小鼠生殖道黏膜淋巴细胞分离

淋巴细胞从小鼠生殖道隔离的一种有效的方式来进行说明。此方法利用酶消化和Percoll梯度分离，以允许有效地隔离。此技术是用于在其他物种中也适应

该程序的总体目标是从小鼠生殖道中分离淋巴细胞。这是通过首先切除整个生殖道并将组织切成小块以将淋巴细胞从组织中释放出来来实现的。用胶原酶 8 消化细碎的组织，并在 37 摄氏度下剧烈搅拌组织。

通过磁力搅拌，然后按检出梯度分离淋巴细胞。最终，淋巴细胞可以通过流式细胞术来表征该技术的意义扩展到生殖疾病的诊断和治疗。由于这种方法使我们能够了解组织淋巴细胞的行为，这些淋巴细胞通常与从循环系统中分离的淋巴细胞不同。

虽然这种方法提供了对生殖粘膜系统的了解，但它也可以适用于其他系统，例如肠道和呼吸粘膜系统。对雌性小鼠实施安乐死后，用手术剪刀做一个低中线切口，然后打开皮肤。轻轻地将肠道移到一边，识别 ucs，然后分离并去除从 ucs 到阴道口的整个生殖道。

将生殖道放入培养皿中。用一把剪刀纵向打开整个肠道。然后将组织转移到含有完整 RPMI 10 培养基的培养皿中。

现在将生殖道切成细块，然后将这些块转移到含有完整 RPMI 10 和 EDTA 的培养瓶中。将培养瓶置于磁力搅拌上，在室温下搅拌组织 2 次，每次 15 分钟，以去除最后一次搅拌期后的上皮细胞，弃去上清液，然后将组织块通过 40 微米细胞过滤器倒入 50 毫升锥形管中。用完全培养基洗去 EDTA 残留物。

现在将过滤的组织块转移到装有新鲜 RPMI 10 和胶原酶的新培养瓶中，并在 37 摄氏度下在磁力搅拌装置上消化这些碎片，一小时后剧烈搅拌组织，通过 100 微米细胞过滤器将上清液倒入新鲜的 50 毫升锥形管中，并将过滤后的细胞悬液保持在冰上。将含胶原酶的新鲜 RPMI 10 添加到原始培养瓶中，每次使用新鲜的完全 RPMI 10 和胶原酶再搅拌组织两次。第三次消化后，溶液中不应存在可见的组织碎片。

现在，将来自三种消化的上清液汇集在一起。将细胞在 410 G 和 4 摄氏度下离心 5 分钟，然后弃去上清液。首先将细胞沉淀悬浮在新鲜的 40% 每次调用溶液中。

将每次调用 40% 的细胞悬液加入梯度管中，然后小心地衬垫和等体积的新鲜制备。每次调用 70%。现在，将梯度样品在室温下离心 20 分钟，并断开样品。

离心后，小心地在 perol 梯度之间的界面层收获淋巴细胞。然后在室温下用 RPMI 1 至 3 洗涤回收的细胞 10 分钟。最后，弃去 sup natant re 后，根据所需的实验程序将淋巴细胞悬浮在适当的溶液中。

该点图是从衣原体尿管内感染小鼠的生殖道中分离出淋巴细胞群的一个例子。感染后 7 d，将单细胞悬液设门 CD 3 阳性淋巴细胞，分析表达 CD 4 和 CD 8 的细胞发育后。这项技术为研究人员在模拟人类疾病的病毒小鼠疾病模型中探索生殖淋巴细胞功能和细胞特征铺平了道路。