Name: 隔离和不同的老年小鼠胸腺移植的移植。 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: 学习将不同年龄小鼠胸腺移植到免疫缺陷受体中的方法，用于体内分析T细胞发育和胸腺选择事件。该技术通过流式细胞术评估T细胞重建，为研究T细胞个体发生提供重要模型。

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本工作获得了美国国立卫生研究院（1R01AI083269）资助的支持。

小鼠实验已获得北卡罗来纳大学教堂山分校机构动物护理与使用委员会（IACUC）的批准，所有动物护理均遵循IACUC指南。
1. 新生儿与成年胸腺的制备
<ol>
	<li>在处死供体小鼠之前，准备好所有试剂和设备。</li>
	<li>通过高压灭菌或其他适当方法对手术器械进行灭菌。所有手术操作必须在层流罩内进行，以维持无菌条件并避免污染。准备从供体小鼠中取出胸腺所需的工具。</li>
	<li>在层流罩内，将一个60 mm培养皿装满无菌1×PBS（pH 7.4），并置于冰上。该培养皿用于在移植前短暂存放从供体小鼠中切除的胸腺。</li>
	<li>根据伦理指南，通过断头法处死新生供体小鼠，通过CO2窒息法处死成年供体小鼠，随后进行颈椎脱位。</li>
	<li>切除胸腺时：将小鼠仰卧置于无菌吸水纸巾上，并在切口前喷洒70%乙醇。</li>
	<li>沿中线切开皮肤，暴露腹腔和胸腔。将皮肤向胸部和前肢方向翻折，以暴露胸腔。</li>
	<li>在膈肌和肋骨上做两个侧向切口，暴露上纵隔和前胸腔。胸腺应可见为位于心脏上方及邻近区域的两个白色叶状结构。</li>
	<li>用精细镊子轻轻分离胸腺周围的结缔组织，注意不要破坏包膜。用镊子将肋骨撑开的同时，使用另一把镊子将弯头镊置于器官下方，垂直向上提起，从而取出两个胸腺叶。此操作可借助解剖显微镜完成，尤其适用于从新生小鼠中取出胸腺。</li>
	<li>将取出的胸腺放入盛有无菌1×PBS（pH 7.4）的60 mm培养皿中，并置于冰上。通过切断连接两叶的结缔组织峡部，将胸腺叶分开。清除胸腺叶上的任何碎屑，注意不要损伤包膜，并将胸腺切成适合移植的若干片段。</li>
	<li>不要对从新生小鼠获得的胸腺进行进一步分割。 
	注：最多用于两只受体小鼠（每只受体使用一个叶）。</li>
	<li>将从成年小鼠获得的胸腺移植给最多4至6只受体小鼠。用镊子小心夹住一个成年胸腺叶（如图1所示），使用手术剪将其均分为三个相等的部分。</li>
	<li>对每只供体小鼠重复步骤1.3–1.4。为尽量减少胸腺暴露时间，每次仅处理一只供体小鼠的胸腺。</li>
</ol>
2. 肾包膜下胸腺移植
<ol>
	<li>组装表1中列出的预灭菌设备。在整个操作过程中应采用正确的无菌技术，以防止将移植受体暴露于受污染的器械或试剂中。</li>
	<li>移植前，称重并标记每只受体小鼠。</li>
	<li>在超净工作台内设置解剖显微镜和麻醉装置。</li>
	<li>使用电动剃刀剃除受体小鼠左侧的毛发，并确保切口区域周围无残留毛发。</li>
	<li>打开异氟烷蒸发器，使用1-2%的剂量对小鼠进行麻醉。在开始手术前，通过夹捏脚趾检查是否无反射，以确认麻醉效果充分。</li>
	<li>小鼠充分麻醉后，在其眼睛上涂抹兽用眼膏以防止干燥，并按以下步骤准备小鼠进行移植：</li>
	<li>将小鼠置于解剖显微镜下，呈右侧卧位，使剃毛侧朝上。从手术区域中心开始，使用一次性移液管以环形方式滴加70%乙醇，随后使用聚维酮碘（碘伏）。在切开前，重复乙醇/碘伏处理3次。</li>
	<li>使用解剖剪在肾脏正上方做一道1-2 cm的侧腹切口。</li>
	<li>用中号镊子夹住肾脏附近的结缔组织，轻轻提起肾脏，使其位于肌肉组织上方。为保持肾脏暴露并固定在肌肉组织上，将中号镊子的一臂插入肾脏下方，特别注意不要破坏肾蒂。</li>
	<li>为防止组织干燥，在操作肾脏及肾包膜的每一步骤中均需用无菌1×PBS（pH 7.4）冲洗肾脏，直至操作完成。</li>
	<li>使用精细镊子夹住靠近肾上腺远端的肾包膜边缘，轻轻提起并分离包膜与肾脏。</li>
	<li>使用18号针头切开一个足够大的切口，以便插入准备好的供体胸腺组织（图2A）。务必使包膜切口尽可能小，以防止移植物随时间发生移位。</li>
	<li>在保持包膜与肾脏分离的同时，使用第二把精细镊子将移植物插入包膜下方，并将胸腺尽可能向前推离包膜切口（图2B）。</li>
	<li>将镊子从肾脏下方取出，轻柔地将肾脏通过切口复位。</li>
	<li>缝合腹膜壁以关闭肌肉层，缝合后涂抹碘伏。缝合完成后，使用伤口夹关闭皮肤，并在周围区域涂抹碘伏。</li>
	<li>将小鼠放回已用加热灯预热的笼子中。</li>
	<li>监测每只术后小鼠，直至其完全恢复意识和活动能力；未从麻醉中恢复的小鼠不得与其他动物同笼饲养。</li>
	<li>根据需要给予小鼠术后镇痛药物。可通过饮水提供术后镇痛剂，如对乙酰氨基酚，浓度为1.6 mg/ml。</li>
	<li>对每只受体小鼠重复步骤2.3-2.9。</li>
	<li>确保小鼠在术后1小时内恢复正常活动。监测每只小鼠的术后体重、运动能力以及饮水和进食情况，以判断是否出现并发症。 
	注：与术前体重相比，术后体重下降，以及活动能力改变或拒食拒水，可能提示出现并发症。</li>
	<li>通过尾尖采血并使用Lympholyte细胞分离液按制造商说明分离淋巴细胞，监测外周血中T细胞重建情况。使用&#160;荧光标记的特异性抗体对淋巴细胞进行染色，靶向&#160;T细胞标志物CD3、CD4和CD8，同时使用活/死细胞鉴别染料（如荧光活化琥珀酰亚胺酯）8。如图3所示，可通过圈选单细胞、活细胞及CD3阳性细胞进行分析。</li>
</ol>

<ol><li>Kappler, J. W., Roehm, N., Marrack, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+tolerance+by+clonal+elimination+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">T cell tolerance by clonal elimination in the thymus.</a> Cell. 49 (2), 273-280 (1987).</li>
<li>Takahama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Journey+through+the+thymus%3A+stromal+guides+for+T-cell+development+and+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Journey through the thymus: stromal guides for T-cell development and selection.</a> Nat. Rev. Immunol. 6, 127-135 (2006).</li>
<li>Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+selection+of+the+T+cell+repertoire%3A+what+thymocytes+see+%28and+don%E2%80%99t+see%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don’t see).</a> Nat. Rev. Immunol. 14 (6), 377-391 (2014).</li>
<li>Schwartz, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+immunologic+self-tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Acquisition of immunologic self-tolerance.</a> Cell. 57 (7), 1073-1081 (1989).</li>
<li>Kishimoto, H., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+defect+in+central+tolerance+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A defect in central tolerance in NOD mice.</a> Nat. Immunol. 2 (11), 1025-1031 (2001).</li>
<li>Anderson, G., Jenkinson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+central+tolerance+with+reaggregate+thymus+organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating central tolerance with reaggregate thymus organ cultures.</a> Methods. Mol. Biol. 380, 185-196 (2007).</li>
<li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+development+of+autoreactive+T+cells+in+NOD+mice+is+regulated+in+an+age-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymic development of autoreactive T cells in NOD mice is regulated in an age-dependent manner.</a> J. Immunol. 191 (12), 5858-5866 (2013).</li>
<li>Stewart, C. C., Stewart, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+6.+Immunophenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22%5BJournal%5D)">Chapter 6. Immunophenotyping.</a> Current Protocols in Cytometry. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).</li>
<li>Rice, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+transplantation+for+complete+DiGeorge+syndrome%3A+medical+and+surgical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Thymic transplantation for complete DiGeorge syndrome: medical and surgical considerations.</a> J. Pediatr. Surg. 39 (11), 1607-1615 (2004).</li>
<li>Markert, M. L., et al. Transplantation of thymus tissue in complete DiGeorge Syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkert%2C+ML+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 341, 1180-1189 (1999).</li>
<li>Market, M. L., Devlin, B. H., McCarthy, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymus transplantation.</a> Clin. Immunol. 135 (2), 236-246 (2010).</li>
<li>Wells, A. D., Li, X., Strom, T. B., Turka, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+peripheral+T-cell+depletion+in+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of peripheral T-cell depletion in transplantation tolerance.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 356 (1409), 617-623 (2001).</li>
<li>Albuquerque, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+FOXN1-Deficiency+is+associated+with+ab+double-negative+and+FoxP3%2B+T-cell+expansions+that+are+distinctly+modulated+upon+thymic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human FOXN1-Deficiency is associated with ab double-negative and FoxP3+ T-cell expansions that are distinctly modulated upon thymic transplantation.</a> PLoS One. 7 (5), e37042(2012).</li>
<li>Chinn, I. K., Milner, J. D., Scheinberg, P., Douek, D. C., Markert, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymus+transplantation+restores+the+repertoires+of+forkhead+box+protein+3+%28FoxP3%29%2B+and+FoxP3-+T+cells+in+complete+DiGeorge+anomaly%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymus transplantation restores the repertoires of forkhead box protein 3 (FoxP3)+ and FoxP3- T cells in complete DiGeorge anomaly.</a> Clin Exp Immunol. 173 (1), 140-149 (2013).</li>
<li>Savino, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thymus+is+a+common+target+organ+in+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">The thymus is a common target organ in infectious diseases.</a> PLoS Pathog. 2 (6), e62(2006).</li>
</ol>

作者没有需要披露的任何竞争性财务利益。

调控胸腺选择的事件目前尚不明确。近期研究表明，胸腺选择效率在个体发育过程中会发生变化。将这一方法与不同的转基因供体和受体小鼠胸腺相结合，将有助于进一步研究并鉴定调控胸腺选择的相关事件和参数。值得注意的是，胸腺移植已被用于治疗和管理T细胞及胸腺相关疾病，例如缺乏功能性T细胞的无胸腺婴儿以及患有DiGeorge综合征的患者，后者表现为胸腺发育不全或胸腺缺如9-10。与其他大多数器官移植一样，胸腺移植也存在并发症，主要与移植物耐受相关的并发症12以及自身免疫性病理的发生有关11。这些问题，加上对胸腺细胞耐受诱导机制进行更深入理解与表征的需求，促使了本方法的建立。本文所述方案可实验性地模拟胸腺移植过程，并证明受体小鼠能够实现有效的T细胞重建。
在该实验方案中有几个关键点需要注意。在进行移植手术之前，操作者必须熟练掌握外科手术技术和无菌操作技术。严格遵守这些要求有助于最大限度地减少创伤、小鼠麻醉时间以及恢复时间，从而能够轻松实现术后100%的存活率。在准备供体胸腺时，必须将器官置于湿冰上，以尽量减少细胞死亡。此外，胸腺叶需被切...

胸腺是T细胞发育过程中关键事件发生的器官1。定居的胸腺细胞在T细胞受体（TCR）α和β基因重排后，会与胸腺皮质和髓质区域中的淋巴基质细胞及抗原呈递细胞（APC）发生一系列相互作用2。胸腺阳性选择由皮质胸腺上皮细胞（TEC）介导，产生能够识别在宿主主要组织相容性复合物（MHC）I类和II类分子背景下呈递的抗原肽的胸腺细胞2-3。随后的胸腺阴性选择则通过与髓质TEC或树突状细胞（DC）相互作用，清除自身反应性胸腺细胞，这些细胞呈递由MHC I类和II类分子结合的自身蛋白来源的肽段3。这些过程的最终结果是形成一群成熟的CD4+和CD8+ T细胞，能够对广泛的外来抗原产生应答，同时对自身蛋白的反应性极低4。
胸腺选择事件的效率受到多种因素的影响，包括胸腺成熟度、髓质和皮质胸腺上皮细胞（TEC）的频率、胸腺树突状细胞（DC）的亚群组成以及胸腺前体细胞的来源3。值得注意的是，异常的胸腺选择可导致自身免疫性疾病5或免疫缺陷性疾病，分别源于阴性选择或阳性选择的受损。然而，调控胸腺选择的分子机制目前仍不清楚。体外方法如重组胸腺类器官培养（RTOC）6已被证明可用于分析与胸腺选择相关的基本事件，但无法完全重现持续进行的体内事件的动态过程。因此，建立了基于胸腺移植的方法，以更有效地在体内研究胸腺细胞的选择过程7。
本方案描述了将新生期和成年供体小鼠的胸腺移植到免疫缺陷型scid受体小鼠中的方法。该技术可用于研究调控胸腺阳性与阴性选择的机制，以及在个体发育过程中不同T细胞亚群的胸腺输出情况。最近，该方法已被用于证明小鼠出生后早期胸腺选择效率受限，导致自身反应性T细胞的生成增加，以及针对外来抗原的T细胞受体库多样性降低7。

<table><tbody><tr><td>乙醇&amp;nbsp;</td><td>Decon Laboratories</td><td>2705HC</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO</td><td>14190-144</td><td>pH 7.4</td></tr><tr><td>贝塔碘溶液</td><td>Purdue Products</td><td>67618-150-17</td><td></td></tr><tr><td>18号针头</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>缝合线（1.0 公制）</td><td>Ethicon</td><td>J493G</td><td>18&quot; (45cm)</td></tr><tr><td>AUTOCLIP 伤口夹（9 mm）</td><td>Clay Adams&amp;reg; 品牌</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>移液管</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-20</td><td>无菌，一次性使用</td></tr><tr><td>小鼠抗 CD3 抗体</td><td>eBioscience</td><td>11-0031-85</td><td>克隆株：1452C11</td></tr><tr><td>小鼠抗 CD4 抗体</td><td>eBioscience</td><td>48-0042-82</td><td>克隆株：RM4-5</td></tr><tr><td>小鼠抗 CD8 抗体</td><td>eBioscience</td><td>25-0081-82</td><td>克隆株：53-6.7</td></tr><tr><td>采血针</td><td>Medipoint</td><td>Goldenrod 4mm</td><td></td></tr><tr><td>太平洋橙琥珀酰亚胺酯，三乙基铵盐</td><td>Invitrogen</td><td>P30253</td><td></td></tr><tr><td>96孔圆底聚丙烯板</td><td>Corning</td><td>3365</td><td></td></tr><tr><td>1.2 ml 聚丙烯簇管</td><td>Corning</td><td>4401</td><td></td></tr><tr><td>5 ml 聚丙烯圆底管</td><td>BD</td><td>352002</td><td></td></tr><tr><td>40 µm 尼龙细胞筛</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>16% 电镜级甲醛溶液</td><td>Electron Microscopy Services</td><td>15710</td><td>危险品</td></tr><tr><td>Puralube 眼科软膏</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC0138063</td><td></td></tr><tr><td>淋巴细胞分离液</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 细胞培养皿</td><td>Corning</td><td>430196</td><td>60 mm × 15 mm，无菌</td></tr></tbody></table>

不同年龄小鼠胸腺移植物的分离与移植

Isolation and Transplantation of Different Aged Murine Thymic Grafts.

调控胸腺选择效率的机制仍不明确。本文所述方法可实现 体内 针对自身和外来抗原特异性T细胞发育与选择的分析。该方法包括将来自不同年龄小鼠的胸腺移植物植入免疫缺陷小鼠体内 scid 受者。在相对较短的时间内，受者体内会完全重建来源于移植胸腺移植物的T细胞。只有在分离时已定植于胸腺的胸腺细胞才会经历选择并发育为成熟的T细胞。因此，可借此评估移植物中T细胞的特性与特异性随年龄相关胸腺事件变化的情况。尽管胸腺移植需要较高的技术操作水平，但该方法为研究提供了独特的策略 体内 多种由于或源于胸腺功能异常和/或稳态失衡的病理状态。

该手术的成功取决于尽量减少手术创伤以及将移植物准确地置于肾包膜下。应切割胸腺移植物，以确保获得适合后续移植的适当大小的胸腺组织片段，如图1所示。根据图1的示意图，可使用新生或成年小鼠的胸腺进行成功的包膜下移植，并获得稳定且可重复的T细胞植入效果。如前所述，将移植物恰当地定位在肾包膜下对于维持移植物的长期存活、功能及血管化至关重要。如图2所示，胸腺移植物应放置在肾脏表面，靠近肾上腺（肾脏前部），并与包膜切口位置相对（肾脏后部）。在合适的造血环境下，成功的胸腺移植可维持超过30周的持续功能7。
移植后，通过流式细胞术分析外周血中获得的T细胞来评估植入情况。图3和表2展示了移植受体在移植后6周时，各器官及外周血中典型的T细胞植入水平。利用该技术，我们课题组此前已报道过新生和成年胸腺移植受体中外周血CD4+和CD8+ T细胞重建的动力学过程。简言之，术后一周...

本报告详细描述了将不同年龄供体小鼠的胸腺移植到免疫缺陷型受体小鼠肾包膜下的操作方法。该技术旨在模拟T细胞发育及胸腺选择过程。 在体.

调控胸腺选择效率的机制仍不明确。本文所述方法可实现对体内发育及……的在体分析。

本实验的总体目标是在T细胞发育过程中的特定时间点，实现对T细胞阴性选择的体内分析。首先，获取特定年龄供体小鼠的胸腺；其次，暴露受体裸鼠的肾脏，并将供体胸腺通过手术植入其肾包膜下。在最后一步，关闭受体。最终，可通过流式细胞术评估外周T细胞区室的成功重建。该方法可用于研究胸腺选择和T细胞生成的时间过程，实质上可提供在特定关注时间点T细胞抗原应答过程中T细胞生成的快照。为从成年或新生小鼠中移除胸腺，首先将动物仰卧置于无菌吸水纸巾上，并用70%乙醇喷洒毛发。然后沿中线切开皮肤，暴露腹腔和胸腔，并将皮肤向胸部和前肢方向翻折，充分显露胸腔。接着，在膈肌和肋骨两侧分别做两个侧向切口。为暴露上纵隔和胸腔前部，应可见位于心脏上方并紧邻心脏的两个白色叶状胸腺。使用精细镊子小心分离胸腺周围的结缔组织，注意不要破坏其被膜。然后用镊子轻轻推开肋骨，将一对弯头镊置于胸腺下方，垂直向上提起以完整取出器官。将胸腺置于含有无菌 PBS 并置于冰上的 60 毫米培养皿中，剪开结缔组织以分离胸腺叶。现在，清除所有碎屑，注意不要损伤包膜，然后在移植前将胸腺切成适当数量的移植片。称重并标记每只受体小鼠。随后依次对每只受体小鼠，使用电动剃刀剃除左侧毛发，确保切口区域周围无残留毛发。小鼠充分麻醉后，将眼用软膏涂抹于其眼睛，并将动物置于解剖显微镜下，呈右侧卧位，脱毛侧朝上。然后从手术区域中心开始，使用一次性移液管以环形方式滴加70%乙醇进行消毒，再用棉签涂抹聚维酮碘。经过三次消毒处理后，在肾脏正上方做1至2厘米的侧腹切口，第一层切口暴露肌肉组织，第二层切口穿过肌肉组织，从而暴露肾脏。然后使用中号镊子夹住肾脏附近的结缔组织，轻轻移动肾脏，使其置于肌肉层上方。接着，将中号镊子的一臂插入肾脏下方。特别注意不要损伤肾动静脉，再用精细镊子夹住靠近肾脏边缘、距肾上腺最远端的被膜，用18号针头将其从器官上分离。现在，做一个刚好足以插入准备好的供体胸腺组织的切口，同时保持肾包膜与肾脏分离。用一对镊子在肾包膜与肾脏之间创建一个用于移植组织的囊腔。用第二对精细镊子将移植物插入包膜下方。然后将胸腺从囊膜切口尽可能向前推移。当移植物就位后，从肾脏下方移除镊子，并轻柔地将器官复位至腹腔内。当肌肉缝合完毕后，缝合腹膜壁以关闭肌肉层。使用伤口夹闭合真皮，并对周围区域再次涂抹聚维酮碘。然后将动物放回置于加热灯下预热过的笼子中，直至其完全恢复。手术成功与否取决于尽量减少手术创伤以及准确地将移植物置于肾包膜下。因此，供体胸腺组织应首先被切成适合移植的适当大小的片状，以确保移植物的准确定位。移植后，应将供体胸腺组织放置于靠近肾上腺的肾脏表面，且组织方向应与包膜切口端相反。移植物的存活情况可通过流式细胞术分析受体外周血中获得的T细胞来评估。此处展示了移植后六周，受体小鼠各器官及外周血中典型的T细胞植入水平。观看本视频后，您应能够充分掌握如何从不

isolation-and-transplantation-of-different-aged-murine-thymic-grafts

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

隔离和不同的老年小鼠胸腺移植的移植。

我们开发了用于胸腺活体成像采集的新型实验工具和方案。该技术将有助于识别胸腺内发生T细胞发育的“微环境”。...

利用双光子显微镜对小鼠胸腺进行活体成像

本视频展示了如何利用同种异体造血干细胞和可诱导移植物抗宿主病（GvHD）的脾源性异反应性T淋巴细胞，在经致死剂量照射的受体小鼠中诱导肠道移植物抗宿主病。该实验方案有助于建立严重的急性肠道GvHD模型，以深入理解该疾病的发病机制，并开发创新的治疗策略。...

通过同种异体骨髓与脾细胞移植在小鼠模型中诱导移植物抗宿主病

尾部皮肤移植是研究小鼠同种异体免疫反应中T细胞依赖性排斥反应和耐受诱导的有力模型。该方案的优势在于手术创伤小，且易于监测，无需处死受体小鼠。...

小鼠尾部皮肤移植以研究同种异体CD4 T细胞应答

本文介绍了一种高效分离、鉴定和纯化小鼠胸腺上皮细胞（TECs）的方法。该方案可用于研究胸腺在正常T细胞发育、胸腺功能障碍以及T细胞重建中的功能。...

小鼠胸腺上皮细胞的分离、鉴定与纯化

本文描述了通过分析T细胞前体的生成动力学、表型及数量，来表征胸腺定植前体细胞的体内和体外方法。...

利用小鼠胚胎胸腺定植前体细胞的表征 体内 和 体外 检测方法

为了研究联合实体器官与血管化复合异体移植，我们描述了一种新的小鼠异位整块胸壁、胸腺和心脏移植模型，该模型采用颈部无缝合套管技术。...

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采用端侧吻合技术进行颈部异位小鼠心脏移植以研究移植免疫学

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