March 1st, 2014
本文介绍了一个协议,用于使用视频分析系统来评估恐惧学习和记忆的小鼠上下文和线索恐惧条件测试。
情境和急性恐惧条件反射测试是一种行为测试,广泛用于评估劳伦斯的学习能力。记住攻击性体验与环境线索之间的关联。然而,在这个测试中,工作场所之间存在一些方法差异,这可能导致难以比较数据和复制结果。
为了获得更稳定和有效的数据,尽可能标准化测试协议非常重要。在这里,我们演示了现场测试的协议。恐惧功能测试是一种简单、敏感且可靠的测试,用于评估您的记忆力。
该测试通常用于了解神经等分子机制以及学习和记忆的基础,也用于评估潜在的精神疾病(如应激后障碍和精神分裂症)小鼠模型的认知功能。在面对测试的行为中,它以学习和记忆指数为衡量标准,通过人类观察者的化进行评分,是一些自动化系统自动分析使用行为。我们使用图像 FG 和基于图像 A 的软件程序开发了图像分析系统。
我们正在分发此类软件程序,可以在此地址免费下载。在本文中,我们介绍了我们的测试方案和自动分析系统。首先,我们展示如何将应用程序作员作为软件程序的映像进行保护。
其次,我们演示了测试的详细协议,包括条件上下文测试和使用该系统的设备的 Q 测试。最后,我们提出了一个结果表明 N 图像 FD 系统可以产生高度可靠的结果。现在让我们开始吧。
快速开始恐惧条件反射测试。将鼠标放置在具有等级地板的房间中。OID 显示为审计程序。
审计员排队 30 秒。此后,提供电码冲击。这种配对将一个审计队列和脚部电击进行 3 次,以增强审计员队列和电码冲击之间的关联。
在测试期间,冻结行为被衡量为相关学习和不公平记忆的指数。其次,24 小时后,将小鼠放入同一个调节室,并对其进行跳蚤行为评分。为了测量上下文控制的恐惧,然后将鼠标转移到不同形状的 G 中,没有任何听觉队列,然后呈现听觉队列。
在这个测试中,冻结行为被用作急性恐惧记忆的指标。在测试期间,鼠标行为通过连接到计算机的摄像头进行记录。该行为被判断为冻结或非冻结。
通过图像软件程序,程序可以计算出冻结时间和距离流量的百分比。这里的例子是在测试过程中演示图像分析的。实时图像以每秒 1 个长度捕获。
的 Image 从每个实时图像中为每对创建一个二进制图像。对于连续的火焰,鼠标移动的面积由程序的图像计算。当该区域低于某个阈值时,该行为被判定为冻结,这通常被定义为除了呼吸外完全没有任何运动并且难以击败。
持续时间少于定义时间阈值的冻结行为不会被判定为冻结。必须预先设置阈值,以便它在图像 Z 测量的冻结时间与人类观察之间产生最佳拟合。当面积量等于阈值或 X 3 Z 时,该行为被视为非冻结。
在这里,我们展示了使用该视频分析系统在小鼠中的测试方案。在该协议中,作员在带有金属网格的网格方室上进行建设性作,并用透明的铅图像覆盖。FD 可以在每个捕获的视频图像中区分深色主体和白色背景。
但是这个过程使我们能够分析需要将房间放置在白色地板上的对象冻结行为,以分析黑色、良好或直接黑色小鼠的行为。铝制鼠标的冻结行为也可以通过图像 D 使用黑色金属网格进行分析。在黑色规则下,发光二极管灯连接到设备上方的帆上。网格规则在 100 个屋顶上由 LED 灯照亮。
与白噪声音发生器连接的扬声器安装在盖子上方的帆上。55 白噪声表现为听觉队列。网格连接到电击发电机以提供电食品冲击。
在测试开始前,激波风测试设定为 30 万对。应使用金属检查网格上的电流强度,因为小鼠体内 fe 和尿液的积累可能会降低冲击测试,测试室放置在隔音织机中以尽量减少外部噪音。在测试过程中,上诉位于与进行圆锥和上下文测试的声音不同的声音中。
它由一个与锥形室具有不同特性的腔室组成。提供正常的上下文,有必要尽可能多地改变感觉代码,以便小鼠将诺贝尔上下文视为与竞争室无关。在该协议中,该装置是一个 acri 三角室,带有扁平的 acri 尺和透明引线。
扬声器安装在引线上方的帆上,以在或三个队列中演示。此队列与在摆动时提供给 mice 的提示相同。地板的照明级别设置为研究外观。
每个腔室都是一个立方体,带有一个安装在帆上的充电室,设备摄像头用于监控鼠标的行为。在每次测试开始之前,用舌头擦拭丙烯酸墙壁和地板,因此在超高总水中擦拭,并用 70% 乙醇清洁网格。为了防止基于嗅觉切割的偏差,用 Ethan 而不是超级炒作恶心的水擦拭网格,以伤害网格由于最后两到四只小鼠而无法推断出它们的导电性,在温控的拘留室中的房屋包装以减少笼子运输对行为的可能增加,并使小鼠适应实验环境。
在每次测试开始前至少 30 分钟将装有小鼠的笼子转移到隔音等候室。所有实验都应在同一时间段内进行,以最大程度地减少在不同时间进行测试可能产生的行为变化。应在平衡中测试每组的小鼠,以减少实验时间的潜在影响。
在被试对行为表现的测试顺序下,图像 D 最多可以控制四个设备同时从小鼠进行测试,同时研究人员节省了时间和数字来推断实验程序对小鼠行为的潜在影响。在继续会话开始之前,请运行 A FD 应用程序软件。选择插入菜单 FD 相关和 FD 在线,并按如下步骤设置参数值。
第一步,项目 Id 指定要存储文件日期的文件夹。第二步,会话名称类型。会话框中的任何单词都是实验日期和要提交的参考文本,其中白噪声和食物冲击的开始时间和持续时间都写在参考框中。
必须事先在图像的 deference 文件夹中准备 deference 文本到文件。步骤 3 参数设置。输入参数值,如持续时间、时间和冻结条件,如影片中所示。
第四步,受试者 ID。输入受试者标识。第五步,相机设置对比捕获图像的亮度和对比度。
第六步,阈值设置。首先测量从连续图像开始的行程距离,调整程序的阈值 main 值,该值设置为将图像分割为黑色粒子和白色背景。距离行程是根据每组与 XY 坐标的重心与连续图像中的粒子之间的距离计算得出的。
对于连续图像的行为,仅假设程序的 x 个额外值,该值设置为在背景下将图像分割成黑色粒子,然后计算显示非重叠区域的哪对连续图像输入窗口的粒子之间非重叠区域的面积量。当鼠标显示 ing 行为时,将表示均值更改为区域值量应低于 ING cry 值。应该调整这些值,以便通过图像疲劳的数据与该小队本身相匹配。
第七步,设置捕捉字段指定字段,点击工具箱中的矩形按钮后,将要捕获的腔室框定为矩形的地板周围。实时图像窗口上的 Chamber。接下来选择室内小说,然后单击设置按钮,最后单击完成按钮。
定义参数设置后,应在日期的第一次测试之前使用练习小鼠进行准备测试,以确定图像分析系统以及哪些噪声冲击发生器可以解决问题,将包含练习小鼠的梳笼从相邻的等待阴暗移动到声音测试阴暗处,并在将小鼠放入调节室后立即将每只小鼠放入调节室, 单击 Z 图像的开始底部,允许小鼠充分探索腔室 120 秒。此后。作为听觉队列的白噪声呈现 30 秒,在声音的最后两秒,对小鼠进行食物休克。此过程在会话中重复 3 次,以加强队列与食物冲击之间的关联。
最后一次配对后,面罩将在腔室中放置 90 秒。进一步建立房间环境与被动体验之间的关联。480 秒后,鼠标被送回家笼,笼子被放回拘留室的架子上。
每次测试后,仔细清洁腔室和网格。然后单击 Next analysis 按钮并在测试小鼠中重复会话。大约在相关移动 24 小时后,笼子继续将小鼠转移到隔音的等待织布机室。
每次测试开始前至少 30 分钟使用握织机。的长图像,并以与调节相同的方式设置软件的参数值。但是,请将持续时间设置为最长 300 秒,然后选择 35 text to file (35 文本要归档) 以进行上下文测试。
35 文本到文件为空。将鼠标放入调节室,然后单击 start 底部。允许小鼠在没有任何刺激的情况下充分探索腔室 300 秒。
300 秒后,将老鼠赶进它们的家笼并清洁腔室。然后单击下一个分析底部,并在 D 的测试小鼠长图像中重复该过程,并以与此测试的继续文本相同的方式设置参数值,并将持续时间设置为长达 360 秒。这是此测试的 file 参考文本。
将每只小鼠放入三角形腔室中,然后单击图像 Z 的开始按钮,小鼠都将在前三分钟内探索腔室。既没有白噪声也没有足部休克。这个 chamber 具有不同的属性,提供了新的背景并与连续的 chamber 相关。
在这个房间里,通常必须经常移动并且不表现出行为。在前三分钟结束时,出现在 Concho 的白噪声被提供给小鼠三分钟。在审计员陈述期间,审计员将小鼠排队或在 360 秒后表现出书面行为爆发,将小鼠送回它们的家笼中,并将笼子放回拘留室的架子上。
测试后,仔细清洁腔室。然后单击下一个分析底部并使用测试小鼠重复该过程。该视频显示,由系统图像分析的冻结过程似乎与人类观察者测量的思想更密切相关。
细节证实了这一观察结果,这些细节表明,在每次测试中由图像物理测量的租赁百分比与人类观察者的高度相关或思维得分高度相关。此外,该图表明,人类观察测得的冻结百分比与其图像中的系统图像之间的差异最小。这些结果表明,系统图像测量的冻结百分比与人类观察获得的冻结百分比相似,并且通过图像 Z 测量原因量的精度很高。好。
你觉得怎么样?如您所见,可以轻松执行标准行为分析。使用系统的图像有一些技巧和要点,所以让我问一下 ika。好。
首先,您对系统映像的测试过程有何看法?我认为我们的测试程序非常简单,系统的图像是准确快速地衡量理性、行为的有用工具。任何人都可以通过事先培训轻松使用软件程序因此,该系统可以用于在短时间内评估他们几个月的记忆力,这将节省我们的时间和以后的时间。
明白了。那么,我们在进行测试时有什么需要注意的吗?是的,因为作员表示获得最清晰的图像以精确测量行为很重要,因此您应该调整相机长度和写入内容 belo。
同样在程序研究中,您需要仔细设置性价值观和理性标准,以判断该行为是否可以被证明是理性。重要的是结果是立竿见影的,该程序与人类观察所考虑的一样,如目前的结果所示。好。如您所见,这可能是一篇文章,提供有关测试程序和软件程序使用的详细信息。
我们希望这可能是文章。促进您对测试的理解,并为协议的标准化做出贡献。
本文介绍了一种使用视频分析系统来评估小鼠恐惧学习和记忆的情境和提示恐惧条件反射测试的协议。该研究旨在标准化方法以提高神经科学研究中行为评估的可靠性。
Standardized behavioral phenotyping is critical for de-risking target validation in neuroscience drug discovery. Automated video analysis systems improve data reliability and reproducibility, reducing variability in fear conditioning assays used to evaluate cognitive phenotypes in psychiatric disorder models. This supports predictive confidence in early discovery by enabling consistent, quantitative assessment of learning and memory mechanisms.
The method integrates into the discovery continuum from target hypothesis testing through lead optimization, where reliable cognitive phenotyping informs target selection and compound prioritization.