步骤人类隐静脉前体内灌注和外部强化

以下实验的总体目标是评估压力、纯粹压力和外部加固对人类内膜增生的影响。这是通过同时对来自同一静脉的两个段进行高压灌注来实现的。当一个段由外部网片加固时，静脉段被切割成切片以进行组织学和分子分析。

这些分析用于评估外部加固对内膜增生的影响。结果表明，外部加固可以减少通常在灌注 7 天后观察到的内膜增生。Seno van 旁路移植物是外周动脉疾病患者的首选治疗方法之一。

然而，导致移植物失败的 t 增生的发展是此类工艺的主要限制因素。这种改造是由于面包车适应了动脉环境以开发新的疗法。了解这种现象所涉及的分子机制是必不可少的。

因此，我们开发了一种体外灌注模型。我们系统的主要优势之一是它允许研究血流动力学参数，而没有任何其他混杂的免疫或内分泌因素。我们实验室的一名医学博士生将演示该技术。

人静脉样本是从接受下肢搭桥手术的患者获得的。收集静脉并在无菌条件下带到实验室，并放置在层流罩下。这种静脉的最小尺寸为 9 厘米长。

内径大于 2.5 毫米，外径大于 4 毫米。矿脉分为三部分。即使是片段收获的静脉也储存在冰冷的 RPMI 1640 glut max 培养基中，补充有 12.5% FBS，在 PBS 中冲洗一个片段。

它是控制再次分为三个部分。在福尔曼中固定一部分用于 morpho，冻结其他两部分用于分子分析。EVPS 必须由防水材料制成，不会浸出聚甲基丙烯酸、甲基聚氧乙烯和钢等化学物质。

灌注腔必须至少有 2.5 厘米深，以尽量减少血管的弯曲和扩张，并易于更换介质。静脉支撑是一根从上到下连接到 L 形附件的钢棒。压力柱上的连接管道允许调整流入和流出到静脉和介质的压力，以确定正常的流向。

用培养基轻轻注射其余两个用于灌注的段。如果该段有阀门，则流动速度会变慢。在 EVPS 中，静脉必须反转，这样阀门就不会阻碍流过。

将静脉连接到两个金属圆柱体。一次一端。用 Vicryl 三 oh 将圆柱体固定在凹痕周围，打一个紧结。

然后将静脉转移到装有培养基的灌注室。对于第三个静脉段，如前所述，将静脉的一端连接到圆柱体。然后轻轻地将网片滑到静脉上。

然后用缝合线将网片和静脉固定在圆柱体上。最后，调整网片长度，将静脉的另一端和网片固定在圆柱体上。将组件移至第二个灌注室。

EVPS 通过硅管组装在闭环中。使用一段经过过氧化物处理的硅管将每个流出圆筒连接到 Y 型分流器。对每个流入的金属圆柱体执行相同的作。

接下来，将流出分流器连接到第二个 Y 分流器。从这个 Y 分流器。将一个流出口连接到连接到压力传感器的管子上，要将另一个流出口连接到压力柱，请使用一米长的管子将压力柱连接到泵上。

通过将泵连接到流入 y 分流器来完成设置。使用另一米长的管路，将剩余的管路连接到压力柱。最低的管道用于更换介质。

组装 EVPS 后，用培养基填充色谱柱，使其略低于静脉流出管道。现在，将系统移至培养箱中，培养箱使用二氧化碳设置为 37 摄氏度。在培养箱外将 pH 值保持在恒定的 7.4。

将泵齿轮头连接到齿轮传动装置以监测压力。将 EVPS 的压力输出连接到压力传感器。检查管子是否完全装满并且没有气泡。

通过计算机软件设置每分钟 60 次脉冲且振幅恒定的脉冲心肺信号，该软件独立驱动齿轮泵。所得流量约为每分钟 160 毫升。压力由离心泵独立设置和调节，离心泵与由计算机控制的可调节压力调节器串联。

3 到 7 天后，完成每个灌注段的灌注。从每端去除 5 毫米，以丢弃静脉的结扎部分。然后从静脉的中央部分切出一个 5 毫米的环进行固定。

冷冻剩余的片段进行分子分析。将第三段嵌入福尔曼中，用于组织学和分子分析。高压灌注 7 天后，准备静脉切片进行组织学分析。

在所有情况下，h 和 e 染色显示内皮细胞的细胞核排列在培养基层中 SMC 的管腔和细胞核上。当组织用 V 凝胶染色以查看弹性蛋白灌注静脉时，内膜病理性向外重塑增厚，中层变薄明显。Masson 毛状体染色显示，三个肌肉层中只有一个持续存在平滑肌细胞积聚在内层。

相比之下，静脉的外部加固保留了 SMC 分布和介质结构 该技术需要在严格的败血症下工作。一旦掌握，使用此系统可以在不到两个小时的时间内完成。可以测试其他条件，如湍流，以回答其他问题，例如非斜流中网格加固的效率。