Imaging Local Ca<sup>2+</sup> Signals in Cultured Mammalian Cells

Jeffrey T. Lock; Kyle L. Ellefsen; Bret Settle; Ian Parker; Ian F. Smith

doi:10.3791/52516

JoVE Journal
Biology

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Imaging Local Ca²⁺ Signals in Cultured Mammalian Cells

成像本地CA 2+在培养的哺乳动物细胞信号

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09:30 min

March 3, 2015

DOI: 10.3791/52516-v

Jeffrey T. Lock¹, Kyle L. Ellefsen¹, Bret Settle¹, Ian Parker^1,2, Ian F. Smith¹

¹Neurobiology and Behavior,University of California, Irvine, ²Physiology and Biophysics,University of California, Irvine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在这里，我们介绍了使用荧光显微镜在载有 Ca²⁺ 指示剂的完整哺乳动物细胞中对局部 IP₃ 介导的 Ca²⁺ 事件进行成像的技术，以及一种自动识别和分析这些事件的算法。

该程序的总体目标是使用基于相机的成像来展示完整哺乳动物细胞中局部 IP 3 介导的钙信号的采集、检测和分析。这是通过首先将细胞培养到玻璃底盖培养皿上，并在其中加载细胞膜可渗透形式的荧光钙指示剂来实现的。CAL 5 个 20 个和笼式 IP 3 个。

第二步是将盖玻片放在倒置显微镜的载物台上，并用 488 纳米光照射样品，以激发钙敏感荧光染料 Cal five 20。接下来，通过将细胞暴露于短暂的紫外光脉冲来诱导局部钙信号。这种光从笼中的前体中释放了 IP 3，使其现在可以与乙酰三磷酸受体结合并介导内质网中的钙释放。

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