土壤采样及昆虫病原线虫的分离（Steine​​rnematidae，异小）

该程序的目的是展示通常用于土壤采样和分离肠道病原线虫的方法和技术。这是通过首先通过样带方法或随机采样方法收集土壤样本来实现的。接下来，用昆虫减少土壤样本，以选择性地回收肠道病原线虫。

最后一步是使用改良的白色诱捕器从受感染的昆虫中收集线虫。最终，这些技术代表了在实验室中成功建立肠道致病性线虫培养物的关键步骤，并构成了下游生物测定的基础。土壤采样技术的优势在于，我们可以去田间收集成熟阶段的病原线虫。

我而不是对感染这种线虫的昆虫进行采样，因为这种线虫很少遇到。我们采用的随机抽样策略通常用于评估来自大地理区域或区域的致病线虫的多样性。这种技术最早是在 1975 年的 Accur 投注中描述的。

这是一个选择性程序，其前提是自由生活阶段将被昆虫宿主吸引并寄生于它们。演示 这些程序将是 Rue Orozco 研究生和我实验室的 Ming Mingle 研究技术员。实验室。采集样本的地点应至少为 2 平方米，如果可能，应大于 4 平方米。

对于每个土壤样品，在 DM a C 样品区域内至少取三个较小的子样品。如果子样本符合研究的目标，则可以合并子样本。收集深度为 0 到 15 厘米的土壤样本。

每个样品应为 250 克至 1 公斤。使用土壤 CORA 拖船、手铲或类似工具，并在每个选定采样区域内的至少五个随机地点采集。每个样品应采用双层袋装，并贴上防水记号笔。

标签应包含有关地点、位置、海拔、日期和环境变量的信息，例如栖息地描述以及地点的相关植被和温度。记下当地的昆虫和其他无脊椎动物物种。收集无法立即识别的物种，以便在采集地点之间的实验室中稍后识别，用水彻底清洗采集工具，然后使用 70% 乙醇或 0.5% 漂白剂对其进行消毒。

将土壤样品储存在 8 至 15 摄氏度的冷却器中以备运输。CES 将样品的一部分分开，以分析土壤的总体特性，例如其成分、质地、电导率等。从每个土壤样本中清除可能导致地震微生物污染的碎屑。

然后用水润湿土壤，使其中的线虫可以轻松移动。将 200 至 250 克潮湿的土壤装入带盖的塑料容器中。然后添加昆虫诱饵。

5 到 10 只昆虫就足够了。盖上盖子，将容器翻转过来，放在黑暗中。在室温下，每两到三天清除死去的昆虫，并根据需要用健康的昆虫代替它们以增加重量。

如果昆虫尸体是棕色或赭色的，这表明 Stein 和 Nema 寄生在 parit。而如果尸体是砖红色到深紫色，则预期异质。使用改良的白色陷阱收集寄生在昆虫诱饵上的线虫。

首先，将 50 或 60 毫米培养皿的盖子放入 100 毫米培养皿的底部。然后放一张圆形的 watman。小盘子里的 1 号滤纸。

用无菌水冲洗昆虫尸体，然后转移到滤纸上。分散开，以免它们彼此接触。只在较大的培养皿中装满约 20 毫升蒸馏水，并用较大的培养皿覆盖组件。盖子。

在菜肴上贴上线虫名称、昆虫诱饵日期和日期的标签。陷阱设置好了。将诱捕器保持在室温下，并监测是否有感染性幼年线虫或从昆虫尸体中出现的 IJ。

这可能需要 10 到 25 天，并且取决于存放陷阱的地方的温度和湿度水平。如果疏水阀中的水位已经蒸发，请务必在装有 IJ 的板上重新装满。从较大的盘子中收集水，其中应该含有线虫。

让线虫沉下去几分钟，然后慢慢倒出水。一旦线虫留在少量水中，再加回水冲洗几次，然后小心地倒掉。然后进行连续稀释以估计线虫种群。

在 250 毫升培养瓶中，将线虫浓度调整为每毫升 1 至 3000 个线虫。将此悬浮液储存在 10 到 20 摄氏度之间。一般来说，在自然界中，发现被肠道病原线虫寄生的昆虫的机会非常低。

因此，使用 G 黑色素瘤幼虫作为诱饵的概述方案用于以更有效的速度分离此类线虫。五天后，昆虫被感染并呈红色。改良的白色陷阱显示线虫痕迹。

从这些陷阱中捕获 15 天后，线虫收集在水中，外观干净，没有昆虫组织。使用黑拉尼娅幼虫镓的单个提取周期可能不足以回收土壤样品中的所有 Oma 致病线虫。因此，我们建议多次执行此作。

此外，我们建议用户考虑其他昆虫而不是 Galleria，这也将提高恢复机会。用昆虫对土壤样品进行辩论是一种技术，也可以考虑用于分离其他昆虫病原体，例如细菌或真菌。