染色体制备培养细胞

该程序的总体目标是收获和准备用于 GB 带和分子细胞遗传学检测的染色体。首先，将细胞培养至对数期。然后用 smid、低渗剂和固定剂收获染色体。

将细胞悬液放入载玻片中。对一张载玻片进行染色。作为染色体制备的监测器，继续对剩余载玻片进行 GB 带或分子技术。

作为 GB 条带化的最后一步，通过光学显微镜和核型分析分析染色体。最终，染色体和细胞核将可用于核型分析或鱼类分析。我最初想到发布这种方法是因为其他研究人员要求帮助检测各种生物体不同类型细胞中的染色体不稳定性以及随后的分子细胞遗传学检测

这项技术对于包括癌症在内的许多先天性遗传病的诊断和最终预后至关重要，因为它允许可视化染色体重排，从而具有诊断意义。对于这些疾病，虽然这种方法可以提供对在各种类型的人类细胞中发现的染色体重排的见解。它也可以应用于来自其他生物体的细胞，如 Resus Maca 大鼠和小鼠培养。

200 万个贴壁细胞达到 80% 的汇合度，并添加 10 微升/毫升 10 微克。Col 每毫升细胞。将细胞在 37 摄氏度下在 5% CO2 培养箱中孵育 45 分钟。

然后使用无菌移液器将培养基从培养物转移到 15 毫升锥形管中，并保留以备后用 洗涤细胞，将 2 毫升 HBSS 加入培养瓶中，旋转并去除缓冲液。接下来，加入 1 毫升胰蛋白酶，确保它覆盖培养瓶的整个表面。一旦大多数细胞分离，将锥形管中的培养基移回细胞上。

将 10 毫升细胞悬液分装到 15 毫升锥形管中。以 200 Gs 离心 10 分钟。去除 supernat。

将沉淀重新悬浮在 10 毫升 75 毫摩尔氯化钾中，在 37 摄氏度孵育 10 分钟后预热至 37 摄氏度。以 200 Gs 离心 5 分钟。在 25 摄氏度下，除去除 0.5 毫升外的所有上清液，并小心地重悬沉淀。

向细胞中加入 5 毫升新鲜的汽车噪音固定剂。然后加入 5 毫升或更多的固定剂，并以 200 G 的离心力涡旋离心 5 分钟。复苏，将每个细胞沉淀悬浮在 5 毫升固定剂中。

将细胞在 4 度下储存长达一年。将细胞以 200 G 离心 5 分钟。在 25 摄氏度。

取出 sup natant，直到轻轻复苏悬浮沉淀后仅剩 0.3 至 0.5 毫升。将三滴细胞悬液从约 2 英寸的距离移液到倾斜约 45 度的载玻片上。并让悬架在滑梯上滚动。

在载玻片上加入一大滴新鲜的汽车噪音，作为固定剂。用纸巾将载玻片的背面推入，然后将载玻片取出以完全干燥。准备新鲜的 gim 维持溶液。

将玻片放在染色架上。在 gim 维持溶液中覆盖整个玻片。五分钟后，用蒸馏水冲洗玻片并风干。

在载玻片上加入四滴烫发封片，并放置盖玻片，确保盖玻片下方没有气泡。用纸巾去除每个坐骑的多余部分。用光学显微镜在 10 x 和 100 x 放大倍率下分析细胞。

如果中期细胞丰富且分布良好，则剩余的载玻片可用于其他实验程序。将 50 毫升处理溶液加入四个 Copeland 罐中。然后将每张载玻片浸入 1 号罐中 5 秒钟。

快速冲洗 2 号罐中的载玻片。将其放在 3 号罐子中至少 30 秒。在 4 号罐子中冲洗，然后让载玻片干燥。

准备新鲜的 GIM 维持溶液。将玻片放在染色架上。将整个玻片覆盖在 gim 维持溶液中 5 分钟。

按照染色的顺序冲洗载玻片和蒸馏水。然后干燥至少 10 分钟。如前所述，使用烫发支架放置盖玻片。

然后在光学显微镜下分析细胞中的剩余载玻片。调整 tripsin 孵育时间。基于第一张幻灯片的结果。

成功的测定可产生分布良好且具有合适染色体形态的染色体。适当地。GB 带状染色体包含特征性的浅色和深色条带图案。看完这个视频，你应该对如何收集染色体进行 GB 带化和进一步的分子细胞遗传学检测以阐明染色体不稳定性有了很好的了解。

一旦掌握，如果执行得当，这种收割技术可以在大约三个小时内完成。对于 GB 条带程序，重要的是在进行 GB 条带之前在一张载玻片上初步测试 tripsin 孵育时间。其余的幻灯片。