Name: 复发性单纯疱疹性角膜基质性角膜炎小鼠模型研究人类HSK (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 27 s
Description: 了解复发性单纯疱疹病毒角膜基质性角膜炎的小鼠模型建立方法。该模型通过紫外线B诱导病毒再激活，模拟人类HSK疾病进程，用于评估角膜病变程度和抗病毒治疗策略。

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作者谨此感谢 Jay Pepose 博士帮助我们学习该模型。本研究由美国国立卫生研究院资助，资助编号为 EY11885（PMS）、EY21247（PMS），以及由“预防盲症研究”组织向眼科系提供的非限制性资助。

动物护理说明：本模型中不使用镇痛剂，因为镇痛剂具有抗炎作用，可能使模型失效。
1. 病毒的制备
<ol>
	<li>在Vero细胞（80%汇合度）中培养HSV-1，起始感染复数为0.01（在T-150培养瓶中，约5 × 105个空斑形成单位），培养3-4天，直至所有细胞变圆，轻敲培养瓶即可脱落。</li>
	<li>将培养基转移至无菌离心管中，在Sorvall Legend RT离心机中于4 °C、3,500 rpm离心15分钟。弃去上清液（见步骤1.3），将每个50 ml离心管中的大沉淀物用总共5 ml培养基重悬。分两次、每次30秒进行超声处理，共1分钟。</li>
	<li>将上清液转移至50 ml无菌Oak Ridge管中，在Beckman J2-21离心机中于4 °C、9,000 rpm离心1小时，以获得少量病毒沉淀。弃去上清液。</li>
	<li>将步骤1.2中的超声产物与步骤1.3获得的沉淀混合，再次超声处理45秒。在Sorvall Legend RT离心机中于4 °C、1,500 rpm离心5分钟。保留上清液，即为病毒原液，分装后储存于-70 °C。</li>
	<li>在Vero细胞上测定病毒滴度。通常从100至10-8进行连续10倍稀释，每种稀释度设两个复孔，共两套独立稀释系列。病毒滴定在12孔无菌培养板中进行。</li>
</ol>
2. 小鼠感染
<ol>
	<li>按每20克小鼠体重注射0.1毫升麻醉剂混合液（氯胺酮60 mg/kg + 塞拉嗪5 mg/kg，用HBSS稀释）。该混合液因在正确剂量下具有较高的安全性，且药效持续时间较短，是常用的麻醉方法之一。</li>
	<li>当小鼠进入麻醉状态后，在解剖显微镜下用30号针头轻划右眼角膜，注意避免角膜穿孔。</li>
	<li>每只小鼠接受1毫升人混合血清（Sigma, Temecula, Calif.；抗HSV活性，50%病毒中和效价为1:800）的腹腔注射，以保护角膜在初次感染期间免受损伤。</li>
	<li>使用耳夹或耳孔标记对小鼠进行编号。</li>
	<li>所有小鼠编号完成后，使用20 μl移液器对每只小鼠的一只眼睛（通常为右眼）接种106 PFU（5 μl）。另一只眼睛滴加5 μl HBSS以保持湿润，因操作过程少于10分钟，此量足以维持眼部水合状态，且麻醉剂量已相应调整。感染后第3天，用无菌棉签蘸取1 ml Vero培养基润湿后擦拭小鼠眼部以确认感染情况，随后将100 μl拭子样本接种至48孔板中培养的Vero细胞。每日观察细胞病变效应（cpe）。</li>
</ol>
3. 小鼠潜伏感染的再激活
<ol>
	<li>小鼠在初次感染后至少5周进行麻醉。需要注意的是，我们在初次感染后长达一年内对小鼠进行了再激活实验，未观察到反应存在显著差异。</li>
	<li>麻醉后，将小鼠置于TM20 Chromato-Vu透射仪上，该仪器发射峰值波长为302 nm的UV-B，使仅单侧眼睛暴露于UV-B光下。每只小鼠暴露于250 mJ的UV-B光/cm2。</li>
	<li>通过使用无菌棉拭子采集眼睛样本以确定再激活情况：首先在第0天（UV-B照射前，用于排除自发排毒小鼠）将拭子置于1 ml Vero培养基中，随后在UV-B照射后的第1至第7天重复采样。拭子样本的检测方法如2.5节所述。对于检测到感染性病毒的拭子，采用12孔板进行标准蚀斑实验测定病毒滴度。</li>
</ol>
4. 临床评估
<ol>
	<li>由经过盲法训练的观察者使用双目解剖显微镜对小鼠的临床眼部疾病进行评估。</li>
	<li>角膜混浊程度按0至4级评分，其中0表示基质透明，1表示轻度基质混浊，2表示中度混浊但虹膜结构仍可辨认，3表示重度混浊，除瞳孔边缘外虹膜细节消失，4表示完全混浊，无法观察眼后部结构。</li>
	<li>新生血管化按1至8级评分，将角膜分为四个相等的象限，分别评估每个象限内血管化的范围。</li>
	<li>睑缘炎的评分标准如下：0分，无病变；1分，眼睑轻度肿胀；2分，中度肿胀伴结痂性眼部分泌物；3分，重度肿胀、中度眶周脱毛及皮肤病变；4分，眼睑重度肿胀伴眼睑被分泌物粘连闭合、严重眶周脱毛及皮肤病变。</li>
	<li>脑炎的征象包括弓背、毛发竖立及明显的神经系统异常。当小鼠出现显著脑炎症状时，予以实施安乐死。</li>
</ol>
5. 代表性结果
上述循环模型最初由 Shimeld 发表， 等. 1-3他们进行了测试，且多年来我们的实验室一直使用该模型的改进版本发表了大量论文。 4-15该模型用于定义细胞因子干扰素-γ在复发性HSV-1疾病中的作用 10如图所示 图3缺乏IFNγ的小鼠比野生型小鼠表现出更严重的角膜疾病 14它还被成功用于确定多种不同疫苗构建物的治疗价值 6,10,11请注意，在一个案例中，所测试的疫苗在预防性应用时效果良好，但未能证明具有治疗效果 6然而，当测试一种复制缺陷型病毒疫苗时，它不仅具有良好的预防效果，还表现出很强的治疗作用。 10,11，参见参考文献10中的图5。最近，我们已使用该模型来确定在经历复发性HSK的小鼠中是否存在可检测到的性别差异。如 图1 表明，雄性C57BL/6小鼠的角膜混浊程度显著低于雌性C57BL/6小鼠。同样，在评估角膜新生血管化时，雄性小鼠角膜中新血管生成也显著少于雌性小鼠（图2）。我们目前正在其他品系的小鼠中进行类似分析，以检测该表型是否具有品系特异性。我们还将确定这种差异是由于缺乏睾酮还是由于雌激素的存在所致。
<img alt="角膜混浊程度与UV-B照射后天数的关系；比较雌性和雄性个体的折线图。" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 1"> 
 图1. UV-B诱导潜伏感染再激活后，雄性和雌性C57BL/6小鼠品系的角膜病变情况。将潜伏感染的小鼠通过UV-B照射诱导病毒再激活，并在35天内监测其角膜混浊程度。本研究使用的小鼠数量如下：雄性，n = 15；雌性，n = 15。结果以均值±标准误表示。*在第14至35天期间，雌性C57BL/6小鼠的病毒诱导疾病显著更严重（P = 0.001 至 0.01）。
<img alt="角膜新生血管；UV-B暴露；图表；雄性与雌性；照射后；数据分析。" src="/files/ftp_upload/4276/4276fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图2"> 
 图2. C57BL/6小鼠品系在UV-B诱导再激活后雄性和雌性个体的角膜疾病表现。将潜伏感染的小鼠通过UV-B照射诱导病毒再激活，并在35天内监测其角膜新生血管的形成情况。本研究使用的小鼠数量如下：雄性，n = 15；雌性，n = 15。结果以均值±标准误表示。*在第14至28天期间，雌性C57BL/6小鼠的病毒诱导疾病显著更严重（P = 0.001 至 0.01）。

<ol><li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, B., Easty, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+model+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">An improved model of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> Curr. Eye Res. 8, 1193-1205 (1989).</li>
<li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactivation+of+latent+infection+and+induction+of+recurrent+herpetic+eye+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Reactivation of latent infection and induction of recurrent herpetic eye disease in mice.</a> J. Gen. Virol. 71, 397-404 (1990).</li>
<li>Shimeld, C., Hill, T. J., Blyth, W. A., Easty, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+immunization+protects+the+mouse+eye+from+damage+after+herpes+simplex+virus+infection+by+limiting+spread+of+virus+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Passive immunization protects the mouse eye from damage after herpes simplex virus infection by limiting spread of virus in the nervous system.</a> J. Gen. Virol. 71, 681-687 (1990).</li>
<li>Laycock, K. A., Lee, S. F., Brady, R. H., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+murine+model+of+recurrent+herpes+simplex+viral+keratitis+induced+by+ultraviolet+B+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a murine model of recurrent herpes simplex viral keratitis induced by ultraviolet B radiation.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 32, 2741-2746 (1991).</li>
<li>Keadle, T. L., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-10+ameliorates+corneal+disease+in+a+mouse+model+of+recurrent+herpetic+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Path%22%5BJournal%5D)">IL-10 ameliorates corneal disease in a mouse model of recurrent herpetic keratitis.</a> Microbial Path. 38, 13-21 (2005).</li>
<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Miller, J. K., Hook, K. K., Fenoglio, E. D., Francotte, M., Slaoui, M., Stuart, P. M., Pepose, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+a+recombinant+glycoprotein+D+subunit+vaccine+on+the+development+of+primary+and+recurrent+ocular+infection+with+herpes+simplex+virus+type+1+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inf.+Dis%22%5BJournal%5D)">Efficacy of a recombinant glycoprotein D subunit vaccine on the development of primary and recurrent ocular infection with herpes simplex virus type 1 in mice.</a> J. Inf. Dis. 176, 331-338 (1997).</li>
<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proinflammatory+cytokines+IL-1+and+TNF-a+are+required+for+recurrent+herpetic+keratitis+in+NIH+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophth.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Proinflammatory cytokines IL-1 and TNF-a are required for recurrent herpetic keratitis in NIH mice.</a> Invest. Ophth. Vis. Sci. 41, 96-102 (2000).</li>
<li>Keadle, T. L., Usui, N., Laycock, K. A., Kumano, Y., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Corneal+cytokine+expression+in+a+murine+model+recurrent+herpetic+stromal+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Ocular+Immunol.+Inflam%22%5BJournal%5D)">Corneal cytokine expression in a murine model recurrent herpetic stromal keratitis.</a> Ocular Immunol. Inflam. 9, 193-205 (2001).</li>
<li>Keadle, T. L., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2B+and+CD8%2B+cells+are+key+participants+in+the+development+of+recurrent+herpetic+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Path%22%5BJournal%5D)">CD4+ and CD8+ cells are key participants in the development of recurrent herpetic stromal keratitis in mice.</a> Microbial Path. 32, 255-262 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Morrison, L. A., Morris, J. L., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+immunization+with+a+virion+host+shutoff-defective%2C+replication-incompetent+herpes+simplex+virus+type+1+strain+limits+recurrent+herpetic+ocular+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic immunization with a virion host shutoff-defective, replication-incompetent herpes simplex virus type 1 strain limits recurrent herpetic ocular infection.</a> J. Virol. 76, 3615-3625 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Laycock, K. A., Morris, J. L., Leib, D. A., Morrison, L. A., Pepose, J. S., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+vaccination+with+vhs%28-%29+herpes+simplex+virus+reduces+the+severity+of+recurrent+herpetic+stromal+keratitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic vaccination with vhs(-) herpes simplex virus reduces the severity of recurrent herpetic stromal keratitis in mice.</a> J. Gen. Virol. 83, 2361-2365 (2002).</li>
<li>Keadle, T. L., Morris, J. L., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+aminoguanidine+on+primary+and+recurrent+ocular+herpes+simplex+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">The effects of aminoguanidine on primary and recurrent ocular herpes simplex virus infection.</a> Nitric Oxide. 13, 247-253 (2005).</li>
<li>Stuart, P. M., Morris, J. E., Sidhu, M., Keadle, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CCL3+protects+mice+from+corneal+pathology+during+recurrent+HSV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Biosci%22%5BJournal%5D)">CCL3 protects mice from corneal pathology during recurrent HSV-1 infection.</a> Front. Biosci. 13, 4407-4415 (2008).</li>
<li>Keadle, T. L., Alexander, D. E., Leib, D. A., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interferon+gamma+is+not+required+for+recurrent+herpetic+stromal+keratitis%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Interferon gamma is not required for recurrent herpetic stromal keratitis.</a> Virology. 380, 46-51 (2008).</li>
<li>Carr, D. J., Austin, B. A., Halford, W. P., Stuart, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delivery+of+Interferon-gamma+by+an+adenovirus+vector+blocks+herpes+simplex+virus+Type+1+reactivation+in+vitro+and+in+vivo+independent+of+RNase+L+and+double-stranded+RNA-dependent+protein+kinase+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Delivery of Interferon-gamma by an adenovirus vector blocks herpes simplex virus Type 1 reactivation in vitro and in vivo independent of RNase L and double-stranded RNA-dependent protein kinase pathways.</a> J. Neuroimmunol. 206, 39-43 (2009).</li>
</ol>

未声明任何利益冲突。

本文所述的疱疹性间质性角膜炎（HSK）复发模型使研究者能够在更接近人类疾病实际情况的体系中研究人类HSK。因此，该模型的优势在于，疾病发生时所处的免疫系统已在初次感染过程中被激活。由于这些小鼠已对HSV-1产生免疫应答，再次激活该免疫应答的因素可能与最初引发免疫应答的因素不同。因此，用于预防原发性HSK的治疗干预措施并不总能改善复发性HSK，我们在先前多篇文献中已证实了原发性与复发性HSK之间的差异6,8,10-13,15。如前所述，这一现象在开发预防人类HSK的疫苗时尤为明显。大多数疫苗可预防原发性HSK的发生，但极少有疫苗被证明能有效减少复发性HSK6,10,11。
该模型的缺点是实验耗时较长。在初次感染后，小鼠需要近6周的时间进入潜伏感染状态，且所给予的人血清已被代谢。此外，并非所有潜伏感染的小鼠都会向感染眼的泪膜中释放可检测到的病毒。这并不意味着它们没有发生再激活，而仅说明我们无法通过病毒培养检测到其再激活。很可能大多数甚至全部小鼠都发生了再激活，但产生的病毒数量不足以通过蚀斑法检测到。

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma</td><td>D5796</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>人血清</td><td>Sigma</td><td>S7023</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺</td><td>Cellgro</td><td>25-005-C1</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素溶液</td><td>Sigma</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>两性霉素B（Fungizone）</td><td>Invitrogen</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>离心机</td><td>Sorvall</td><td>Legend RT</td><td></td></tr><tr><td>离心机</td><td>Beckman</td><td>52-21</td><td></td></tr><tr><td>透射紫外灯</td><td>UVP</td><td>95-0452-02</td><td></td></tr><tr><td>超声破碎仪</td><td>Branson</td><td>Sonifier 450</td><td></td></tr><tr><td>橡树岭离心管</td><td>Nalgene</td><td>Z 720410</td><td></td></tr><tr><td>培养瓶 - 7150</td><td>Corning</td><td>430823</td><td></td></tr><tr><td>培养板 - 12孔</td><td>Corning</td><td>CLS 3513</td><td></td></tr><tr><td>培养板 - 48孔</td><td>Corning</td><td>CLS 3548</td><td></td></tr><tr><td>无菌锥形离心管 - 30 ml</td><td>Corning</td><td>CLS 430828</td><td></td></tr><tr><td>无菌棉签</td><td>Fisher</td><td>23-400-125</td><td></td></tr><tr><td>30G针头</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>25G针头</td><td>BD</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>10 ml注射器</td><td>BD</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>10 ml注射器</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠复发性疱疹性间质性角膜炎，一种研究人类hsk的模型

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

单纯疱疹性眼病，称为单纯疱疹性间质性角膜炎（HSK），是一种可能导致失明的角膜感染，每年因此接受治疗的临床就诊人数超过30万人次。在患有临床疾病的患者中，有1%至2%将出现感染角膜的视力丧失。绝大多数此类病例是由单纯疱疹病毒1型（HSV-1）潜伏感染的再激活所致，而非急性疾病引起。有趣的是，目前最常用于研究该疾病的模型是急性感染模型。然而，人们认为HSK的复发模型更能反映临床疾病的实际过程。目前用于HSK的复发动物模型包括兔和小鼠模型。兔模型的优点在于，其潜伏感染可在无已知刺激的情况下发生再激活。但缺点是，由于缺乏小鼠所具备的丰富免疫学与遗传学研究资源，难以深入探究多种免疫因子在复发性HSK中的作用。我们选择使用小鼠的复发性HSK模型，因其具有资源丰富且再激活时间可控的优势——再激活可通过暴露于UV-B光诱导而精确控制。迄今为止，该模型已帮助使用它的实验室鉴定了多个对该疾病具有重要意义的免疫学因子，同时也使我们能够评估治疗手段和疫苗的有效性。

大多数关于疱疹性角膜病的研究采用原发感染模型。然而，HSV-1的原发感染通常不会导致人类疾病。本文描述了一种更接近人类疾病的疱疹性角膜病复发模型。

小鼠复发性疱疹性间质性角膜炎，一种研究人类HSK的模型

单纯疱疹性眼病，称为单纯疱疹性间质性角膜炎（HSK），是一种可能导致失明的角膜感染，每年导致超过30万例临床……

本实验的总体目标是研究单纯疱疹病毒（HSV）的复发性感染。首先以特定方式感染小鼠，使其在不造成角膜损伤的情况下建立潜伏感染。在潜伏感染完全建立后，下一步通过暴露于中波紫外线（UVB）来重新激活病毒。最后一步是收集泪膜样本，以检测病毒脱落情况，并持续观察小鼠至少五周，以监测疾病进展。最终，可通过评分疱疹性间质性角膜炎来评估小鼠中发生疾病的严重程度。这种疾病影响着全球许多人，是导致感染性失明的主要病因之一。我们采用一种小鼠模型来模拟这种特定疾病。虽然还有其他模型也能模拟该疾病，但我们认为这一模型最能准确代表该疾病的特征。今天，我想花几分钟时间，向您介绍将在本视频中出现的各位人员。这是与我一起工作了过去几个月的Chloe。这位是Nippo，一位在实验室工作的暑期学生。实验开始时，在T150培养瓶中将HSV-1在Vero细胞上培养三到四天，直至细胞融合度达到80%。此时细胞已变圆，轻轻敲击培养瓶即可使细胞脱落。将细胞悬液转移至无菌的50毫升锥形管中，然后在台式离心机中于4°C、1,510 × g条件下离心15分钟。接下来，将上清液转移至50毫升无菌橡树岭管中，然后将培养基总量的五毫升分装至每个锥形管中，用于重悬。重悬大颗粒沉淀后，将重悬的沉淀物以每32秒为一个脉冲，进行两次脉冲超声处理，每次持续一分钟。在高速落地式离心机中对上清液进行离心后，可获得少量病毒沉淀。弃去上清液后，将沉淀与少量病毒颗粒混合，再次超声处理45秒。随后将超声处理后的细胞与病毒溶液在台式离心机中于280 × g、4 °C条件下再次离心5分钟，然后将上清液分装，作为病毒原液储存于-70 °C，用于后续滴度测定。将病毒储存液上清从10⁰至10⁻⁸进行十倍系列稀释，取两组独立稀释液分别接种于12孔无菌培养板中的Vero细胞。开始感染程序前，先对小鼠实施麻醉。小鼠应持续完全麻醉20至30分钟，以确保在苏醒前病毒已被充分吸收。然后在解剖显微镜下，使用30号针头划伤右眼角膜。现在通过耳缘打孔对动物进行编号。接下来，给小鼠注射一毫升混合人血清，以保护角膜在初次感染期间免受损伤。然后使用20微升移液器将10的6次方空斑形成单位接种至划伤的眼部，并向另一只眼滴加5微升HBSS以保持湿润，同时动物处于麻醉状态以确认感染。用1毫升Vero培养基润湿一支无菌棉拭子。初次感染后三天，用该棉拭子擦拭感染眼，随后将拭子上的100微升培养液转移至培养于48孔板中的Vero细胞，这些细胞需在初次感染至少五周后使用。如上所述，拭取麻醉小鼠的感染眼睛。在48孔板盖上标记拭取日期为第0天，以控制自发性闭眼的影响。然后将小鼠置于可发射峰值波长为302纳米UVB光的透射式紫外灯中，使仅单侧眼睛暴露于UVB光下，并给予每平方厘米250毫焦耳的UVB照射剂量。然后从第1天到第7天每天对眼睛进行拭子取样。对于经UVB照射后含有传染性病毒的拭子样本，使用12孔板通过标准蚀斑实验定量病毒量，以评估小鼠的临床眼部疾病。将小鼠置于双目解剖显微镜下。角膜混浊程度按0到4级进行评分，其中0级表示基质清晰透明，1级表示基质轻度混浊。2级表示中度混浊，虹膜结构仍可辨认；3级表示重度混浊，除瞳孔边缘外，虹膜细节消失；4级表示完全混浊，无法观察到眼后部结构。新生血管化通过将角膜分为四个相等的象限，并评估每个象限内血管化的程度，按1至8级进行评分。在本第一幅图中，潜伏感染的小鼠经UVB照射诱导病毒再激活，随后对小鼠角膜混浊情况进行为期35天的监测。这些数据表明，雄性C57BL/6小鼠的角膜混浊程度显著低于雌性C57BL/6小鼠，因为在第14至35天期间，雌性C57BL/6小鼠中病毒诱导的疾病显著更严重。同样，在相同实验条件下评估角膜新生血管形成时，雄性小鼠角膜中的新生血管生长显著少于雌性小鼠；并且在第14至28天期间，雌性C57黑六小鼠的病毒诱导疾病程度再次显著更重。在进行该操作时，请务必对小鼠实施充分麻醉，使其处于睡眠状态20至30分钟。观看本视频后，希望您已了解如何利用小鼠复发性基质性角膜炎模型来研究这种人类疾病。

recurrent-herpetic-stromal-keratitis-mice-model-for-studying-human

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

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皮肤是人类病原体单纯疱疹病毒1型（HSV-1）的靶组织之一。为探究HSV-1侵入组织的途径，我们建立了一种 离体...

Ex Vivo 小鼠表皮感染单纯疱疹病毒1型

本方案提供了一种通过向经辐射处理的新生NSG小鼠肝内注射人源造血干细胞来建立人源化小鼠（hu-NSG）的方法。hu-NSG小鼠可感染HIV，并对联合抗逆转录病毒治疗（cART）具有响应，是研究HIV复制与潜伏的理想病理生理模型。...

人源化 NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) 小鼠模型在 HIV 复制与潜伏研究中的应用

本文介绍了三种用于研究人源化小鼠中 HIV...

人源化免疫缺陷小鼠模型中的慢性、急性及再激活HIV感染

足垫接种模型是体内表征病毒诱导的神经炎症反应的有力工具。特别是，该模型可清晰评估外周神经系统中启动的病毒动力学及相关的免疫病理过程。...

小鼠足垫接种模型用于研究病毒诱导的神经炎症反应

我们描述了使用猪角膜来测试实验性药物抗病毒功效的方法。...

利用猪角膜组织外植体研究单纯疱疹病毒-1抗病毒药物的疗效

接触性超敏反应（CHS）是一种小鼠过敏性接触性皮炎（ACD）的实验模型。该模型通过在小鼠剃毛的胸腹部皮肤上涂抹反应性半抗原进行致敏，随后以稀释的半抗原对耳部皮肤进行激发，从而引发肿胀反应，并通过多种方法对反应程度进行评估。...

接触性超敏反应作为过敏性接触性皮炎的小鼠模型

本方案将介绍如何建立一种增生性瘢痕小鼠模型，通过增强机械转导信号来模拟人类瘢痕的形成。该方法包括在小鼠愈合的切口处增加机械张力，并使用一种专用装置产生可重复的过度瘢痕组织，以进行详细的组织学和生物信息学分析。...

一种由机械转导驱动的类人增生性瘢痕的小鼠模型

了解复发性单纯疱疹病毒角膜基质性角膜炎的小鼠模型建立方法。该模型通过紫外线B诱导病毒再激活，模拟人类HSK疾病进程，用于评估角膜病变程度和抗病毒治疗策略。

小鼠复发性疱疹性间质性角膜炎，一种研究人类HSK的模型

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