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2013年3月16日
我们提出检测测试血管通透性。此测定是基于其扩散到间隙空间的染料和随后的可视化的静脉注射。
本视频介绍了一种用于测试血管通透性的体内测定法。在小鼠中，内皮细胞排列在血管中并形成半透性屏障。在生理条件下，内皮对大多数蛋白质是不可渗透的，因此它们被限制在血流中。
在促进血管通透性增加的病理条件下，内皮细胞部分失去彼此接触。内皮对白蛋白等小蛋白具有渗透性。在该测定中，我们静脉注射一种蓝色染料，该染料在内皮通透性增加的情况下与白蛋白结合。
D 穿过内皮屏障并扩散到间质间隙。这最终导致在实验开始之前受影响的组织呈蓝色。准备所有必需的材料，用管道输送和无菌吸头。
伊文思蓝、无菌刮刀、无菌 PBS、无菌注射器和针头。小鼠、小鼠限制器解剖器械、解剖板和针。平衡形式 ide，用于 55 摄氏度水浴的加热块。
C.Vet 分光光度计称量 Evans 蓝粉末并将其转移到无菌管中。添加无菌 PBS 以获得 0.5% 的工作浓度。缓慢将 200 μL Evan Blue 溶液吸入注射器中。
避免所有气泡，并消除注射器中逸出的任何气泡。将鼠标放在约束装置中，这样动物就不会真正移动，但可以处理它的尾巴。将约束装置侧放，使侧尾静脉很容易看到并朝上。
用非惯用手夹在拇指和食指之间抓住尾巴。在尾巴底部施加压力，使其起止血带的作用。以 10 度角插入针头。
斜面向上并推进到静脉中。保持针头和注射器与尾部平行。不要施加背压以确认针头在静脉中的正确位置。
由于这可能会使静脉塌陷，因此将 200 微升 Evan Blue 溶液缓慢注入尾部。观察柱塞前进的难易程度，因为这是正确放置在静脉中的证明。如果针头放置正确，拔针后会出现一小滴血。
在喷射部位施加压力，直到出血停止。将鼠标放回笼子中并观察 30 分钟。牺牲鼠标并将其固定在白板上。
在本视频中，我们展示了一种受控小鼠和一种经过基因工程改造而缺乏控制内皮完整性的基因的小鼠。打开腹腔和胸腔以暴露器官，收集感兴趣的器官并将它们放入 end-DPH 管中。在此之前丢弃老鼠尸体。
确保您拥有所有感兴趣器官的代表性图片。标记一组新的试管，称量空试管。将天平值调至零，然后将组织样本转移到试管中并称重。
对所有样品重复上述步骤。向每管中加入 500 微升螨虫。将所有试管转移到 55 °C 加热块或水浴中。
孵育 24 至 48 小时以从所有组织中提取埃文思蓝，在 600 纳米波长下测量吸光度。使用 500 微升的 IDE 作为空白。测量每个样品的光密度。
在此步骤中可以很容易地观察到血管通透性的显着差异。计算纳克。Evan Blue 每毫克组织外渗。
将所有数据绘制在图表中他们提出的方法，也称为 M 测定，用于在实验开始前测试小鼠的血管通透性。应掌握尾静脉注射，因为这种技术需要大量练习。结果应记录为静态图片和定量测量，并应始终附有分子分析。
除了环境条件外，血管通透性还在很大程度上取决于动物的年龄和体重。因此，实验应至少重复 3 次并进行统计分析。
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概述
该视频介绍了一种使用蓝色染料（与白蛋白结合）的体内检测方法，用于测试血管通透性。该检测突出了内皮细胞在生理和病理条件下维持血管完整性的作用。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 血管生物学
- 病理生理学
背景
- 内皮细胞衬里血管并形成半透性屏障。
- 在正常条件下，内皮对大多数蛋白质是不透过的。
- 病理条件可能会增加血管通透性。
- 小型蛋白如白蛋白可以通过受损的内皮。
研究目的
- 展示评估血管通透性的方法。
- 可视化染料在间质空间中的扩散。
- 了解内皮通透性增加的影响。
使用的方法
- 静脉注射蓝色染料。
- 可视化染料扩散到间质空间。
- 使用小鼠作为模型生物。
- 评估内皮细胞的完整性。
主要结果
- 该检测有效地展示了病理条件下通透性的增加。
- 染料与白蛋白结合表明内皮屏障受损。
- 结果可以帮助理解与血管相关的疾病。
- 视觉证据支持内皮细胞在血管通透性中的作用。
结论
- 该检测是研究血管通透性的有价值工具。
- 它提供了对血管疾病机制的洞察。
- 未来的研究可以在这一方法的基础上探索治疗干预。
常见问题
Executive Industry Relevance
Quantitative assessment of vascular permeability in vivo is critical for de-risking targets and mechanisms implicated in endothelial barrier function. This Evans Blue assay enables direct measurement of endothelial integrity, supporting predictive confidence in early discovery and translational research. Its simplicity and quantitative output facilitate robust comparison across experimental conditions, informing portfolio decisions in vascular biology and related therapeutic areas.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct interrogation of endothelial barrier function in disease-relevant models.
- Supports mechanistic de-risking by quantifying vascular leakage in genetic or pharmacologic perturbations.
- Facilitates functional target validation for pathways regulating vascular permeability.
- Provides quantitative endpoints for hypothesis-driven portfolio triage.
Screening & Assay Development
- Delivers validated, reproducible readouts for vascular permeability in preclinical models.
- Standardizes measurement of dye extravasation for cross-study comparability.
- Supports assay scalability and platform reuse for compound evaluation.
- Enables reliable detection of permeability changes in response to candidate interventions.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant endpoints for vascular dysfunction and tissue injury models.
- Provides translational continuity from discovery through preclinical validation of vascular targets.
- Supports risk-adjusted advancement decisions based on quantitative permeability data.
- Enables biomarker alignment for vascular integrity in preclinical studies.
Pipeline & Workflow Integration
This in vivo permeability assay is positioned at the interface of early discovery, target validation, and preclinical model assessment, providing a bridge from mechanistic studies to translational research.
- Discovery Biology: Quantifies endothelial barrier disruption to clarify pathway function and biological risk.
- Screening: Offers standardized, quantitative outputs for reproducible assessment of vascular leakage.
- Analytics: Provides absorbance-based measurements for statistical comparison of experimental groups.
- Translational Research: Connects mechanistic findings to disease-relevant vascular endpoints in vivo.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable platform for diverse vascular permeability studies across programs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in vascular target validation.
- Operational Value: Delivers standardized, scalable, and reproducible in vivo permeability measurements.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and reduces late-stage biological risk in vascular programs.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of vascular-targeted assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in animal handling and intravenous injection techniques.
- Needs access to spectrophotometry and tissue processing infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization for reproducibility and comparability.
- Must account for biological variables such as animal age, weight, and environmental conditions.
- Necessitates statistical analysis and replication to ensure robust, interpretable results.
