新的治疗肠道病变的疗效，使用活体小鼠的串行内镜成像的非侵入性评估

以下实验的总体目标是通过诱导小鼠疾病来研究抑制诱导病理的疗法，从而测试新疗法在结肠炎和癌症模型中的疗效。治疗是预防性的。在本视频中，使用重组人白细胞介素 11 蛋白，然后在饮用水中施用硫酸葡聚糖钠或 DSS，以引发急性粘膜损伤和许多与炎症性肠病相关的组织病理学特征。

接下来，通过内窥镜检查监测疾病的变化，以确定治疗效果。最终，结果表明，在对具有诱导疾病病理的小鼠进行治疗后，基于内窥镜监测和评分，疾病负担减轻。与组织学的标准技术相比，该技术的主要优点是我们能够在实验过程中监测一只小鼠。

需要检查多个动物队列。这种方法可以帮助我们提出和回答有关结肠炎症和癌症的关键问题，特别是尝试建立更好的细胞因子信号传导作可能会影响疾病的进展。使用这些临床前模型来评估药物和化合物的疗效非常重要，这使我们能够真正地多次测试同一只小鼠，并查看这些化合物是否具有活性。

我将与我们研究所的动物技术员 Giovanni CI Ciano 一起演示此程序 第一天，管理感兴趣的治疗和适当的载体控制。在该演示中，将 5 μg 重组人白细胞介素 11 蛋白溶解在 200 μL 磷酸盐缓冲盐水中，腹膜内给药确定给药的时间和频率，这将取决于为正在测试的治疗试剂建立的药代动力学特征。此处显示的是实验过程中使用每日两次腹膜内注射的预防性治疗的概述。

监测粪便稠度和血液的存在，并每天称量每只小鼠。在治疗的日子里，称重应与治疗药物同时进行，以尽量减少重复处理对小鼠造成的压力。第 3 天，在动物设施常规提供给小鼠的饮用水中制备 2.5% 葡聚糖硫酸钠或 DSS 溶液。

实验需要每只小鼠每天大约 5 毫升的 DSS 溶液。如果动物设施的环境温度波动，DSS 水的消耗量可能会发生变化。为小鼠提供新鲜的 DSS。

在第 5 天晚上将 Liam 加入干净的水瓶中，连续 5 天。除了捣碎的食物颗粒和小培养皿中提供的蛋白质补充剂外，还提供正常的饮用水。第八天的早晨。

按照文本方案中的描述进行小鼠安乐死，以收集组织用于后续的组织学分析。进行常规批次测试，以确定适当的 DSS 剂量并规避批次间差异。适当的剂量应基于体重减轻和确诊的结肠炎组织病理学。

将 DSS 剂量调整在每体积重量的 1% 到 4% 之间。取决于动物设施的微生物群落和 DSS 的批次。内窥镜设备应按照标准程序组装。

用 70% 乙醇或抗菌润滑剂对内窥镜探头进行消毒和清洁。可以使用笔记本电脑或台式计算机以及 iMovie 等标准媒体软件录制视频。在内窥镜检查过程中，标准计算机监视器而不是医用级监视器足以使结肠可视化。

每分钟 0.2 至 0.4 升的速率，在 100% 氧气中含有 3% 氟的腔室中同时麻醉 5 至 6 只小鼠的组。一旦小鼠被麻醉，通过脚趾捏确认，氟的 isof 水平应更改为 0.5 到 2% 之间为了维护，从腔室中取出一只小鼠并将其腹侧朝上，头部固定在鼻锥中，应监测完全麻醉并调整后腿，使其在小鼠后面伸展。地方。否决药膏在小鼠的眼睛上防止干燥。

握住鼠标尾巴与下脊柱相接的地方，以清楚地露出肛门。如果气流太强，气流将允许结肠膨胀。空气将被泵入鼠标的胃中。

小心地将硬质内窥镜护套插入直肠。通常，内窥镜可以插入长达 3 厘米，此时小鼠的结肠弯曲，硬质内窥镜无法触及。内窥镜检查过程中的一个常见困难是由于粪便阻塞了进入结肠腔的通道。

通过在手术前轻轻按摩小鼠的腹部以促进排便来避免这种情况。在内窥镜检查程序的任何阶段开始视频录制。疾病评分可以由经验丰富的助手在手术过程中或稍后的时间点从视频文件中记录下来，确保这些手术由经验丰富的科学家执行。

内窥镜检查后，每只小鼠的每个内窥镜检查程序大约需要两分钟。将小鼠放回笼子并在麻醉恢复期间监测它们。动物通常在从 isof Lorraine 中取出后两分钟内被唤醒，施用鼻锥，此处显示的是暴露于 DSS 以模拟急性炎症性肠病的小鼠的代表性结果。

在方案的第 8 天未治疗。野生型小鼠如预期体重减轻而患有结肠炎，内窥镜检查图像和内窥镜结肠炎评分显示了对照小鼠和接受重组人白细胞介素 11 蛋白治疗的小鼠。体重减轻用作监测与结肠炎相关的疾病的标准参数，该参数通常用于监测小鼠的整体健康状况，如内窥镜结肠炎评分降低所示。

在对具有诱发疾病病理的小鼠进行治疗后，疾病明显减少。因此，一旦你掌握了这项技术，它应该是，你应该能够在大约两分钟内评估鼠标。一般来说，它真正允许您的是在相关的临床前模型中非常有效地测试这些治疗是否对炎症和癌症有影响。