通过眼内注射磁性微球诱导实验性青光眼

本实验的目的是通过将磁性微球注入大鼠眼球前房，诱导眼内压升高。首先，将一个磁环放置在麻醉动物的眼部周围，洗涤磁性微球，将其重悬于溶液中，然后装入注射器。接着，将磁性微球注入眼球的前房。

回收过程中移除磁环。通过组织学分析（如TUNEL染色或视神经染色）获得的过程数据可测量因眼内压升高导致的视网膜神经节细胞死亡。将灭菌的八微米磁性微球珠在1毫升Hank's平衡盐溶液中重悬，并以10,000 ×g离心5分钟，重复洗涤三次。

然后将样品重新悬浮于0.5毫升HBSS中，制成30毫克/毫升的溶液。现在使用为大鼠眼睛校准的回弹式眼压计，在清醒动物中测量5次基础眼压值。麻醉后，将眼用软膏涂抹于未测眼的对侧眼，以保持其湿润。

麻醉期间，将0.5%盐酸丙烷作为局部麻醉剂应用于手术眼。随后，用5%聚维酮碘水溶液冲洗该眼。五分钟后，擦去聚维酮碘，并用0.9%无菌生理盐水冲洗眼睛。

在麻醉期间，需定期滴加无菌生理盐水以保持眼球湿润。现在将一个环形磁铁置于眼球周围，以最大限度降低虹膜损伤的风险，并减少微珠的丢失。将针头以尽可能与角膜表面相切、并与虹膜平行的方向进行定位。

将25微升浓度为30毫克/毫升的γ射线辐照磁性微球注入前房。注射后保持针头原位1分钟，以确保微球沉降至房角（IOC角）处，从而阻塞小梁网的房水引流。待微球初步沉降后数秒，轻微调整针头角度，使少量房水得以渗出，以减少眼内压的短暂升高。

为确保针头在不同操作中可继续使用，需用 PBS 冲洗针头，随后用 70% 乙醇冲洗，最后在此阶段用蒸馏水冲洗。如有必要，移除磁铁并利用其将磁珠吸引至覆盖不完全的区域。

注射后将磁铁继续放置在眼睛周围10分钟，以确保微珠充分沉降到虹膜角膜角内。使用0.25毫克/千克的ESOL盐酸盐逆转麻醉。

给予0.5 丙烷盐酸盐以缓解疼痛，并局部使用氯霉素眼膏预防感染。将动物置于加热垫上直至恢复活动能力，然后转移至保温箱中。

使用对侧眼作为未处理的对照。在注射微珠后每两到三天重复一次眼内压（IOP）测量，并在此后每两到三天进行一次测量。确定纳入研究的眼睛的标准，包括眼内压比对侧对照眼的压力升高超过5毫米汞柱，且眼内压不超过60毫米汞柱；若眼压在注射后一周内恢复至基线水平，则不应将该眼纳入研究。然而，如果需要，可对未能产生高眼内压的眼睛再次注射微珠。

将解剖出的眼球和视神经用4%多聚甲醛固定，通过TUNEL染色评估视网膜神经元损伤，并通过甲苯蓝染色评估视神经损伤。本实验中，向虹膜角膜角注射磁珠可稳定诱导眼压持续显著升高。此外，眼压升高在整个实验过程中得以维持。

对照组未注射微珠眼在整个实验过程中的平均眼内压为19.7 ± 0.3 mmHg，注射微珠眼的平均眼内压为40.5 ± 2.8 mmHg。此外，眼内压峰值从22.8 ± 0.3 mmHg升高至49.9 ± 2.3 mmHg，以确定眼内压升高是否导致视网膜神经节细胞死亡。对视网膜进行TUNEL染色，并对视神经横截面进行组织学分析。

我们观察到，在注射微珠并伴有眼压升高的眼睛中，TUNEL染色呈增加趋势。与对侧对照高血压视网膜相比，凋亡细胞核的数量大约增加了15倍；而在未施加压力情况下注射磁性微珠的眼睛中，TUNEL阳性细胞数量与未注射对照组相比无显著差异。对青光眼模型视神经病理的进一步研究表明，许多轴突中出现了亚甲蓝的积聚，提示这些细胞突起发生了退行性变。