子宫 - 输卵管胚胎移植和输精管结扎术在小鼠模型

该程序的总体目标是将植入前胚胎转移到 2.5 DPC 假妊娠受者的子宫中。这是通过首先暴露卵巢、uct 和子宫的第一部分来实现的。接下来，用针刺穿 UCT。

接下来，将玻璃毛细管移液管插入进入子宫腔的孔中。最后，胚胎被释放到子宫中。最终，出生的幼崽数量用于显示移植的植入前胚胎的存活率。

与子宫胚胎移植等 16 方法相比，这种技术的主要优点是子宫壁不会被穿刺，避免出血和胚胎流动。所有动物实验均由贝尔茨维尔地区动物护理和使用委员会根据美国农业部动物护理和使用指南批准。在对交配性能得到证实的雄性小鼠进行麻醉和镇痛药并确认动物被适当镇静后，将小鼠放在温暖的舞台上，并使用电动剪刀从位于阴茎上方 0.5 厘米和 2.5 厘米的两条假想横向线之间的腹侧区域去除皮毛。

使用 10% 聚维酮碘和 70% 乙醇对剃须区域进行消毒。接下来，使用敷料锯齿镊将皮肤固定在腹部内侧线，在阴茎上方约 1 厘米处进行 10 至 15 毫米的纵向皮肤切口。然后使用解剖锯齿镊子固定线性 alba，并使用剪刀用微缩器切割肌肉。

解剖锯齿镊子抓住一侧的睾丸 ed 沉积垫并拉动它，露出睾丸、巨大的凹陷和附睾。大 deens 位于睾丸内侧，在握住 vasts deens 火焰敷料钳直到它们变红并使用它们同时将 vasts deens 分成两点切割和烧灼时，切口应去除大约 5 毫米的部分，留下两个清晰分开的烧灼末端移动睾丸， EPI 的 EPI 和广泛的尊重回到腹腔，并在另一个睾丸上重复该过程。然后用五根零吸收缝合线，在肌肉中缝一两针水平床垫针，并使用一两把伤口剪线缝合皮肤。

识别雄性后，将其移至放置在温暖舞台上的笼子中并观察它，直到它从麻醉中恢复。记录输精管结扎术转移过程中可能发生的事件，并在饮用水中添加抗生素。要准备胚胎作，请使用玻璃移液器，首先抛光玻璃毛细管的尖端。

为避免损坏移液器支架。使用细火焰加热玻璃毛细管的中间部分，同时用双手轻轻旋转毛细管，从而软化玻璃毛细管的中间部分。一旦毛细管部分变得柔软且具有延展性，迅速将其从火焰中抽出并拉动两端，使其外径缩小到 130 至 150 微米。玻璃冷却后，使用金刚石尖笔、磨石或指甲锉在窄端轻轻划线并从两侧拉动来切割。

断口应干净且垂直。通过非常快速的火焰抛光吸头，留下 100 至 130 微米孔径的移液器，可以存放以备后用。按照本视频前面所述，将动物置于温暖的舞台上，准备手术区域并评估适当的麻醉后，使用电动剪刀去除膝盖和远端肋骨之间背侧区域的毛皮。

将受体移至立体显微镜下的温暖载物台上，并将其置于外科医生外侧的俯卧位。用无菌毛巾覆盖该区域，并在剃光区域开一个孔，并照亮手术区域。接下来，在使用敷料镊子将皮肤固定在颅骨上的一个位置时，最后一根肋骨和臀部之间线的三分之一，以及背侧和背部之间线的三分之一。

用剪刀在皮肤上做一厘米的横向切口。卵巢或卵巢周围的脂肪垫将通过体壁可见。在卵巢或脂肪垫上方的体壁上做一个 0.3 到 0.5 厘米的横向切口，切口不会切割任何大血管。

用 cz BH 培养基加载胚胎作移液器，取一个小气泡。引入 5 到 10 个胚胎，用最少的培养基。最后，吸收另一个小气泡和少量介质。

使用微型解剖锯齿镊子抓住卵巢周围的脂肪垫并将其拉向小鼠头部，将卵巢、uct 和上子宫的一小部分露出腹腔。将吸气器咬嘴含在嘴里，准备与微型解剖锯齿镊一起使用。移动 UCT 并露出子宫输卵管交界处，保持非惯用手可以接触到子宫输卵管交界处。

拿起轻微弯曲的显微解剖钳，将它们放在子宫输卵管交界处正下方，抓住该部分上方约 2 毫米的 UCT。接下来，用轻微弯曲的显微解剖钳握住子宫输卵管交界处。使用 27 号针刺穿靠近镊子的 UCT 切片。

然后将胚胎作移液管插入孔口，并通过子宫输卵管交界处进入子宫。向器官推进不超过 3 毫米，以防止子宫内膜损伤。轻轻吹气以将胚胎释放到子宫中，确保两个气泡都通过子宫并且不会引入更多空气。

取出移液管后，抓住腹垫，将 OV 导管和卵巢移回腹腔，然后再缝合。如本视频前面所示，允许女性恢复，类似于男性的夹子，可以在胚胎移植后 10 天取出。有关更多详细信息，请参阅文本协议。

尾部子宫输卵管胚胎移植提供了一种将胚胎移植到子宫的方法，避免了与子宫胚胎移植相关的一些并发症。在此表中，我们显示了将 CD one 爆破辅助装置经受不同类型作转移到 CD one 受体所获得的结果。按照所描述的方案，胚胎之间的足月存活率或 E 15 存活率相似。

只需从受精卵期胚胎进行 IPSC 注射体外培养，即可产生嵌合幼仔和胚胎，这些幼仔和胚胎在胚胎移植前 7 小时去除了带并暴露于慢病毒。因此，子宫输卵管胚胎移植是一种可靠的技术，可以移植特别复杂的胚胎，例如那些缺乏 zita 并与慢病毒一起孵育的胚胎 在尝试此程序时，对受体和胚胎尽可能温和很重要。