多能干细胞的海藻酸钠封装使用同轴喷嘴

该程序的总体目标是将干细胞安全有效地包埋到藻酸盐、水凝胶胶囊中，并在胶囊内培养它们以控制聚集和微环境，这是通过首先混合过滤的干细胞悬液和海藻酸钠溶液来实现的。然后将混合物转移到注射器中，并在注射器上安装同轴喷嘴，然后再将它们放置在注射泵上。接下来，通过用共流氮气排出细胞悬液，然后收集和氯化钙溶液来制备液滴。

然后用聚 L 赖氨酸处理胶囊以防止细胞泄漏，并用 EDTA 处理以使内胶囊流化，然后在旋转振荡条件下培养包埋的细胞。最后，通过 EDTA 从胶囊中收集细胞并物理破坏膜。最终，多能干细胞的藻酸盐包埋可防止细胞过度聚集，并限制悬浮培养中细胞所承受的纯粹压力。

这种方法可以帮助回答生物和生物医学领域的关键问题，例如细胞移植的大规模扩增和干细胞生态位的研究。按照文本方案中的说明收集细胞，以 160 倍 G 离心 3 分钟，开始细胞包埋。通过 Resus 洗涤诱导的多能干细胞或 IPS 细胞沉淀，悬浮在缓冲盐水堆中，复苏后离心 3 次，悬浮细胞和堆缓冲盐水。

通过 40 微米的细胞过滤器过滤细胞悬液，以去除大聚集体，否则可能会堵塞喷嘴。接下来，混合 2 毫升过滤细胞悬液和 3 毫升 5% 海藻酸钠溶液。要获得 3% 海藻酸钠的 5 毫升细胞悬液，细胞密度为 DIR，每毫升超过 100 万个细胞。

将细胞悬液收集到 5 毫升注射器中后，在注射器上安装同轴喷嘴并将其放在注射泵上，通过同轴喷嘴的外针喷出氮气，并通过内喷嘴排出细胞悬液。将液滴收集到 250 毫升 0.5% 氯化钙溶液中，等待 10 至 20 分钟，同时以 60 至 90 RPM 的速度搅拌。用堆缓冲盐水洗涤后，将收集的胶囊用作裸胶囊，以处理胶囊以每体积 0.05% 重量孵育海藻酸钙胶囊。

Poly L 赖氨酸溶液在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下振荡 5 分钟。将胶囊收集到试管中并用堆缓冲盐水洗涤后，将它们在含有 10% FBS 的 DMEM 中孵育。为了中和其表面的电荷，将所得胶囊用作包衣胶囊以产生空心胶囊。

将胶囊在含有 10 毫摩尔 EDTA 的堆缓冲盐水中孵育 5 分钟。EDTA 处理的胶囊用作空心胶囊。孵育后，将包封的细胞以 75 RPM 的速度在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳下振荡孵育 10 天，收集胶囊并在 37 摄氏度和 5% 二氧化碳的 10 毫摩尔 EDTA 中孵育 10 分钟。

通过以 1000 倍 G 离心 3 分钟，从未经聚 l 赖氨酸处理的藻酸盐胶囊中收集细胞。如果用聚 L 赖氨酸处理藻酸盐胶囊，则用连接到注射器的针头上下吹打约 10 次，打破藻酸盐聚 L 赖氨酸膜。针直径应小于胶囊尺寸，本实验使用 25 号针头。

以 1000 至 5， 000 倍 G 离心 5 分钟后，严格从破损的藻酸盐 poly L 赖氨酸膜中收集细胞沉淀如果从细胞中收集 mRNA 样品，请注意，剩余的藻酸盐 poly L 赖氨酸膜可能会阻止 mRNA 纯化，如高速摄像机所显示的那样。排出的藻酸盐溶液在排出后立即形成球形。如果以低于每分钟 1 升的氮气流速排出悬浮液，则液滴的大小是均匀的。

但是，如果氮气流量高于每分钟 1 升，液滴就会分解，液滴的大小就会变得不均匀。鉴于此，使用这种方法很难制备小于 500 微米的液滴。在胶凝过程中，海藻酸钠液滴在氯化钙溶液中形成球形海藻酸钙胶囊。

然而，如果海藻酸钠的浓度足够高，低浓度的海藻酸钠会导致胶囊呈非球形、球形和 nonoo 形，这在编码过程中存在问题。即使海藻酸钠浓度不够，也可以通过增加钙浓度来形成球形胶囊。然而，大约 50 毫摩尔的氯化钙适合包埋，因为氯化钙浓度过高会降低细胞生长和活力。

包膜细胞可以在胶囊中生长，但细胞泄漏可能发生在没有藻酸盐聚 L 赖氨酸涂层的胶囊中。在小鼠 IPS 细胞的情况下，细胞在每个海藻酸钙胶囊中形成圆盘状聚集体，而细胞聚集在一起并在每个空心胶囊中形成单个球形聚集体。观看此视频后，您应该对如何将细胞封装和培养到大小控制中已有很好的了解。

无需任何特殊设备即可捕获氢气，无需有机吸收剂。