髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG 35-55）诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的C57BL / 6小鼠

该程序的总体目标是诱导模拟多发性硬化症的临床和病理生理特征的实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型。这是通过首先准备抗原和佐剂以及百日咳毒素来实现的。第二步是皮下注射抗原和 CFA 乳剂，腹膜内注射百日咳毒素。

两天后，再次腹膜内注射百日咳毒素。在此之后，每天对动物进行称重并评估它们的临床评分。最终，实验性自身免疫性和脑脊髓炎的临床体征通常可以在免疫接种后第 9 天至第 14 天之间观察到。

现有方案的这种技术的主要优势，例如涉及 rizone 等毒性药物或 EIE 的不同变体，在于为什么它们都模仿了 MS 的特征，这些特征在潜在病理特征（例如适应性免疫系统的参与）上存在巨大差异。一般来说，由于免疫接种的困难，刚接触这种方法的人会很挣扎。绝对有必要减轻动物的压力并确保最佳免疫 在其开发后。

该模型为神经免疫学领域的研究人员表征基因敲除动物铺平了道路。确定新的分子药物靶标或测试有前景的候选药物 要制备肽溶液，首先在双蒸水中将冻干的 MOG 35 至 55 肽稀释至最终浓度为 2 毫克/毫升。每只小鼠需要 100 μL 的这种溶液，并且在制备过程中会损失一些体积。

因此，制作所需溶液量的 1.5 到 2 倍。将肽溶液储存在零下 20 摄氏度，以制成完全的叶子佐剂或 CFA，将 100 毫克干燥的分枝杆菌用于结核病。H 37 RA 放入研钵中，用杵研磨，得到薄粉。

然后加入 10 毫升不完全叶子佐剂，得到每毫升 10 毫克的 CFA 袜子溶液。CFA 原液可以储存在 4 摄氏度，直到免疫接种当天需要为止。用不完全的 FRES 佐剂将 CFA 储备液稀释至终浓度为 2 毫克/毫升，充分混合以重悬颗粒材料并将其置于冰上。

解冻后，将 MOG 35 至 55 肽溶液等分试样解冻。将其放在冰上。使用 2 毫升注射器和 27 号套管抽取 1 毫升 CFA。

然后使用第二个 2 毫升注射器和一个 20 号套管吸取 1 毫升 MOG 35 至 55 溶液。去除所有气泡，并用三通阀连接两个注射器。在三通阀几乎关闭的情况下，将乳液从一个注射器推到另一个注射器，然后彻底混合至少 10 分钟。

完成后，溶液应为白色、坚硬且粘稠，无相分离。现在让乳剂静置至少 30 分钟或免疫前几天 检查以确保它仍然乳化。免疫接种当天，将溶液吸入两个注射器中的一个中，并连接一个 27 号套管。

在 500 μL 双蒸水中复溶 50 μg 百日咳毒素。对于 100 μg/mL 的储备液，将储备液储存在 4 摄氏度下，直到需要为止。在免疫接种当天，将百日咳原液稀释 1 至 50。

用 PBS 准备一个装有 200 微升稀释的百日咳注射液的注射器，其中含有 400 纳克百日咳毒素，并为针座的死腔再抽取 100 微升。用异氟麻醉小鼠后，使用脚趾捏评估麻醉水平。将 100 微升抗原 CFA 乳剂皮下注射到每个后腹的两个不同部位。

注射后，皮下应形成球状肿块，该肿块应在整个实验过程中持续存在。接下来，将准备好的装有 200 微升百日咳毒素的注射器腹膜内注射。确保可以轻松识别个体小鼠以进行日常评估。

例如，通过尾部底部的颜色标记。