快速比色测定RNA和DNA生物分子样品进行定性区分

以下实验的总体目标是确定生物分子的潜在异质样品是否含有核酸和/或还原糖。如果是这样，请根据 RNA 和 DNA 糖基团的不同反应性来区分它们。这是通过首先应用 Benedict 测定来确定生物分子混合物是否含有游离还原糖来实现的。

作为第二步文件，使用 arsen 或 assay，以确定任何糖成分是否含有 pento 环。接下来的菜品二苯胺试剂用于确定戊糖是否是 DNA 中的脱氧核糖，是否如 RNA 中的脱氧核糖。结果显示了基于样品中糖基成分的不同反应性形成的易于区分的颜色产物的生物聚合物类型，可以使用光谱光度测量根据标准曲线进行分析。

与现有方法（例如使用荧光染料、pico green 或赛博金的电泳）相比，该技术的主要优点是不受大小、电荷或糖成分的限制，并且在时间和成本方面都有效 To 测定以减少糖。制备适当体积的 6 x Benedict 试剂，由 940 毫摩尔无水、588 毫摩尔碳酸钠、二水合柠檬酸钠和 68 毫摩尔铜组成。二硫酸盐五水合物。

对于每个要测定的样品，将 100 微升的 6 x Benedict 试剂添加到 1.5 毫升微量离心管中。向每管中加入 10 至 500 μL 样品，并加入双蒸水，使最终体积达到 600 μL涡旋或移液管。混合溶液。

将样品在沸水浴中孵育 20 分钟，然后让它们冷却 10 分钟，然后以大约 10， 000 RPM 的速度离心 5 分钟。为了沉淀任何颗粒物质，在用 475 纳米的水冲刷 UV vs. 分光光度计后，将 supinate 转移到干净的 vete 中。

测量样品的吸光度以测定戊糖。根据文本方案，用 24.2 毫摩尔、6 摩尔氯化氢和每体积 0.025 重量的六水合物制备新鲜的 2 x BAL 试剂。对于每个样品，向微量离心管中加入 500 μL 胆汁试剂。

向每管中加入 10 至 500 微升样品，并加入双蒸水，使最终体积达到 1 毫升。混合。将样品煮沸 20 分钟，然后在室温下冷却 10 分钟，然后旋转样品以沉淀颗粒材料，用水作为空白测量 660 纳米处的吸光度。

准备 2 x 皿二苯胺试剂，由 60 毫摩尔二苯胺、7 摩尔冰醋酸、179 毫摩尔硫酸和每体积 62% 体积组成。乙醇。对于每个反应，将 500 μL 试剂、样品和双蒸水混合，使总体积达到 1 mL。将样品煮沸 20 分钟，冷却室温并旋转后，测量 600 纳米处的吸光度。

这里显示了她对 Benedicts Biles 武器库和培养皿的代表性定性数据，以及已知参考化合物的二苯胺分析。左侧面板显示阳性和阴性对照，右侧面板显示检测的可见检测范围。该面板通过显示培养皿与不同异质性样品的反应来说明分析的稳定性。

例如，带有 RNA 的 DNA 或带有蛋白质的 DNA。请注意，即使存在污染的 RNA 或蛋白质，含有 DNA 的样品也能保留培养皿检测的阳性结果。先前样品的稀释范围不同，因为每个反应都有不同的目视检测限。

根据被测定的糖的类型，可以使用光谱光度法而不是目视检测来扩大测量范围，如本标准曲线所示。对于 Benedict 测定，一旦掌握，如果作得当，这项技术可以在 30 分钟内完成。