联合5/6肾切除术、高盐饮食及一氧化氮合酶抑制在Lewis大鼠中诱导慢性肾脏病

本实验的总体目标是在Lewis大鼠中诱导慢性肾病。首先，给予大鼠一氧化氮阻断剂NG-硝基-L-精氨酸（LNNA），持续给药四周；随后，完整切除右侧肾脏。

一周后，切除左侧肾脏的三分之二。最后，在使用 LNNA 并配合高盐饮食治疗的同时，持续监测大鼠肾功能衰竭的发展情况。最终，可通过收集尿液以测定蛋白质和血细胞比容，以及检测血液、血浆和/或尿液中的尿蛋白排泄量（UIA）和收缩压，获得显示已建立的慢性肾脏病的结果。

肾功能最终由菊粉和对氨基马尿酸（PAH）清除率决定。该方法有助于回答肾脏病学领域的一些关键问题，例如更深入地理解慢性肾脏病（CKD）的病理机制，并可用于研究治疗干预措施的效果。在首次肾切除手术前四周，开始在大鼠的饮水中添加20毫克/升的一氧化氮合酶抑制剂LNNA。

根据此时间表，在开始操作前，使用70%酒精对台面进行消毒。手术准备时，先对以下器械进行灭菌：一把12厘米长、带有一到两个齿的直纹学生组织镊，一把学生用标准型镊子，两把Simkin镊，一把Mayo剪，一把学生用虹膜剪，以及一把带剪刀的Olson Heger持针器。

然后准备好以下物品：一台带有加热垫和加热灯的手术台、氧气和异氟烷麻醉系统、组织巾、剃毛刀、无菌外科手术器械、5 cm × 5 cm 和 10 cm × 10 cm 的无菌纱布、70%酒精、0.9%氯化钠溶液、1 mL注射器、25号针头、明胶海绵、4.0和5.0号Vicryl缝线、0.03 mg/kg的丁丙诺啡，以及术后大鼠使用的清洁笼具。

在诱导室中使用 4% 异氟烷诱导麻醉并给予预先镇痛。必要时，将大鼠转移至桌面上的加热垫上，使其呈左侧卧位，并通过鼻罩以 2% 异氟烷和一升氧气的混合气体进行通气。剃除大鼠侧腹部毛发，并用酒精对手术部位进行消毒。

由于手术在半无菌环境中进行，我们仅用酒精对发红的皮肤进行消毒，以实现更无菌的准备。可使用碘伏进行刷洗，戴上头帽和口罩，然后在戴上无菌外科手套前洗手并消毒双手。接下来，使用解剖镊子和钝头剪刀，沿肋骨方向做一道一至一点五厘米长的切口。

然后通过钝性分离背部肌肉，暴露右侧肾脏。当肾脏的下极可见后，使用小型钝头镊子小心夹住肾周脂肪组织。再用镊子轻轻牵拉肾周脂肪，注意不要扰动肾上腺，并将肾脏向外牵出，以分离肾脏与肾上腺。

用镊子夹住脂肪组织内侧位置，轻柔地将肾上腺与肾脏之间的脂肪组织向上移动。将肾脏轻轻置于纱布上，清除周围的脂肪及结缔组织。辨认肾动脉和肾静脉，并稍作游离。

在血管周围打一个单结结扎，以防止结扎线滑脱。剪断后，小心地将活结沿血管向主动脉方向移动约0.5厘米，以在肾脏与结扎结之间留出间隙。接着，不剪断结扎线末端，连续打两个双结固定。

如果灌注成功停止，肾脏的颜色会立即变为棕色。然后靠近肾脏处切断肾血管并将其摘除。轻轻牵拉结扎线的长端，检查肾血管是否出血。

结扎线应保留在血管上。剪断结扎线的长端。残余的肾血管将回缩至腹腔内。

立即使用5.0号Vicryl连续缝合线缝合后肢骨骼肌。肌肉内注射每千克0.03毫克的丁丙诺啡。然后使用4.0号Vicryl皮内缝合线缝合皮肤。

随后，将切除的肾脏吸干并称重。将大鼠置于清洁的单独笼子中恢复，笼子一半放在加热垫上，并提供食物和水，按照文本方案进行监测。七天后。

为第二次手术做准备，计算右侧肾脏约三分之二重量，并准备好小块明胶海绵。重复之前的操作，游离左侧肾脏并分离其上的肾上腺。将锐利的剪刀环绕左侧肾脏上极，一次性切除上极，立即用一块明胶海绵覆盖，并用无菌纱布施加轻柔压力。

然后切除肾脏下极，并以类似方式覆盖，以防止血液在皮肤表面凝结。抬起肾脏，使用无菌纱布对两侧明胶海绵垫施加轻柔压力，直至出血停止。若另一明胶海绵垫处出血持续，将残留的肾脏连同附着的明胶海绵垫放回腹腔内，缝合肌肉层和皮肤。

按照之前所述的相同步骤，监测大鼠的恢复情况并进行饲养。在次全肾切除术后，大约保留了总肾质量的六分之一。该图显示了右侧肾脏被切除肾质量的计算百分比，包括平均值和标准差。

在我们之前的实验中，术后一周内，残留左肾发生代偿性肥大，导致根据右肾计算重量所确定的需切除肾组织量被轻微低估。然而，由于无法准确测定左肾重量，该方法仍是切除约六分之五肾组织最为精确的方式。肾功能衰竭的进展通过收集尿液以测定蛋白质和肌酐、采集血液以检测血浆尿素和肌酐水平，以及测量收缩压来进行监测。

肌酐清除率可以进行计算，但由于大鼠体内存在显著的肾小管肌酐分泌，该方法往往会低估肾小球滤过率（GFR）的下降程度，因此凸显了采用菊粉和对氨基马尿酸（PAH）清除率作为测定肾功能金标准方法的重要性。Conners 等人已详细描述了完整的实验流程。菊粉和 PAH 清除率是根据其在尿液样本中的浓度、尿液流速以及血浆浓度计算得出的。随着时间推移，慢性肾病（CKD）大鼠会逐渐出现高血压、贫血、蛋白尿、肾小球滤过率显著降低以及有效肾血浆流量减少等表现。

经过六周后，慢性肾脏病（CKD）已稳定建立，此时是测试挽救性干预措施的合适时间点。在此阶段，可观察到高血压和蛋白尿的显著进展，同时血细胞比容和肾功能呈现轻度恶化。其他未在本实验中重点观察的症状包括钙磷代谢和脂质代谢紊乱等，具体表现还取决于大鼠品系。本实验所用的Lewis大鼠在CKD发展过程中可能存在显著差异。

通过添加高盐饮食和一氧化氮抑制剂以诱导高血压和内皮功能障碍。一小步。如果操作得当，该技术可在约50至20分钟内完成。

观看本视频后，您应该能够很好地掌握如何通过逐步次全肾切除术在 loose reds 中诱导慢性肾病。