神经退行性疾病果蝇模型中攀爬缺陷的定量分析

本实验的总体目标是定量评估野生型果蝇以及运动相关基因突变果蝇的攀爬能力。首先将果蝇转移至玻璃量筒中，然后通过轻轻敲击量筒底部（置于泡沫垫上）使果蝇跌落至量筒底部，从而实现这一目标。

接下来，使用摄像机记录果蝇在两分钟内穿过目标线的情况。最后一步是分析视频，每10秒绘制一次位于目标线上方的果蝇数量。最终，攀爬实验用于鉴定果蝇突变品系在攀爬能力方面的缺陷。

该技术或现有技术（例如野生型方法）的主要优势在于能够检测攀爬能力中的细微差异。该方法有助于回答神经退行性疾病领域中的关键问题，例如特定基因在遗传性痉挛性截瘫导致进行性步态障碍中的作用。该技术的应用前景主要指向治疗手段的开发。

由于IP可用于神经退行性疾病的药物反应和候选基因突变体的简单定量检测，因此在神经系统疾病研究中具有重要意义。首先，使用二氧化碳麻醉20只果蝇，并将所有果蝇放入一个含有食物的25毫米×95毫米收集管中。然后将装有果蝇的管子水平放置于纸板托盘内，以避免果蝇被困在管底可能积聚的液体中。将果蝇在12小时光照/12小时黑暗循环条件下于培养箱中孵育至少21小时。次日上午，通过将果蝇从收集管转移至一个250毫升玻璃量筒中来建立攀爬实验，并用封口膜密封量筒顶部，防止果蝇逃逸。

在室温光线下，22摄氏度、40%湿度条件下进行实验。每次实验应选择一天中的同一时间进行，以避免睡眠周期带来的干扰。同时，应在实验台面上标记圆筒的位置，以确保每天位置保持一致。

统计圆筒底部和食物小瓶中死亡果蝇的数量，并将该数值记录为死亡率。接下来，将摄像机安装在三脚架上，轻轻对准250毫升量筒上190毫升刻度线处进行聚焦。

用足够的力度将圆筒在闭孔泡沫垫上敲击5到10次，使果蝇移至圆筒内底部表面。然后用另一只手按下相机的录制按钮。在相机录制过程中，以明显非节奏性的模式敲击圆筒6次。

每次试验从果蝇最后一次被轻敲开始计时，持续两分钟。试验结束后，将果蝇置于95%乙醇中处理。完成一次试验后，重复此攀爬实验10次，每次使用20只新鲜果蝇，以检测各组间运动能力的微小差异。

将圆柱体在洗碗机中清洗，并过夜晾干，以便实验完成后可重复使用。为分析果蝇行为表现，首先观看每只果蝇实验过程的录像，记录每10秒通过目标线的果蝇总数。若某只果蝇退回或掉落，则记为负一，并将下一只通过目标线的果蝇计数为退回或掉落果蝇的相同编号。

例如，如果第15只果蝇位于目标线以下，则将下一只越过该线的果蝇视为第15只，而非第16只。然后从果蝇总数中减去死亡数，以得到试验区域中仍存活的果蝇数量。在研究严重突变时，通过在不同时间点记录位于目标线以上的果蝇百分比，可利用不同的攀爬实验观察到不同程度的攀爬缺陷。

在此实验中，记录了八日龄果蝇在18秒内爬至空食物管顶部的数量，结果显示两组之间的爬行行为无显著差异。另一方面，通过本方案中的爬行实验检测，Bastin 17 dash seven over TM three 突变果蝇相较于对照组表现出爬行能力的缺陷。由于许多运动障碍具有进行性特征，因此观察果蝇随时间推移的行为演变非常重要。

在出生两天时，能够爬过目标线的果蝇数量存在显著差异。与对照组相比，随着突变果蝇从两天龄继续老化，其攀爬能力持续下降。

一旦掌握，该实验和分析可在三小时内完成。观看本视频后，您应能够充分理解如何对神经疾病相关的 dola 突变模型中的运动缺陷进行定量分析。