在大鼠模型慢性营养输液

慢性输注葡萄糖和脂肪乳大鼠的一种协议。该模型可用于研究营养过量对器官功能和生理参数的影响。

该程序的总体目标是对大鼠的颈静脉和颈动脉进行导管插入，以注入葡萄糖和脂质，作为慢性营养过剩的模型。这是通过首先在全身麻醉下进行颈静脉和颈动脉导管插入来实现的。手术后，让大鼠恢复六天。

然后，导管通过安装在笼顶部的系绳和旋转接头连接到输液泵。最后，向大鼠输注葡萄糖和脂质溶液。最终，可以获得显示慢性营养过剩对葡萄糖稳态影响的结果。

与其他模型（例如遗传模型）相比，该技术的主要优点是可以检查 β 细胞功能响应营养过剩的早期变化。另一个优点是可以特异性调节循环中葡萄糖和脂肪或脂质的水平。现在，我们使用这项技术来检查 β 细胞功能的变化，但当然，它也可以用来查看其他生理参数，例如胰岛素抵抗。

例如，演示该程序的是我实验室的动物卫生技术员 Grace Ferguson，在开始之前，至少在手术前 16 到 24 小时通过高压灭菌器对所有手术器械进行消毒。将插管放入 2.6% 谷醛中进行消毒。每种输注条件使用四只大鼠，称量每只大鼠，然后计算镇痛剂和抗胆碱能药物的剂量。

用 2% 至 3% 的 iso、氟和氧气麻醉大鼠后，检查脚趾的镇静水平。捏住老鼠并将其放在它的肚子上。将耳朵后面的区域剃到肩膀的根部，然后将动物仰面翻转，并将脖子下方的区域剃到前爪。

接下来，用洗必泰酒精和碘对手术部位消毒 3 次，然后给予卡洛芬和格隆溴铵。将大鼠转移到手术区域，然后用无菌技术。使用连接到装满 5 个单位肝素化盐水的 1 毫升注射器的 PE 50 套管，插管右颈静脉和左颈动脉为避免恢复期凝血，通过钝化的 50 号针头用 23 个单位的肝素化盐水冲洗套管，然后在手术后使用另一个 23 号针头关闭每个套管， 从门牙底部修剪约 2.5 毫米，并将大鼠放入输液夹克中，以防止插管被吃掉。

为了帮助排出 ISO 氟，以每分钟 1 升的速度施用氧气。将大鼠放入加热的笼子中，直到它完全清醒。在第 1 天和第 2 天，手术后。

称量大鼠，给予格隆溴铵，第 1 天皮下注射 2 次，第 2 天皮下注射 1 次，并在必要时根据术后第 7 天的文本方案提供额外治疗。称量每只大鼠以计算输注流速后，通过弹簧内部的管子延长线将颈静脉套管连接到蓝色旋转接头。用 5 个单位的肝素化盐水冲洗插管，并将它们连接到系绳上。

然后使用系绳和旋转接头将大鼠连接到输液系统。现在用 5 个单位的肝素化盐水再次冲洗插管以防止凝血。让大鼠适应系绳并旋转至少 24 小时，然后再开始输注以进行输注。

首先从每只大鼠的颈动脉中抽取 0.15 毫升血液并测量血糖。冲洗颈静脉插管并使用 50 单位的肝素化盐水以防止两个插管凝结。将血样转移至含有 2% EDTA 的 0.5 毫升收集管中，然后以 10， 000 RBM 离心两分钟，并在零下 20 摄氏度下冷冻血浆。

为此处列出的每种输注条件填充两个 60 毫升注射器。使用 Y 型接头和灭菌的共挤 T 22 管将每对溶液连接在一起。然后将注射器放在 Harbor 33 到注射泵上，将注射器 1 放在泵的前面位置，将注射器 2 放在后面位置。

接下来，更换笼底，从笼烤架顶部取出所有食物，然后用 150 克标准食物代替。然后将注射器连接到笼式格栅上的旋转接头上，并正确冲洗注射器。要使用最近确定的体重从管线中去除滞留的空气，请使用 Excel 文件计算输注流速，该文件根据在整个实验过程中希望保持的预定葡萄糖水平将葡萄糖输注速率或 GIR 转换为每小时毫升数。

根据制造商的设置，将泵设置为管理 60 个注射器的流速，然后输入注射器 1 和注射器 2 的流速。然后启动泵。启动泵后，确认旋转接头或插管没有泄漏，并且输液管没有扭曲。

此外，请确认管路中没有气泡。输注 3 小时后，采集少量血样并使用便携式血糖监测仪测量血糖读数。小容量会阻止改变血容量和/或血细胞比容。

使用此时间表采集额外的血液样本。根据测得的血糖值，调整注射器 1 的速率，以将血糖维持在 220 至 250 毫克/分升。注射器 2 的速率保持不变，以将游离脂肪酸维持在每升 1 毫摩尔。

输注 24 小时后，更换笼底并称量笼式烤架中剩余的食物。在 72 小时内，根据需要将 UNE 部分放回笼子、烤架并重新填充注射器。观察大鼠是否有任何炎症或不适的迹象，并根据需要进行适当的护理。

在输注结束时，可以对大鼠进行高血糖或 u 血糖高胰岛素钳夹研究，随后安乐死或安乐死以收集胰腺进行组织学或孔眼分离。该图显示了 72 小时输注期间的血液、葡萄糖和脂肪酸水平。如此处的设计所示，在整个输注过程中，葡萄糖水平保持在每分升 220 至 250 毫克左右。

啮齿动物具有很强的能力，可以通过增加内源性胰岛素分泌来补偿葡萄糖输注。因此，在输注过程中必须增加 GIR，以使血糖水平维持在相对稳定状态。然而，血糖水平往往会在输注结束时降低。

此外，根据食物的体重测量，由于注入葡萄糖和脂肪的动物正在接受热量营养，它们会自发地减少食物摄入量。与一旦掌握盐水注入对照大鼠不同，如果作得当，该技术可以在每只大鼠 30 到 40 分钟内完成。因此，按照此程序，我们通常会进行高血糖或 U 血糖高胰岛素贫血钳夹，以分别测量胰岛素分泌或胰岛素敏感性。