在髓系细胞动态实时成像装甲运兵车^{最小/ +}肠道肿瘤通过旋转盘共聚焦显微镜

该程序的总体目标是可视化活体动物肠道肿瘤内的髓系细胞动力学。这是通过首先在 PC min 小鼠中注射荧光分子和阿托品来实现的。在第二步中，准备肠道进行成像，并将小鼠放置在显微镜载物台上。

在最后一步中，获取活体动物体内肿瘤的图像，最终旋转圆盘共聚焦。显微镜可用于可视化活 PC min 小鼠肿瘤内髓系细胞在数小时内的行为。这种方法可以帮助回答癌症领域的关键问题，例如人体细胞在结直肠癌中的作用是什么？

首先使用实验室胶带将两个盖玻片固定到显微镜成像平台的载物台插件上。然后将插件放在载物台上并用酒精湿巾清洁。接下来，将热珠消毒器转到 250 摄氏度，然后在工具冷却时对手术器械消毒 30 秒。

将这个聚苯乙烯泡沫塑料盖放在手术台上的两个实验室浸泡器之间。然后，当小鼠缓慢地深呼吸时，将动物放在手术台的侧面和眶后。注射 DExT 链、rod Domine 和 GR one 抗体溶液。

注射后，将鼠标仰卧，将鼻子放在麻醉锥中，并使用电动剃须刀去除动物腹面和左后肢的毛发。去除皮毛后，将新的实验室浸泡器放在手术台上以避免毛发污染，然后用酒精湿巾和 Betadine 对动物的腹面进行消毒。接下来皮下注射阿托品溶液到小鼠的一个侧面，然后用剪刀和一把镊子在皮肤和腹膜上做一个一厘米的腹侧中线切口。

小心地拉出 3 到 4 厘米的肠道，确定一个或多个肿瘤进行成像。然后将含有感兴趣肿瘤的肠环放在玻璃显微镜槽的顶部。胶水干燥一分钟后，沿肠道滴几滴强力胶将其附着在载玻片上，用记号笔在载玻片上画一条指向肿瘤的线，以方便其在成像过程中定位。

现在小心地将鼠标转移到显微镜载物台上，其腹侧朝下，鼻子在鼻锥中。用实验室胶带固定麻醉线，然后重新定位设置，使肠道位于其中一个盖滑窗的中心。轻轻地用胶带粘住载玻片，并将血氧仪探头连接到小鼠的左肢，以跟踪其心脏和呼吸频率以及动脉血氧饱和度水平。

然后用加热毯盖住鼠标，以避免体温过低并降低成像的 ISO 氟浓度。最后，在多维采集窗口中，单击 acquire 开始采集。采集完成后，将使用 Mars 软件录制和保存电影。

通过使用转盘共聚焦显微镜，非肿瘤和肿瘤组织。在 PC min 小鼠的小肠中，静脉注射荧光葡聚糖罗定和淋巴细胞抗原 6 个复合位点 G 6 47 偶联抗体后，可以从浆膜表面观察到小鼠，可以分别检测到血管和多形核细胞。PIs 斑块是淋巴组织的聚集体，充满了髓系细胞，也很容易观察到。

小肠的瘸子被血管和骨髓细胞包围。结核组织通常血管化程度更高，更容易被髓系细胞浸润，并且根据肿瘤的大小，Crips 的结构组织不太好。平滑肌层对肌动蛋白 ECFP 的表达有时会使肠上皮难以实现清晰聚焦，如图所示，可以实时跟踪肿瘤中的髓细胞动力学几个小时，如本电影所示，而 G 1 阳性中性粒细胞在血管中循环并巡逻组织。

其他髓系细胞，主要是巨噬细胞，围绕着 Crips，模式较差。观看此视频后，您应该对如何可视化活体动物肠道肿瘤内的髓样细胞动力学有很好的了解。