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DOI: 10.3791/50660-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
创建实验性视网膜脱离与剥离的可重复性和持续的高度,没有视网膜下出血,是研究感光细胞损失的视网膜疾病的病理生理和评估潜在的治疗干预措施非常重要。在这里,我们报告中详细这样的方法。
该程序的总体目标是创建实验性视网膜脱离,具有可重复和持续的脱离高度,无视网膜下出血。这是通过第一个 inci 完成的,即后缘的颞结膜,用于将结膜与锁膜分开。第二步,使用 30 号针头的尖端进行自密封巩膜切口和角膜穿刺。
接下来,将尿钠注射到视网膜下间隙,以将神经感觉视网膜与下面的视网膜色素上皮分离。在最后一步中,将氰基丙烯酸酯胶涂在巩膜伤口上,并将结膜重新连接到原来的位置,从而降低钠霍尔尿漏的风险。最终,使用盖玻片检查眼底,以确认没有视网膜下出血的推注视网膜脱离。
减少啮齿动物视网膜脱离的现有方法会导致高度的变化和视网膜脱离的持续性,从而导致测量的细胞死亡率不一致。使用这项技术,可以创建可重复的大疱性和持续性视网膜脱离,从而降低视网膜下痔疮的风险,从而为啮齿动物的视网膜脱离提供可靠的模型。啮齿动物的实验性视网膜脱离相对简单,具有合理的时间过程,并且与人类疾病非常相似。
因此,它是研究感光细胞死亡机制和预防视力丧失疗法的绝佳模型。在视网膜退行性疾病中,知道脱离的视网膜中的可变感光细胞死亡是有利的,在没有视网膜下出血的情况下产生可重复的脱离。这是因为视网膜脱离持续时间延长或视网膜下出血的发生会影响感光细胞死亡。
麻醉八周龄的小鼠后,修剪动物的胡须,然后在手术显微镜下用含有 5% 苯基 rine 和 0.5% tropic 的溶液扩张瞳孔。切开动物,局部麻醉,0.5%盐酸丙烷滴眼液。将鼠标置于横向位置,鼻子朝向外科医生,然后在后角膜缘插入颞结膜,使用一对镊子将结膜与巩膜分开。
抓住角膜缘处的结膜以控制眼睛。然后拿着一根斜面朝上的30号针头。使用针尖在巩膜上开一条隧道,穿过巩膜进入脉络膜,而不穿透视网膜。
接下来,将 30 号针头与虹膜平行,刺穿角膜以降低眼压。现在将斜面朝下。将连接到 Hamilton 10 μL 注射器的 33 号针头插入视网膜下间隙,并注射 3.5 μL 钠尿液。
这将使大约 50% 的神经感觉视网膜从下面的视网膜色素上皮中分离出来。使用镊子将角膜推到角膜穿刺周围,让房水从角膜穿刺处流出,然后用手术纤维素矛确认巩膜伤口没有渗漏,以降低钠尿漏的风险。将氰基丙烯酸酯胶涂在巩膜伤口上,然后将结膜连接到其原始位置。
使用盖玻片检查眼底并确认形成脓注视网膜脱离,无视网膜下出血。最后,在眼睛上涂抹抗生素软膏以降低感染风险。将鼠标放在加热垫上以防止体温过低。
继发于低血压。从麻醉中醒来后,将动物放回笼子。为了评估该方案造成的视网膜脱离的持续性,在诱导脱离后的第 3 天、第 7 天和第 14 天进行冷冻切片。
每个时间点使用 6 只眼睛,血红素和伊红。染色用于可视化切片,每个切片显示一个推注。接近晶状体的视网膜脱离。
没有眼睛表现出任何感染或晶状体损伤的迹象。一旦掌握,这项手术可以在大约五分钟内完成 在尝试此程序时,重要的是要轻柔地执行每个步骤,以避免导致钠泄漏、高照度视网膜下出血或晶状体损伤,这都会影响脱离视网膜中的受体细胞死亡。观看此视频后,您应该对如何在啮齿动物中产生实验性视网膜脱离有很好的了解,该脱离高度具有可重复和持续的脱离高度,而没有视网膜下出血。
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