K-SFM），轻轻振荡以重悬细胞，并进行细胞计数。</li>
	<li>样本 500 μL 每孔加入 HCLE 悬浮液，通常为 10,000 个细胞/cm²2 密度</li>
	<li>将培养物置于培养箱中 37 °C 和 5% CO2 并运行所需的实验方案。</li>
</ol>
4. 代表性结果
<img alt="蚕丝蛋白纯化流程图；显示步骤：蚕茧煮沸、溴化锂溶解、透析。" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. 流程图，展示蚕丝膜制备及培养系统构建的10个简要步骤。
<img alt="带有微结构的图案化晶圆；SEM图像显示表面形貌；4μm、2μm特征。" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图2"> 
图2. (A) 在直径为90 mm的硅晶圆上，采用标准光刻和干法刻蚀技术制备的具有21种染料阵列的图案化线条表面形貌。(B) 丝素蛋白薄膜在浇铸于PDMS模具表面后，仍保留原有的平行线条图案化特征。(C) 示意图展示所选特征尺寸设计，旨在促进细胞定向排列。(D) 丝素蛋白薄膜的横截面，显示保留的平行线条图案化表面。
<img alt="扫描电子显微镜图像；表面形貌；显微结构分析；5-20μm 放大倍数。" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 3"> 
图 3. HCLE 细胞系在培养第 2 天时贴附于（A）图案化和（B）平整丝素蛋白薄膜的扫描电子显微图像。到培养第 8 天时，HCLE 细胞在（C）图案化和（D）平整表面持续增殖并达到汇合状态。
<img alt="细胞培养显微图像和柱状图；不同材料基底对吸光度、荧光随时间变化的影响" src="/files/ftp_upload/3646/3646fig4.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 4"> 
图 4. (A, D, G) 图案化丝素膜、(B, E, H) 平整丝素膜与 (C, F, I) 玻璃对照基底上培养 HCLE 细胞的比较结果，分别对应培养第 (A-C) 1 天、(D-F) 4 天和 (G-I) 8 天。(J) CyQuant 核酸含量检测结果与 (K) 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）代谢活性检测结果，显示 HCLE 细胞在图案化和平整丝素膜基底上的存活力随时间变化情况，并与玻璃对照表面进行比较（比例尺 = 100 μm）。
视频 1. HCLE 细胞在图案化丝素膜表面迁移的 18 小时延时相差成像。细胞以 10k/cm2 的密度接种，培养 2 小时后开始成像。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3646/3646movie1.MOV" target="_blank">点击此处观看视频</a>。
视频 2. HCLE 细胞在 TCP 对照平面表面迁移的延时相差显微成像，时间跨度为 18 小时。细胞以 10k/cm2 的密度接种，培养 2 小时后开始成像。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3646/3646movie2.MOV" target="_blank">点击此处观看视频</a>。

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</ol>

无利益冲突声明。

过去二十年中，由于对这种蛋白质材料特性的广泛表征及其生物材料应用价值的深入理解，再生丝素膜作为细胞培养基底的应用日益普及 3,8 . 此处所述的培养系统代表一种新型 体外 用于评估细胞在图案化丝素蛋白薄膜生物材料基底上表面相互作用的测试系统 7 该系统能够对细胞相互作用进行随时间推移的深入分析，并可轻松应用于高通量数据采集。这在很大程度上得益于丝素蛋白薄膜具有一系列可调控的生物材料特性，可通过修饰以直接影响细胞功能。 8,9,12，包括：表面微/纳米级形貌的控制 7；通过共价修饰或生物活性分子的吸附实现多种表面化学性质 13；优异的机械性能 15,16；材料亲水性/疏水性的调控 16 ；生物化合物的大规模加载以用于释放 4,8,17 ；并通过调控二级结构（β片层含量）控制其溶解/酶解速率 11,18,19 .
通过在真空条件下并存在水蒸气的环境中对丝素膜进行一段时间的退火处理，可实现其透明性7,15。该加工方法可促进β-片层二级结构的形成，使材料在水中不溶的同时对光的衍射最小化15。这种膜的透明性对于实现直接的活细胞成像至关重要，可在多种成像模式（如宽场成像和荧光成像）下，结合多种显微镜系统进行应用12,20。除了活细胞成像外，丝素膜还可方便地从培养体系中取出，以便进行后续的固定和其他分析。因此，该系统适用于多种细胞/组织来源，并可广泛应用于多个技术领域中的多种直接实验评估3,8,9,12,13,21。延时成像结果展示了如何采集实时培养数据，并以实例说明了表面形貌如何影响细胞相互作用。代表性结果展示了丝素膜生物材料可用于支持HCLE细胞的培养生长，并适用于多种标准的细胞增殖和代谢检测方法（图4）。此外，培养物还可进行固定并用于扫描电子显微成像或其他实验流程（图3）。
丝素膜基底可在实验室中以高保真度、高一致性和相对较低的成本制备（图1）。这使得培养系统的构建和实验结果均具有良好的可重复性。已有研究表明，通过水退火处理所制备的丝素膜材料在培养环境中具有稳定的性能，其降解速率取决于溶液中蛋白酶的浓度，因而具有明确可控的降解特性2,15,22。因此，这类材料可用于长期细胞培养，或根据植入部位的生理环境在体内留置数月甚至数年8。此外，近期研究显示，经水退火处理的丝素膜在蛋白结构和材料性能方面具有良好的批次间一致性，多种力学和生物物理检测方法已证实其可实现可重复的细胞培养结果15,16。同时，扫描电子显微镜（SEM）、原子力显微镜（AFM）以及细胞培养研究结果均表明，不同批次丝素膜材料的表面形貌具有高度一致性{Lawrence:2008wr, Omenetto:2008tc, Bray:2011kq}7,23,24。材料的稳定性与一致性是影响细胞通过各种机械转导通路感知培养基底的关键因素，并最终决定细胞产生预期或非预期的生物学响应25,26。
传统的细胞培养基质标准，如经组织培养处理的塑料或玻璃，可为细胞贴附提供足够的支持。然而，这些材料难以进行进一步的功能化改造以拓展其应用。 体内可以设想，丝素蛋白薄膜生物材料可被定制化 体外，一旦达到实验预期，定制的薄膜便可直接转化为 体内 模型。这种成对设计在 体外 和 体内 实验为这类可植入的丝素蛋白生物材料提供了显著优势，相较于其他常规使用的基底材料而言 体外.

丝蛋白膜培养系统 体外 分析与生物材料设计

Silk Film Culture System for in vitro Analysis and Biomaterial Design

丝素蛋白薄膜是一种有前景的蛋白质基生物材料，可在实验室环境中高保真且经济地制备 1,2 这些材料具有理想的特性，因其具备高度可控的尺寸和材料特性，具有良好的生物相容性并能促进细胞黏附，可通过表面拓扑结构图案化或化学修饰表面进行功能化改造，并可作为生物活性分子的储库，用于药物递送相关应用。 3-8 此外，丝素蛋白薄膜相对易于定制设计，可设计为在几分钟内溶解或在数年内逐渐降解。 体外 或 体内，并且由于其本质上具有透明性，因而特别适用于成像应用 9-13该培养系统方法为细胞-丝素膜表面相互作用的快速评估提供了一种可扩展的技术途径。尤其值得关注的是，利用表面图案化丝素膜研究细胞增殖差异及细胞对取向的响应特性。 12,14 将接种的细胞培养物分别培养在微图案化和无图案的丝素蛋白薄膜基底上，随后通过延时相差显微成像、扫描电子显微镜以及代谢活性和核酸含量的生化检测进行评估。综上所述，该丝素蛋白薄膜 体外 培养系统提供了一种可定制的实验平台，适用于研究细胞与生物材料基底表面相互作用，进而可对其进行优化并转化为实际应用 体内 模型。目前，利用本文所述培养系统进行的观察正被应用于从基础细胞相互作用到医疗器械设计等多个领域，因此与广泛的生物医学领域相关。

丝素膜是一类新型生物材料，可轻松定制以适用于多种生物医学应用。所介绍的丝素膜培养系统具有高度适应性，可用于多种 体外 分析。该系统代表了一种生物材料设计平台，提供 体外 优化前直接转换为 体内 模型

丝素蛋白薄膜是一类具有前景的蛋白质基生物材料，可在实验室环境中以高保真度和经济性的方式制备。

本实验的总体目标是建立一种丝素蛋白薄膜的体外培养系统。首先制备用于成膜的丝素溶液，以实现这一目标。第二步是将丝素溶液浇铸到硅橡胶模具表面，并让薄膜自然干燥成膜。随后对丝素膜进行细胞培养处理。接下来，采用无菌技术组装培养系统。最后一步是将目标细胞接种到丝素膜上。最终，丝素蛋白膜培养表面可直接在培养过程中进行成像或检测。根据需要，可取出培养板或样品进行固定及其他后续处理。与现有的标准组织培养塑料表面培养等方法相比，该技术的主要优势在于丝素蛋白膜生物材料具有高度的生物相容性，并可便捷地应用于后续的体内和体外实验。该方法可用于解答细胞生物学和生物材料领域的关键问题，例如如何利用表面形貌来影响细胞反应？尽管该方法可为角膜上皮反应提供见解，但也可应用于其他系统，其中初步的体外实验可为更复杂的体内系统提供初步答案。开始制备硅橡胶模具时，需获取用于浇铸的所需形貌表面。本演示中采用此方法。使用标准的100毫米刻蚀硅晶圆。按照购买试剂盒中提供的9:1比例取用PDMS封装剂和催化剂溶液。将两种溶液充分混合以启动固化过程。将硅晶片表面放入铸造皿后，称取4.5克PDMS溶液滴加到硅晶片上。待PDMS溶液均匀覆盖晶片表面后，用直径100毫米的培养皿盖盖住晶片，并在10毫米汞柱压力下抽真空处理两小时。为去除PDMS溶液中的气泡，将铸造装置平放在60摄氏度的烘箱中过夜。次日，将固化后的PDMS硅晶片放入100%乙醇浴中。在移除PDMS之前，先用镊子夹住剃须刀片，从晶圆边缘开始轻轻撬起PDMS的周边。然后在100%乙醇浴中轻柔地将PDMS剥离。注意不要撕裂硅橡胶，使用14毫米打孔器逐个打出PDMS模具。该直径设计为可适配24孔板的孔径。为制备丝素溶液，将两升蒸馏水加热至沸腾。在玻璃烧杯中，将五克柞蚕蚕茧切成三段，若蚕茧内表面附着大量昆虫残渣等严重污染的蚕茧，应予以弃用。将4.24克碳酸钠缓慢加入沸腾的水中，以防止暴沸。待碳酸钠完全溶解后，将蚕茧碎片加入沸水中，使用聚四氟乙烯涂层搅拌子搅拌40分钟。煮沸后，小心将蒸馏水倒入水槽，并用手挤出丝素蛋白提取物中的多余水分。随后将丝素蛋白提取物放入盛有1升蒸馏水的塑料烧杯中，搅拌20分钟以进行洗涤。用新鲜水重复此洗涤过程两次。用手将洗过的丝素蛋白提取物沥干，并将丝纤维提取物放入化学通风橱中，使其干燥12小时。第二天，称量干燥后的丝纤维，其质量通常约为3.5克。然后根据书面方案，配制9.3摩尔的溴化锂溶液，用于制备20%（重量/体积）的丝素蛋白溶液。将丝素提取物放入烧杯后，将溴化锂溶液倒入丝纤维上。确保蚕丝纤维完全浸没在溶液中。使用实验用刮刀将溶解的蚕丝放入60°C的烘箱中加热4小时。4小时后，用适当大小的注射器吸取12毫升蚕丝溶液。插入18号针头后，在注射器末端将溶液注入透析盒中。透析盒充满后，用已排空的注射器抽出透析盒中残留的空气。将装有样品的透析盒放入一升蒸馏水中。透析一小时、四小时、八小时后各换水一次，随后每12小时换水一次，共换水六次。透析结束后。用注射器缓慢收集盒式装置中的丝素溶液，并转移至离心管中。将溶液在 10,000 g、4 °C 条件下离心 20 分钟。离心后，将上清液转移至新管中。重复此过程第二次后，用移液枪吸取两份各0.5毫升的丝素溶液样品，分别加入两个小型乳清培养皿中。将乳清培养皿置于60摄氏度的干燥烘箱内12小时，或直至丝素溶液完全干燥。大体积的丝素溶液可保存在4摄氏度条件下。称取两份样品中剩余的固体丝素膜，以测定溶液中丝素蛋白的浓度密度。使用透明胶带清除灰尘，制备PDMS浇铸表面。接着，将PDMS基底浸入100%乙醇中一分钟以进行清洗。然后将其移除，并使其干燥。要制备厚度为50微米的薄膜，可将70微升8%的丝素溶液滴加到PDMS模具上。使用液体涂布工具（如1毫升注射器针头），在层流洁净台中，以150帕斯卡的气流压力吹干90分钟或直至薄膜完全干燥，期间无需覆盖。待薄膜干燥后，将包括PDMS模具在内的整套薄膜置于盛有水的跪式水化室中超过四小时，以制备不溶于水的薄膜。通常使用一个空的干燥器作为水化室，底部盛水，将丝素薄膜从水化室取出后，用25千帕的真空度进行抽吸。在层流洁净工作台中操作，于35毫米的培养皿中配制70%乙醇溶液。然后将任何对照基质和不锈钢环放入培养皿中至少10分钟，以进行灭菌。接着用镊子将丝素膜从PDMS模具中取出，浸入70%乙醇中，并将每张膜放入已预先加入1毫升70%乙醇的24孔板的单个孔中。确保将膜的有图案面朝上放置，以利于细胞黏附。为确保此步骤成功，必须将丝素膜正确且无菌地置于孔板的孔内。将不锈钢环放置在SILT膜上，孵育10分钟。按照文中指示对样品膜进行洗涤，并按说明准备细胞系进行接种。在本示例中，使用人角膜缘上皮细胞系作为最终步骤。每孔加入500微升HCLE细胞悬液，通常使用每平方厘米10,000个细胞的密度，随后进行所需的实验方案。图中显示的是第2天时HCLE细胞系在有图案和无图案丝素膜上的扫描电子显微镜图像。在培养至第8天时，HCLE细胞在图案化和光滑表面上持续增殖至融合状态。在此培养实验中，分别在第1天、第4天和第8天，将HCLE细胞在图案化和光滑丝素膜上的培养情况与玻璃对照基底进行比较。通过SQU核酸含量检测和MTT代谢活性检测进行的定量分析结果表明，与玻璃对照表面相比，HCLE细胞在图案化和光滑丝素膜基底上均具有良好的存活能力。图中显示的是 HCLE 细胞在图案化丝素膜表面迁移过程中的延时相差成像。在 18 小时的时间内，细胞以每平方厘米 10,000 个细胞的密度接种，在成像前培养 2 小时，以进行对比。在相同培养条件下，HCLE 细胞在平整对照表面迁移的延时相差成像也在 18 小时内展示。一旦丝素溶液和硅胶模具制备完成，若按照本方案正确操作，该技术可在 8 小时内完成。还可采用其他方法，如免疫荧光扫描、电子显微镜以及分子生物学技术（如蛋白质印迹和免疫分析），结合化学检测方法（如细胞活力、细胞增殖和代谢速率测定），以更深入地理解细胞对这些不同定制设计服务的响应。观看本视频后，您应能充分掌握如何制备丝素溶液、创建定制图案、制备丝素膜以及在这些基质上进行任意类型细胞的培养。

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