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DOI: 10.3791/52905-v
Rebeccah J. Katzenberger1, Carin A. Loewen2, R. Tayler Bockstruck1, Mikal A. Woods3, Barry Ganetzky2, David A. Wassarman1
1Department of Cell and Regenerative Biology,University of Wisconsin-Madison, 2Department of Genetics,University of Wisconsin-Madison, 3Department of Natural Sciences,University of Puerto Rico-Aguadilla
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
在这里,我们描述了一种方法,在果蝇造成闭合性颅脑创伤性脑损伤(TBI)。此方法提供了一种网关,调查所依据使用的实验工具和技术可用于苍蝇繁多TBI病症的细胞和分子机制。
该手术的总体目标是造成闭合性头部创伤性脑损伤。在苍蝇中。这是通过首先将果蝇放入距离底部 1 英寸的小瓶中来实现的。
第二步是将样品瓶连接到 HIIT 设备。接下来,将弹簧偏转到特定角度,释放小瓶并使其完全静止。最终,可以使用各种行为形态学和分子分析来表征由此产生的创伤性脑损伤的后果。
与现有方法(例如啮齿动物体重下降法)相比,这种方法的主要优点是可以在短时间内研究许多动物。这种方法可以帮助回答创伤性脑损伤领域的关键问题,例如为什么创伤性脑损伤的后果因人而异。首先,组装随附文本协议的表 1 中列出的原材料。
使用钳子弯曲夹子,使它们紧紧地贴合在弹簧上。然后将夹具相对于板的宽度居中,并将它们彼此对接,外部夹具与板的边缘齐平。调整弹簧,使其与电路板的长度平行,然后使用四个螺钉将夹子固定在弹簧上并安装到电路板上。
接下来,缠绕一条 Velcro 胶带。绕过弹簧的自由端后,魔术贴的外边缘应与弹簧的末端齐平。将冰桶盖倒置,居中并紧紧靠在木板上。
确定冰桶盖凸起区域的方向,使长边与冰板的宽度平行。将整个设备靠在固定物体(如墙壁)上滑动,使冰桶盖楔入板和物体之间,不会移动。然后将纸量角器粘在纸板底部,飞出小瓶托盘并将其靠在板的长度上,使 90 度标记与弹簧对齐。
当它被拉回完全垂直的位置时,将 1 到 60 只二氧化碳麻醉的果蝇放入一个空小瓶中,并使用紧密贴合的棉球塞住小瓶。然后在小瓶底部一英寸处画一条线,从小瓶的侧面将果蝇敲下来,然后推入棉球,直到它与新绘制的线匹配。等待 5 分钟,让果蝇从二氧化碳中恢复活动能力。
接下来,将弹簧的末端插入样品瓶中,直到 Velcro 的内边缘与样品瓶的顶部齐平。这通过在弹簧平放的情况下形成一个紧密的压缩接头,将样品瓶固定在弹簧上。此时,确保小瓶的一英寸与冰桶盖的凸起区域重叠。
戴上听力保护装置,因为小瓶撞击冰桶盖会产生很大的噪音。接下来,用左手的拇指和食指用右手握住小瓶的魔术贴区域,将板紧紧地固定在工作台顶部。接下来,将弹簧完全笔直地拉回所需的角度,然后松开弹簧。
等待弹簧完全停止,然后从弹簧中取出小瓶。将样品瓶放在工作台上,让果蝇恢复至少 5 分钟。在此期间,苍蝇会慢慢恢复正常运动。
接下来,将苍蝇转移到装有苍蝇食物的小瓶中以备后用,或者对苍蝇进行另一次打击,小瓶可以多次重复使用。实验的目的是确定损伤严重程度对 24 小时死亡率指数的影响。外伤的严重程度由释放前弹簧从 0 度到 90 度的偏转角度决定。
该实验是在两个不同年龄的果蝇上进行的,即 0 至 7 天龄的果蝇和 20 至 27 天龄的果蝇。结果表明,更严重的伤害会导致更高的死亡率指数。当弹簧偏转为 50 度或更高时,与年轻的果蝇相比,老年果蝇的死亡率更高。
看完这个视频,你应该对如何使用苍蝇造成创伤性脑损伤有一个很好的了解。
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