通过玻璃体下注射透明质酸钠建立啮齿类动物视网膜脱离模型

本实验方案的总体目标是建立高度可重复且稳定的实验性视网膜脱离模型，同时避免出现视网膜下出血。该目标的实现首先需要在后部角膜缘处切开颞侧结膜，以分离结膜与巩膜。第二步，使用30号针头的尖端进行可自行封闭的巩膜切口和角膜穿刺。

接下来将尿钠注入视网膜下腔，使神经感觉层视网膜与下方的视网膜色素上皮层分离。最后一步是在巩膜伤口处涂抹氰基丙烯酸酯胶水，并将结膜复位至原始位置，以降低尿钠泄漏的风险。最终通过盖玻片检查眼底，确认已成功形成无视网膜下出血的团块状视网膜脱离。

现有的减少啮齿类动物视网膜脱离的方法可能导致视网膜脱离高度和持续时间的变异性，从而导致测得的细胞死亡率不一致。本技术可 reproducibly 产生水疱样且持久的视网膜脱离，同时降低视网膜下出血的风险，从而为啮齿类动物提供一种可靠的视网膜脱离模型。在啮齿类动物中建立实验性视网膜脱离操作相对简单，病程合理，且与人类疾病高度相似。

因此，这是研究感光细胞死亡机制以及预防视力丧失疗法的理想模型。在视网膜变性类疾病中，已知视网膜脱离后感光细胞的死亡存在差异，因此建立一种可重复且不伴有视网膜下出血的视网膜脱离模型具有优势。因为视网膜脱离持续时间的延长或出现视网膜下出血均可能影响感光细胞的死亡过程。

麻醉一只八周龄的小鼠后，修剪动物的胡须，然后在手术显微镜下用含有5%苯肾上腺素和0.5%托吡卡胺的溶液散大瞳孔。切开动物的结膜，局部应用0.5%盐酸丙美卡因眼科溶液进行表面麻醉。将小鼠置于侧卧位，鼻部朝向术者，然后在后部角膜缘处切开颞侧结膜，使用一对镊子将结膜与巩膜分离。

在角膜缘处抓握结膜以固定眼球。然后持有一支斜面朝上的30号针头，用针尖在巩膜上制作一个隧道，穿透巩膜进入脉络膜，但不穿透视网膜。

接下来，将30号针头与虹膜平行，穿刺角膜以降低眼内压，此时针尖斜面朝下。将连接至10微升Hamilton注射器的33号针头插入视网膜下腔，注入3.5微升尿酸钠溶液。

这将使约50%的神经感觉视网膜与下方的视网膜色素上皮分离。使用镊子围绕角膜穿刺口推动角膜，使房水从角膜穿刺口流出，然后使用外科纤维素探针确认巩膜伤口无渗漏，以降低尿酸钠泄漏的风险。在巩膜伤口处涂抹氰基丙烯酸酯胶水，然后将结膜重新复位至其原始位置。

使用盖玻片检查眼底，确认形成一个局限性视网膜脱离，且无视网膜下出血。最后，向眼部涂抹抗生素软膏以降低感染风险。将小鼠置于加热垫上，防止体温过低。

继发于低血压后。动物从麻醉中苏醒后，将其放回笼中。为评估本方案所诱导的视网膜脱离的持续情况，分别在诱导脱离后的第3天、第7天和第14天制备冷冻切片。

每个时间点使用六只眼球，进行苏木精和伊红染色，用于观察含有团块的切片。视网膜脱离接近晶状体。

所有眼球均未出现感染或晶状体损伤的迹象。一旦掌握该手术技术，整个操作可在约五分钟内完成。在进行该操作时，重要的是每一步都应轻柔操作，以避免钠离子流失、强光照引起的视网膜下出血或晶状体损伤，这些因素均可能影响脱离视网膜中受体细胞的死亡。观看本视频后，您应能够充分理解如何在啮齿类动物中建立实验性视网膜脱离模型，且该模型具有可重复、持续稳定的脱离高度，并不伴有视网膜下出血。