人类胰腺采集方案

本实验的总体目标是以保持解剖学方向性的方式分离人体胰腺。首先将十二指肠和脾脏从胰腺上移除，然后清除胰腺上的多余脂肪和血管。第二步是用蓝色墨水涂抹胰腺的前表面，用黑色墨水涂抹后表面。

接下来，将胰腺分为三个区域。每个区域再被横向切成厚度均匀的片状，置于石蜡包埋盒、OCT 模具中，或进一步剪碎后放入小管中。最终，从胰腺的三个区域均采集样本，同时保持正确的解剖学方位，以供后续分析使用。

该方法有助于解决1型糖尿病研究中的关键问题，例如β细胞质量或功能丧失的机制，以及免疫细胞攻击的性质。由于维持胰腺在体内的方向需要注重细节，因此对胰腺处理方法进行可视化演示至关重要。本次操作演示将由本实验室的组织技术员Linda Snyder和生物科学家Emily Montgomery完成。

首先准备该实验所需的所有材料。先用供体标识、样本类型、分装编号以及任何其他附加信息标记用于盛放石蜡包埋块的盒。接着，以相同方式标记OCT模具。

裁剪足够数量的铝箔，用于包裹每个OCT包埋块，并将其放置一旁以备后续使用。准备好储存新鲜和冷冻样本所需的所有小瓶。根据需要加入RNA later和RPMI培养基。

接下来，准备操作区域，将解剖板、已灭菌的器械以及实验所需的其他所有物品分别放置在生物安全柜内和台面上。将所有样本盒和OCT模具按使用顺序排列整齐，放置在附近。在泡沫塑料盒底部加入足量的异戊烷，使其覆盖干冰，以制备冷冻浴。

开始解剖时，先移除十二指肠和脾脏。从一端开始分离十二指肠与胰腺，并持续操作直至完全分离。脾脏松散地附着于脂肪组织和胰腺，可轻松移除。

接下来，使用钝性与锐性分离相结合的方法，清除胰腺上多余的脂肪、血管和神经。将切除的脂肪组织和淋巴结留置一旁，以备后续处理。清理完毕后，将胰腺置于铺有纸巾的解剖板上。

保持胰腺的正确方位是该操作中最困难的环节。为确保成功，需用不同颜色的墨水标记胰腺的前表面和后表面。将棉签浸入蓝色墨水中，将墨水均匀涂抹于胰腺的前表面，然后吸去多余墨水。

接下来，将新的涂布器浸入黑色墨水中，并将其涂抹在胰腺的后表面。将胰腺恢复至正常方位。当腹侧朝上时，胰腺即可被切割成三个部分。

首先，切断头部与体部之间的连接。接着，将剩余部分大致均分为体部和尾部，分别称量胰腺各区域的重量。从头部开始。

将每个区域以横向方式切割，类似于切面包，分成约0.5厘米长的节段。待胰腺各区域均切片后，取下头部区域的最后一节，即头体交界段，将其置于单独的解剖板上。将此节段切碎成小块，并将碎块均匀分装至预先标记的冻存管中，部分加入RNA保护剂，部分不加。

随后，将小瓶冷冻。按照标准操作流程进行。对身体与尾部连接处的样本重复此操作步骤。

收集切碎的样本后，将所有横切面均向右侧倾斜。每个区域的交替切片将被移除。对于石蜡和OCT包埋块，移除第一张切片用于石蜡包埋。

如果组织块过大，可将其切成两半，并将包埋盒标记为 A 和 B。若组织块仍然过大，则沿与前一次切面垂直的方向再次切割，然后按顺时针方向将包埋盒依次标记为 A 至 D。如图所示，放置包埋盒时应使标签位于左侧。

接下来，将组织放入包埋盒中并盖上盖子。将包埋盒转移至含有中性缓冲福尔马林的容器中。对每个区域内的组织块按顺序编号，OCT 包埋块从最内侧的切片开始编号。

将OCT包埋剂倒入预先标记好的模具中，形成一层薄层。在处理组织前，先用OCT包埋剂覆盖组织，并迅速冷冻样本以供后续使用，之后再返回处理先前保留的组织。通过切除淋巴结被膜周围脂肪和结缔组织，分离胰腺淋巴结。将淋巴结置于含有DMEF的无菌培养皿中，将较大的淋巴结剪碎成不超过0.5厘米的组织块。

胰腺淋巴结分离后，将组织分装至预先准备好的小瓶和包埋盒中，以进行后续处理。完成淋巴结处理后，将脾脏剪碎并以类似方式保存。处理十二指肠时，用湿润的纱布擦拭黏膜以清除黏液，剪下黏膜，然后将其切成若干片段。

按照之前所示方法分割黏膜样本。通过此操作，可采集到胰腺各个区域的代表性样本，如图所示。胰头、胰体和胰尾区域的重量大致相等。

观看本视频后，您应能够充分理解如何将人胰腺处理成不同类型的样本，特别是如何保持其空间方位，以及如何从胰周脂肪组织中分离出淋巴结。