Name: 评估细胞死亡的吞噬细胞清除由Ligatable荧光探针试验行程 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: 学习使用可连接荧光探针技术选择性标记脑缺血组织中活跃吞噬细胞的方法。该技术通过酶反应和荧光显微镜可视化细胞清除过程，为研究神经科学和细胞生物学中的细胞死亡清除机制提供了重要工具。

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本研究获得了美国国立神经疾病与卒中研究所、美国国立卫生研究院（V.V.D.）的R01NS062842资助，以及通过美国复苏与再投资法案（ARRA）获得的美国国立神经疾病与卒中研究所、美国国立卫生研究院R21 NS064403资助（V.V.D.），同时获得美国国立生物医学成像与生物工程研究所、美国国立卫生研究院R21 EB006301资助（V.V.D.）。

该方法适用于甲醛固定、石蜡包埋的组织切片。本技术在此以大鼠实验性脑卒中为例进行演示。
1. 准备酪酰胺信号放大（TSA）系统的组分
尽管基于TSA的增强反应是在标记的最后阶段使用，但准备该反应可能需要超过1&#160;小时。因此，在开始标记前预先配制TSA试剂较为方便。
<ol>
	<li>制备荧光素酪胺储备液。使用TSA标记试剂盒中提供的单支装荧光素酪胺试剂，向酪胺试剂小瓶中加入300 µl DMSO。荧光素酪胺储备液在4 °C保存时至少可稳定存放3个月。</li>
	<li>配制TNT洗涤缓冲液，成分如下：0.1 M Tris-HCl，pH 7.5；0.15 M NaCl；0.05% Tween-20。如需要，可用0.3% Triton X-100替代0.05% Tween-20。也可使用PBS作为洗涤缓冲液。</li>
	<li>配制TNB封闭缓冲液，成分如下：0.1 M Tris-HCl，pH 7.5；0.15 M NaCl；0.5% 封闭试剂（试剂盒提供）。为完全溶解封闭试剂，需在搅拌条件下分次少量缓慢加入缓冲液中。持续搅拌并逐步加热溶液至55 °C，此过程可能需要30–60分钟，溶液将呈现乳白色。使用前冷却至室温。分装后可于-20 °C长期保存。</li>
</ol>
2. 切片的制备
使用从福尔马林固定的组织切取的5 μm厚切片的载玻片。
<ol>
	<li>用二甲苯处理切片15分钟。</li>
	<li>按如下步骤复水切片：在96% EtOH中浸泡2次&#160;每次5分钟；在80% EtOH中浸泡5分钟；用水洗涤2次&#160;每次5分钟。</li>
	<li>将蛋白酶K贮存液用PBS稀释至50 µg/ml，配制蛋白酶K工作液。</li>
	<li>加入蛋白酶K工作液至切片上，23 °C孵育15分钟。根据切片大小和组织类型，可能需要调整溶液用量和消化时间。对于较小的切片（直径小于5 mm），使用50 µl蛋白酶K溶液即可；对于中等大小的切片（直径约10 mm），加入100 µl蛋白酶K溶液；对于非常大的切片，可按比例增加溶液用量。在所有情况下，应注意避免切片过度消化，以免导致信号完全丢失并破坏组织形态，当孵育时间超过25分钟时，常会发生此类情况。</li>
	<li>用蒸馏水冲洗切片2次&#160;每次5分钟。当切片置于水中时，配制含有活性探针的标记混合液。</li>
</ol>
3. 基于VACC TOPO的染色
<ol>
	<li>通过混合以下成分来制备活性探针溶液： 
	水 -&#160;11.75 µl 
	1 M Tris-HCl，pH 7.4&#160;1.25 µl 
	100 pmol&#160;12碱基突出自杀寡核苷酸&#160;1 µl 
	100 pmol&#160;接头寡核苷酸&#160;1 µl 
	50 pmol&#160;VACC TOPO -&#160;10 µl</li>
	<li>用移液器轻轻混匀。室温（23 °C）孵育15分钟，以激活探针。</li>
	<li>从清洗罐中取出切片，吸去残留水分。然后加入第3.1步配制的活性探针溶液（每片约10 × 10 mm加25 µl）。</li>
	<li>盖上盖玻片，于23 °C孵育15分钟。将载玻片浸入水中，轻轻取下盖玻片。用水洗涤3次。&#160;每次5分钟。</li>
</ol>
4. TSA 信号增强
<ol>
	<li>用先前配制的 TNB 封闭缓冲液覆盖组织切片，将切片置于湿盒中，在室温（23 °C）下孵育 30 分钟。</li>
	<li>用 TNB 封闭缓冲液将链霉亲和素-辣根过氧化物酶偶联物（SA-HRP）按 1:100 稀释。吸除 TNB 封闭缓冲液，加入 SA-HRP 溶液。在室温下孵育切片 30 分钟。使用足够的试剂体积以完全覆盖组织切片，通常每张切片使用 100 µl。</li>
	<li>在室温下，用 TNT 洗涤缓冲液（或 PBS）洗涤切片，每次 5 分钟，共洗涤 3 次&#160;。</li>
	<li>用试剂盒中的 1× 扩增稀释液将荧光素酪胺储备液按 1:50 稀释。将荧光素酪胺工作液滴加至每张切片上。使用足够量的工作液以完全覆盖组织切片，通常每张切片使用 100 µl。每次标记前应立即配制荧光素酪胺工作液。该溶液不可重复使用，标记完成后应丢弃任何剩余部分。</li>
	<li>在室温下孵育切片 3 至 10 分钟。在显微镜下监测荧光信号增强情况，直至首次观察到结构轮廓为止。随后迅速进入洗涤步骤。</li>
	<li>在室温下，用 TNT 洗涤缓冲液（或 PBS）振荡洗涤切片，每次 5 分钟，共洗涤 3 次&#160;。</li>
	<li>加入含 DAPI 的抗荧光淬灭剂并加盖盖玻片。在荧光显微镜下观察。为同时观察 DAPI 和 FITC 荧光信号，请使用带通滤光片组： 
	FITC 激发 D490/40，发射 520/10；DAPI 激发 D360/40，发射 460/20，或类似参数。</li>
</ol>

<ol><li>Jin, R., Yang, G., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+ischemic+stroke%3A+role+of+inflammatory+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in ischemic stroke: role of inflammatory cells.</a> J Leukoc Biol. 87, 779-789 (2010).</li>
<li>Schilling, M., Besselmann, M., Müller, M., Strecker, J. K., Ringelstein, E. B., Kiefer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predominant+phagocytic+activity+of+resident+microglia+over+hematogenous+macrophages+following+transient+focal+cerebral+ischemia%3A+an+investigation+using+green+fluorescent+protein+transgenic+bone+marrow+chimeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Predominant phagocytic activity of resident microglia over hematogenous macrophages following transient focal cerebral ischemia: an investigation using green fluorescent protein transgenic bone marrow chimeric mice.</a> Exp Neurol. 196 (2), 290-297 (2005).</li>
<li>Faustino, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+cells+contribute+to+endogenous+brain+defenses+after+acute+neonatal+focal+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial cells contribute to endogenous brain defenses after acute neonatal focal stroke.</a> J Neurosci. 31 (36), 12992-13001 (2011).</li>
<li>Thored, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+term+accumulation+of+microglia+with+proneurogenic+phenotype+concomitant+with+persistent+neurogenesis+in+adult+subventricular+zone+after+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Long term accumulation of microglia with proneurogenic phenotype concomitant with persistent neurogenesis in adult subventricular zone after stroke.</a> Glia. 57 (8), 835-849 (2009).</li>
<li>Sierra, A., Abiega, O., Shahraz, A., Neumann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-faced+microglia%3A+beneficial+and+detrimental+consequences+of+microglial+phagocytosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Janus-faced microglia: beneficial and detrimental consequences of microglial phagocytosis.</a> Front Cell Neurosci. 7 (6), (2013).</li>
<li>Samejima, K., Earnshaw, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trashing+the+genome%3A+Role+of+nucleases+during+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Trashing the genome: Role of nucleases during apoptosis.</a> Nat.Rev. Mol. Cell Biol. 6 (9), 677-688 (2005).</li>
<li>Minchew, C. L., Didenko, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+probes+detecting+the+phagocytic+phase+of+apoptosis%3A+enzyme-substrate+complexes+of+topoisomerase+and+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Fluorescent probes detecting the phagocytic phase of apoptosis: enzyme-substrate complexes of topoisomerase and DNA.</a> Molecules. 16 (6), 4599-4614 (2011).</li>
<li>Shuman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+classes+of+DNA+end-joining+reactions+catalyzed+by+vaccinia+topoisomerase%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Two classes of DNA end-joining reactions catalyzed by vaccinia topoisomerase.</a> Sci. Rep. 267, 16755-16758 (1992).</li>
<li>TSA Fluorescence Systems. , Available from: 
 
 <a target="_blank" href="http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf">http://www.perkinelmer.com/CMSResources/Images/44-73609man_TSAFluorescenceSystems.pdf</a> Forthcoming.</li>
<li>Barcia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ROCK%2FCdc42-mediated+microglial+motility+and+gliapse+formation+lead+to+phagocytosis+of+degenerating+dopaminergic+neurons+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep.+%22%5BJournal%5D)">ROCK/Cdc42-mediated microglial motility and gliapse formation lead to phagocytosis of degenerating dopaminergic neurons in vivo.</a> Sci. Rep. . 2, 809(2012).</li>
<li>Didenko, V. V., Ngo, H., Minchew, C. L., Boudreaux, D. J., Widmayer, M. A., Baskin, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+irreparable+ischemic+damage+in+brain+by+selective+labeling+of+double-strand+blunt-ended+DNA+breaks%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Visualization of irreparable ischemic damage in brain by selective labeling of double-strand blunt-ended DNA breaks.</a> Mol. Med. 8, 818-823 (2002).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

在本视频中，我们以组织切片的形式演示如何标记在局灶性脑缺血中清除细胞死亡的活性吞噬细胞。该技术是首个仅特异性标记已吞噬并正在积极消化细胞残骸的废物清除细胞的方法。相较于其他现有的吞噬细胞标记方法，该技术具备这一独特能力，因而具有显著优势。
该方法利用一种基于DNA的通用且特异性的吞噬活性标记物——在废物处理细胞的吞噬溶酶体中，吞噬的细胞核被消化时产生的双链、平末端、5'羟基DNA断裂。这种仅对活性吞噬细胞进行的特异性标记，可准确评估缺血性脑组织中吞噬反应的强度与效率。
该技术具有较强的稳健性，只要严格按照所述步骤操作，即可获得良好的染色效果。其中蛋白酶K消化步骤对于获得强且可重复的染色尤为关键。此步骤中过度消化会导致切片中DNA的丢失，可能减弱甚至完全消除信号。另一个关键点是必须使用高活性的痘苗病毒拓扑异构酶制剂。该技术的一个局限性在于，尚未针对新鲜冷冻切片进行优化。
该方法在细胞凋亡研究中具有广泛的适用性，且可扩展应用于缺血性脑组织以外的其他组织和条件。当用于可视化由多...

缺血性脑卒中会引起受累脑组织发生显著变化。它会引发大规模的细胞死亡，从而迅速激活小胶质细胞来源的常驻吞噬细胞。同时，它还会导致多种血液来源的专业吞噬细胞浸润缺血脑组织，包括中性粒细胞、巨噬细胞、树突状细胞和肥大细胞1,2。
目前仍存在争议的是，这种对缺血性损伤的反应究竟起积极作用还是消极作用。尽管中风后的吞噬作用有益于清除死亡细胞并抑制炎症反应，但它同时会产生有毒的活性氧物质，影响神经元的存活并加剧组织损伤1-5。
尽管多种类型的吞噬细胞会浸润缺血性脑组织，但并非所有这些细胞都通过吞噬细胞碎片并清除障碍来参与废物管理，从而为再生过程创造条件1-3。因此，有必要对那些在脑卒中过程中执行吞噬清除功能的废物管理细胞进行特异性鉴定。在对这类活跃的废物管理细胞进行成像时，还需回答一个关键问题：它们降解所吞噬细胞碎片的效率如何。在吞噬作用中有效且彻底地降解死亡细胞的DNA至关重要，因为这可以防止自身免疫反应以及致病性核物质的释放6。
本文介绍了一种新型探针，该探针利用特定的DNA断裂作为活性吞噬细胞的标志物。这些特征性断裂仅在功能性的废物管理细胞内降解被吞噬的细胞核过程中产生。因此，该探针能够特异性地标记那些吞噬并 actively 消化细胞残骸的吞噬细胞。同时，该探针还允许观察吞噬后DNA降解的强度与完成程度。这些探针有助于评估吞噬清除过程的强度与效率。 
新型探针依赖于非蛋白质标记物，因此在脑卒中研究中具有特别优势，因为在大面积缺血性损伤的情况下，细胞形态可能被破坏，或蛋白质标记物可能被耗尽，尤其是在缺血核心区。
该技术的原理如下所示 图1图中显示了由痘苗病毒拓扑异构酶（VACC TOPO）连接的发夹形寡核苷酸探针。 至溶酶体DNase II在DNA消化过程中产生的5'OH DNA末端7.

<table><tbody><tr><td>二甲苯</td><td>JT Baker</td><td>9490-22</td><td></td></tr><tr><td>乙醇</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蛋白酶K</td><td>罗氏</td><td>3115879001</td><td></td></tr><tr><td>PBS缓冲液</td><td>Invitrogen</td><td>AM9624</td><td></td></tr><tr><td>痘苗病毒拓扑异构酶I</td><td>Vivid Technologies</td><td></td><td>5 pmol/&amp;mu;l 原液</td></tr><tr><td>12碱基突出自杀型寡核苷酸</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5&amp;rsquo;-AAG GGA CCT GC&lt;强&gt;B&lt;/strong&gt; GCA GGT CCC TTG ATA CGA TTC TA-3&amp;rsquo;；B &amp;ndash; 生物素-dT；100 pmol/&amp;mu;ddH₂O 中的 l 储备液&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>接头寡核苷酸</td><td>IDT DNA</td><td></td><td>5&amp;rsquo;-TAG AAT CGT ATC-3&amp;rsquo;；100 pmol/&amp;mu;ddH₂O 中的 l 储备液&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td></tr><tr><td>1 M Tris-HCl，pH 7.4</td><td>Lonza</td><td>51237</td><td></td></tr><tr><td>TSA，荧光素系统&amp;nbsp;</td><td>PerkinElmer&amp;nbsp;</td><td>NEL701A001KT</td><td></td></tr><tr><td>1 M NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tween-20&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>P9416-50ML</td><td></td></tr><tr><td>含DAPI的Vectashield</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1200</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td></td><td></td><td>22 × 22 mm 或 22 × 40 mm 的玻璃或塑料盖玻片。反应过程中建议使用塑料盖玻片，因其更易于从切片上移除。</td></tr><tr><td>大鼠脑切片</td><td></td><td></td><td>缺血性脑卒中模型大鼠脑组织，取自造模后48小时，造模方法见Didenko描述 &lt;em&gt;等&lt;/em&gt;&lt;sup&gt;11&lt;/sup&gt;. 5-6 &amp;mu;从多聚甲醛固定、石蜡包埋的组织块中切下 m 厚的切片。使用带电荷且预先清洁的载玻片。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>倒置显微镜</td><td>Olympus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>数码摄像机及软件</td><td>Micromax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>软件</td><td>美达莫尔夫</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

利用可连接荧光探针评估实验性脑卒中中的细胞死亡吞噬清除作用

Assessing Phagocytic Clearance of Cell Death in Experimental Stroke by Ligatable Fluorescent Probes

我们介绍一种新的组织化学方法，用于可视化局灶性脑缺血中的吞噬清除过程。该方法可用于研究任何细胞谱系的废物管理型吞噬细胞在中风过程中对死亡细胞的清除。尽管缺血脑组织中存在大量不同来源且具有吞噬能力的细胞，但其中仅有一部分会主动吞噬并消化细胞残骸。选择性地可视化、定量和分析此类活跃的吞噬性废物管理过程，有助于评估脑组织对缺血的反应。有效的细胞死亡清除对于脑组织从缺血损伤中恢复至关重要，因为它为后续的再生过程创造了条件。若未能及时清除细胞残骸，则会导致未降解的DNA和蛋白质引发毒性反应。本方法利用荧光探针，通过病毒拓扑异构酶特异性连接所有吞噬细胞在吞噬和消化因缺血而不可逆损伤的细胞时所产生的特征性DNA断裂。该技术是研究脑组织对缺血性损伤反应的新工具。

标记活性废物管理吞噬细胞技术的原理如图1所示。示意图表明，检测过程分为三个步骤。第一步为探针激活（图1A）；第二步是将激活后的探针连接至组织切片中的特异性DNA断裂位点（图1C）；第三步包括荧光信号的扩增（图1D）。更详细的解释如下：
1. 探针活化。在连接反应之前，VACC TOPO 需要共价连接至寡核苷酸探针的 3' 端。在探针活化过程中，VACC TOPO 会结合到发夹-接头双链上并切割上链。随后，12 个碱基长度的片段永久分离，使 VACC TOPO 连接在发夹结构的 3' 端。这种在其 3' 端连接有酶的寡核苷酸可用于标记 DNase II 型断裂（图 1B）。需要 12 个碱基的突出端和一个接头寡核苷酸，因为该酶无法切割更短的链8，因此无法连接到探针上并活化其 3' 端。
2. 探针连接<...

我们介绍一种用于选择性的新型荧光技术 原位 标记卒中后清除细胞碎片的活化吞噬细胞。该方法对于评估脑组织对缺血的反应至关重要，因为在缺血脑组织中存在的吞噬细胞中，仅有一小部分实际参与了细胞死亡物质的清除。

我们介绍了一种新的组织化学方法，用于可视化局灶性脑缺血中吞噬清除过程。该方法可用于研究损伤区域中细胞碎片的清除……

本实验的总体目标是选择性地标记在脑卒中过程中清除细胞碎片的活化吞噬细胞。首先，需要制备基于Tite的信号放大反应所需的组分；第二步是制备组织切片。接下来，使用痘苗病毒酶、拓扑异构酶和可裂解的荧光探针进行标记反应。最后一步是基于IDE的荧光信号增强。最终，采用荧光显微镜检测局灶性脑缺血组织切片中死亡细胞的吞噬清除情况。吞噬细胞清除死亡细胞在脑缺血后的恢复过程中起着重要作用。本方法通过仅标记那些主动清除死亡细胞的巨噬细胞，来测定该过程的效率。尽管该方法可用于研究缺血性脑损伤，也可用于研究其他器官和组织中的缺血性损伤。在FA中，酸性清除死亡细胞的过程非常重要。尽管IDE信号放大或TSA步骤发生在标记的最后阶段，但准备该反应可能需要一个多小时。因此，首先制备TSA试剂更为方便。第一步是制备荧光素四 TYROM 储存液，将 300 微升 DMSO 加入 TSA 标记试剂盒中包含的 tyrom 试剂瓶中。接下来，配制 TNT 洗涤缓冲液以完全溶解封闭试剂。在配制 TNB 封闭缓冲液时，需在搅拌的同时缓慢分次少量加入，并将溶液逐渐加热至 55 摄氏度。持续搅拌下，溶液将呈现乳白色，使用前应恢复至室温，并分装后于负20摄氏度长期保存。本实验所用载玻片需预先制备，将甲醛固定组织切成5 µm厚切片并贴附于载玻片上。首先，用二甲苯处理切片15分钟，然后通过一系列乙醇洗涤使切片复水，再用蒸馏水洗涤两次。接下来，通过将蛋白酶K的贮存液用PBS稀释至50微克/毫升，配制蛋白酶K工作液。本实验中最困难的部分是确定蛋白酶K消化的最佳时间，可能需要设置较短和较长的消化时间对照，以确保实验成功，具体时间取决于组织的大小和类型。向切片中加入适量的蛋白酶K工作液，在23°C下孵育15分钟。孵育结束后，用蒸馏水洗涤切片两次，每次五分钟。在切片浸泡的同时，准备含有活性探针的标记混合液。制备活性探针溶液时，将寡核苷酸与水、1 M Tris-HCl以及试剂盒提供的痘苗病毒拓扑异构酶混合，用移液器轻轻吹打混匀，室温孵育15分钟以完成探针活化。第二次洗涤后，从染色缸中取出切片，并吸去残留的水分。准备好后，加入先前配制的活性探针溶液覆盖切片，放入切片并置于23°C孵育15分钟。孵育结束后，将载玻片浸入水中，轻轻取下盖玻片。用水洗涤载玻片三次，每次五分钟。最后一次洗涤后，用 TNB 封闭缓冲液覆盖组织切片，并在湿盒中室温孵育 30 分钟。在此期间，用TNB封闭缓冲液配制链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物（S-A-H-R-P）的一比一百稀释液，取出玻片并吸除TNB封闭缓冲液。在加入S-A-H-R-P溶液前，需使用足量试剂完全覆盖整个组织切片。覆盖后，将载玻片在室温下孵育30分钟。孵育结束后，在室温下用TNT洗涤缓冲液将载玻片洗涤三次，每次五分钟。使用前立即用1×扩增稀释液将Fluoro Four TY IDE原液按1:50比例稀释，混匀。用移液器将该溶液加至载玻片上，确保完全覆盖组织切片。由于溶液不能重复使用，需丢弃任何剩余未用的部分。将载玻片在室温下孵育3至10分钟，并观察荧光情况。在显微镜下继续增加放大倍数，直到此时首次出现结构的迹象。立即进入洗涤步骤。将玻片洗涤三次，每次五分钟。在室温下用TNT洗涤缓冲液振荡洗涤。洗涤后，加入含DPI的抗荧光淬灭剂，并加盖盖玻片。在荧光显微镜下观察结果。这些图像展示了PHA酸性清除的两个示例。细胞核染色dappy显示为蓝色荧光，而可溶性vac topo探针显示为绿色荧光。这些图像中所示事件的图示显示了吞噬细胞的细胞核，以及处于不同消化阶段的被吞噬的额外细胞核。一旦掌握，该技术若操作得当，约需三小时即可完成。观看本视频后，您将了解如何在组织切片中使用可靠的荧光探针。您还将能够选择性地标记在缺血性脑组织中清除死亡细胞的活化小胶质细胞。

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评估细胞死亡的吞噬细胞清除由Ligatable荧光探针试验行程

在本视频中，我们演示了利用共聚焦显微镜研究凋亡细胞清除过程的胞葬作用检测方法。胞葬作用是一个多步骤过程，其中凋亡细胞被吞噬细胞吞噬，并在称为胞葬体的囊泡内降解。本方案提供了一种可视化单个凋亡细胞被内化与未内化部分的方法，并可对胞葬作用进行定量分析。...

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吞噬细胞通过在其吞噬体中清除和消除入侵的微生物，在先天免疫系统中发挥重要作用。吞噬体……...

活体巨噬细胞中吞噬溶酶体发生的生物学研究

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