Name: 颈椎异位心脏移植小鼠 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 48 s
Description: 学习小鼠颈椎心脏移植技术，采用套管法简化血管吻合操作，用于研究缺血再灌注损伤与移植排斥反应机制。该方法避免复杂缝合，提高实验成功率，为心血管与移植生物学研究提供可靠模型。

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M.-A. Deutsch 获得德国心脏研究基金会（Deutsche Stiftung für Herzforschung）和德国胸心与血管外科学会（Deutsche Gesellschaft für Thorax- Herz- und Gefäßchirurgie）鲁斯切研究项目（Dr. Rusche Forschungsprojekt，2014年）的支持。M. Krane 获得德国心脏研究基金会（F/37/11）、德国心血管研究中心（DZHK B 13-050A；DZHK B 14-013SE）以及德国研究基金会（Deutsche Forschungsgemeinschaft，KR3770/7-1；KR3770/9-1）的支持。

所有实验均经德国慕尼黑德国心脏中心及巴伐利亚州政府批准（批准号：Gz. 55.2-1-54-2532.3-17-13）。动物饲养于特定病原体-free设施中，并依照美国国家医学研究协会制定的《实验室动物护理原则》以及国家科学院发布的《实验动物护理与使用指南》（美国国立卫生研究院出版物编号86-23，1985年修订版）接受人道护理。 
注意：该操作需要一套完整的无菌显微外科器械，包括两把弯镊和血管扩张器（图2a）。围手术期抗生素预防通常并非必需，但在免疫功能受损动物中可能需要。动物通过终末期吸入异氟烷实施安乐死。
供体准备与移植物获取
<ol>
	<li>通过腹腔注射咪达唑仑（5.0 mg/kg）、美托咪啶（0.5 mg/kg）和芬太尼（0.05 mg/kg 体重）对动物进行麻醉。将小鼠仰卧位固定于手术区域，并通过足底回缩反射确认手术耐受状态。</li>
	<li>用氯己定对皮肤消毒三次，行腹正中切口。用湿纱布将肠管向左牵开，暴露下腔静脉。</li>
	<li>通过下腔静脉注射50 IU肝素（溶于0.4 ml生理盐水中）以实现抗凝。肝素化1分钟后切开血管。</li>
	<li>切开膈肌，行双侧开胸术以暴露心脏。将前胸壁向上翻转，并用夹子固定。</li>
	<li>切除胸腺，钝性分离主动脉与肺动脉干之间的结缔组织。切开右上腔静脉。</li>
	<li>用安装在5 ml注射器上的30 G针头在头臂干水平穿刺游离的升主动脉，以3 ml 4 °C冷停跳液缓慢逆行灌注心脏，避免压力过高。防止空气进入冠状动脉循环。将冰冻生理盐水滴加至移植心脏表面，进一步加强心脏停搏效果。</li>
	<li>在头臂干起始处近端横断主动脉。</li>
	<li>用8-0丝线紧靠心脏结扎下腔静脉及双侧上腔静脉，并在结扎线远端将其横断。</li>
	<li>尽可能向远端游离肺动脉干。用8-0丝线紧靠分叉处结扎肺动脉，并在结扎线远端将其横断。</li>
	<li>用单根8-0丝线将肺静脉整体结扎后横断。</li>
	<li>取出供体心脏，保存于冰冻停跳液中，直至移植时使用。</li>
</ol>
2. 受体准备
<ol>
	<li>在显微镜下使用11号手术刀&#160;或剪刀&#160;切割聚酰亚胺管，制备用于吻合的套管。该套管由一个圆柱形主体和一段延伸部分（占周长的1/3）组成，用于放置血管夹，每段长度均为1 mm（图2b）。</li>
	<li>对动物进行麻醉，并如上所述确认其手术耐受性。皮下注射（s.c.）0.25 ml温盐水溶液以补充液体。</li>
	<li>使用电动剃须刀去除右侧颈区的毛发，并将动物仰卧位固定于加热垫上。用胶带固定四肢，注意避免过度拉伸前肢，以免影响呼吸。使用眼膏覆盖眼睛，防止角膜干燥。用氯己定对术区消毒三次。</li>
	<li>从右侧下颌角至胸骨上切迹做一横向皮肤切口。</li>
	<li>钝性游离颈外静脉。使用双极镊凝固并切断其侧支。</li>
	<li>在颌下腺静脉汇合处水平，于结扎线之间切断颈外静脉。</li>
	<li>将颈外静脉穿过套管，并通过在套管的延伸部分放置血管夹近端阻断血管。移除结扎线，并用1:10肝素化盐水冲洗血管腔。</li>
	<li>将血管壁外翻覆盖于套管上，并用预置的环形8-0丝线结扎固定。</li>
	<li>切除胸锁乳突肌的浅层部分。</li>
	<li>游离右侧颈总动脉，并在颈动脉分叉下方的结扎线之间横断血管。</li>
	<li>将颈总动脉穿过套管，并通过在套管的延伸部分放置 Yasargil 夹近端阻断血管。移除结扎线，并用1:10肝素化盐水冲洗血管腔。</li>
	<li>使用血管扩张器轻柔扩张动脉腔，将血管壁外翻覆盖于套管上，并用预置的环形8-0丝线结扎固定。</li>
	<li>为获得足够的移植物植入空间，切除右侧颌下腺叶。</li>
	<li>在植入前保持手术区域湿润。</li>
</ol>
3. 移植物植入
<ol>
	<li>将移植物倒置于受体颈部区域，使主动脉朝向内侧，肺动脉朝向外侧。</li>
	<li>将移植物的主动脉套入套管，并覆盖颈动脉，然后用一圈8-0丝线结扎固定吻合口。</li>
	<li>在肺动脉干前侧做切口，将其与颈外静脉一同套入套管。再次用一圈8-0丝线结扎固定吻合口。</li>
	<li>先松开颈外静脉上的血管夹，随后松开颈动脉上的血管夹。心脏立即充盈血液。为促进再灌注，可在移植物表面滴加37 °C温生理盐水。通常心脏在一分钟内恢复窦性心律。移除静脉侧的套管延长部分。</li>
	<li>确认移植物位置正确，吻合口应无张力，血管无扭曲。切勿电灼皮肤血管，以免影响伤口愈合。出血通常可自行停止。用单根8-0连续缝线缝合皮肤。</li>
</ol>
4. 术后护理
<ol>
	<li>皮下注射 0.25 ml 温热的生理盐水溶液以补充液体。</li>
	<li>为拮抗麻醉药物，皮下注射纳洛酮（1.2 mg/kg）、氟马西尼（0.5 mg/kg）和阿替美唑（2.5 mg/kg 体重）。将动物留在加热垫上，直至其恢复足够的意识以维持胸卧位。至少继续观察动物一小时，记录任何异常行为。在动物完全恢复之前，不得将其放回与其他动物同处的环境中。</li>
	<li>术后至少 72 小时内，按照本地机构规程，提供预先镇痛治疗，使用布托啡诺（0.05 mg/kg，皮下注射，每日三次）或其他替代性镇痛方案。</li>
	<li>外科医生和兽医应定期检查动物。若出现体重减轻 &#62;15%、精神萎靡、肿胀或手术部位感染等情况，应采用终末期异氟烷吸入法对动物实施安乐死。</li>
</ol>

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5, 733-735 (1973).</li>
<li>Chen, Z. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+of+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">A technique of cervical heterotopic heart transplantation in mice.</a> Transplantation. 52, 1099-1101 (1991).</li>
<li>Martins, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+graft+function+in+rodent+models+of+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Assessment of graft function in rodent models of heart transplantation.</a> Microsurgery. 28, 565-570 (2008).</li>
<li>Schramm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subepicardial+microcirculation+in+heterotopically+transplanted+mouse+hearts%3A+an+intravital+multifluorescence+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thorac+Cardiovasc+Surg%22%5BJournal%5D)">The subepicardial microcirculation in heterotopically transplanted mouse hearts: an intravital multifluorescence microscopy study.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 134, 210-217 (2007).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp : JoVE. 238, (2007).</li>
<li>Gong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+modified+cervical+cardiac+transplant+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Introduction of modified cervical cardiac transplant model in mice.</a> Exp Clin Transplant. 10, 158-162 (2012).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51, 896-898 (1991).</li>
<li>Chen, H., Zhang, Y., Zheng, D., Praseedom, R. K., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+kidney+transplantation+in+mice%3A+technique+using+cuff+for+renal+vein+anastomosis%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Orthotopic kidney transplantation in mice: technique using cuff for renal vein anastomosis.</a> PloS one. 8, e77278(2013).</li>
<li>Maglione, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+heterotopic+vascularized+pancreas+transplantation+in+mice+to+assess+ischemia+reperfusion+injury+and+graft+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis.</a> Surgery. 141, 682-689 (2007).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2010).</li>
<li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28, 47-50 (1979).</li>
<li>Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+liver+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Orthotopic liver transplantation in rats.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li>
<li>Okazaki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+orthotopic+vascularized+aerated+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">A mouse model of orthotopic vascularized aerated lung transplantation.</a> Am J Transplant. 7, 1672-1679 (2007).</li>
<li>Suzuki, H., Fan, L., Wilkes, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+obliterative+bronchiolitis+in+a+murine+model+of+orthotopic+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Development of obliterative bronchiolitis in a murine model of orthotopic lung transplantation.</a> J Vis Exp : JoVE. , (2012).</li>
<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> Am J Pathol. 153, 1301-1310 (1998).</li>
<li>Zhou, Y., Gu, X., Xiang, J., Qian, S., Chen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+study+on+suture+versus+cuff+anastomosis+in+mouse+cervical+cardiac+transplant%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">A comparative study on suture versus cuff anastomosis in mouse cervical cardiac transplant.</a> Exp Clin Transplant. 8, 245-249 (2010).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J+Heart+Lung+Transplant%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20, 1123-1128 (2001).</li>
<li>Arras, M., Autenried, P., Rettich, A., Spaeni, D., Rulicke, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+intraperitoneal+injection+anesthesia+in+mice%3A+drugs%2C+dosages%2C+adverse+effects%2C+and+anesthesia+depth%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Optimization of intraperitoneal injection anesthesia in mice: drugs, dosages, adverse effects, and anesthesia depth.</a> Comp Med. 51, 443-456 (2001).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突披露。

我们在多种实验条件下已完成超过200例心脏移植，成功率超过90%。采用此处所述的技术，经验丰富的外科医生可在60分钟内完成整个手术过程。通过在器官获取前预先准备颈部血管，移植物的总缺血时间可缩短至20分钟。与缝合技术相比，使用套管技术可显著缩短植入时间（即热缺血时间）16。
与先前所述的直接切除心脏的方法不同5,17，我们通过灌注临床上使用的停跳液&#160;并结合低温来诱导心脏停搏。&#160;晶体 Custodiol HTK 溶液含有 10 mmol/L 钾，以及低浓度的钠、钙和镁，可有效实现心脏停搏。其中添加的组氨酸、色氨酸和α-酮戊二酸可减轻酸中毒，提供 ATP，并在缺血期间保护细胞膜。&#160;该方法模拟了体外循环手术中可控性心脏停搏的临床状态，使此模型成为研究心肌缺血/再灌注（I/R）损伤的理想选择。此外，该模型允许在冷缺血开始时将药物直接加入停跳液中。移植物可在 0–4 °C 下保存，最长保存时间不超过 4 小时。过长的缺血时间可能导致心肌收缩功能减退，并引发右心腔过度扩张及出血等并发症。
<p class="jo...

心脏移植模型常用于研究缺血-再灌注损伤、同种异体移植物排斥反应、移植后血管病变以及免疫调节剂的效果。小鼠模型具有多种优势，如已知的免疫学和遗传背景、大量可用的近交系和转基因品系，以及相对较低的实验成本。
1973年，Corry 等1首次描述了小鼠腹部心脏移植技术。在此模型中，移植物通过将供体升主动脉与受体腹主动脉进行端侧吻合，以及将主肺动脉与下腔静脉吻合，实现再血管化。1991年，Chen 等2描述了一种小鼠颈部心脏移植的缝合技术。在此模型中，通过将受体颈动脉与移植物升主动脉吻合，建立逆行性冠状动脉灌注。静脉血经冠状窦流入右心房、右心室，并通过肺动脉射入受体颈外静脉（图1）。与腹部移植物植入模型相比，颈部模型侵入性更小，且移植物位置表浅，便于进行后续的各种检查（例如触诊、超声心动图、活体荧光显微镜检查）3,4。
尽管技术有所改进5,6，但由于对小血管进行缝合吻合时存在技术困难，导致吻合口漏和血栓形成的发生率较高，限制了该模型的更广泛应用。1991年，Matsuura et al. 引入了套管技术，即将血管壁外翻至一个合成圆筒上，从而极大地促进了颈段心脏移植模型的建立7。该技术随后被应用于多种实验性移植模型，包括肾脏8、胰腺9、肢体10、肝脏11,12、肺13,14以及血管移植15。与缝合技术相比，采用套管技术所需吻合时间更短，因而热缺血时间也更短，并且血管并发症显著减少16。此外，该技术使缺乏显微外科训练的外科医生也能以较高的成功率完成手术。套管技术的一个缺点是必须结扎颈总动脉，这可能会影响脑部灌注。
在本视频论文中，我们介绍了一种改进且简化的用于小鼠颈部心脏移植的套管技术。

<table><tbody><tr><td>镊子 JFC-7.2</td><td>S&amp;T</td><td>P-00036</td><td>弯曲尖端 0.20 mm</td></tr><tr><td>血管扩张器 D-5a</td><td>S&amp;T</td><td>S-00124</td><td></td></tr><tr><td>外膜剪刀</td><td>S&amp;T</td><td>S-00102</td><td></td></tr><tr><td>血管夹 B-1V</td><td>S&amp;T</td><td>S-00396</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil 夹</td><td>Peter Lazic</td><td>65,097</td><td>长度 3.5 mm</td></tr><tr><td>双极电凝镊</td><td>Micromed</td><td>148-100-011</td><td>尖端 0.25 mm</td></tr><tr><td>聚酰亚胺管</td><td>River Tech Medical</td><td></td><td>19-24 号</td></tr><tr><td>8.0 丝线结扎线</td><td>Catgut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK 溶液</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠异位颈部心脏移植

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

小鼠异位颈部心脏移植是移植学和心血管研究中的重要工具。套管技术通过避免对小血管进行困难的缝合吻合，显著简化了该模型，从而缩短了热缺血时间。与腹部移植植入相比，颈部模型侵入性更小，且植入的移植物便于后续随访检查。吻合操作是将移植物的升主动脉套入套管并与受体的颈总动脉连接，同时将移植物的主肺动脉套入套管并与受体的颈外静脉连接。选择合适的套管尺寸以及充分游离血管，对于成功实现再血管化至关重要。通过使用停跳液灌注移植物以及实施低温保存，可最大限度地减少缺血-再灌注（I/R）损伤。本文提供了简化且改进的套管技术的详细操作步骤，旨在使具备基本显微外科技能的外科医生能够以较高的成功率完成该手术。

我们的团队在经过约20次训练手术后，能够成功完成所述技术操作。最具挑战性的步骤是将颈动脉的血管壁外翻至套管上，因为血管壁容易回弹，多次尝试可能导致血管壁撕裂。经过训练阶段后，平均总手术时间为60 ± 8分钟。其中供体取材约需20分钟，颈部血管准备需25分钟，吻合及皮肤缝合约需15分钟。
为研究心肌缺血/再灌注损伤，我们在多种实验条件下对同基因型C57BL/6小鼠进行了200多次手术操作，手术成功率达92%。早期死亡原因包括吻合操作困难（n = 3）、吻合口漏（n = 2）和心肺功能衰竭（n = 10）。另有1只动物因术后出现神经功能障碍而实施安乐死。在围手术期存活的动物中，移植物存活情况为 &gt;7天时达到95%图4)。许多同系移植受体存活超过3个月。尽管未使用抗生素预防，我们未观察到任何感染性并发症。
在第一组实验中，12只同系型C57BL/6小鼠接受了移植，用于组织病理学检查（图3）。移植物在冰上4 °C条件下保存，经历4小时冷缺血后进行移植。再灌注7天...

套管技术通过避免对小血管进行技术难度较高的缝合吻合，从而缩短并简化了小鼠异位颈部心脏移植模型的建立过程。本视频论文中展示的技术细节应有助于研究人员在其实验室中成功建立该模型。

小鼠异位颈部心脏移植是移植学和心血管研究中的重要工具。套管技术极大地简化了……

本视频介绍了一种用于研究同系小鼠缺血再灌注损伤或异体动物移植物排斥反应的颈部心脏移植实验模型。该操作的第一步是从供体小鼠中获取心脏。移植物置于冰上的停搏液中保存，保存时间最长可达四小时，具体时长取决于实验设计。下一步是准备受体小鼠的右侧颈血管，将分离的颈外静脉和颈动脉的血管壁翻转覆盖在套管上，并用结扎线固定。该手术的最后一步是将移植物植入受体小鼠体内。将移植物的升主动脉套在颈动脉的套管上，肺动脉干则与颈外静脉进行吻合。最终，移除夹子并开始再灌注。通常情况下，心脏在一分钟内恢复窦性心律。与腹部移植相比，颈部心脏移植模型创伤更小，动物恢复更快。此外，通过使用cals进行吻合，可以完全避免小血管的缝合，从而使该模型在技术上更具可行性。先用异氟烷对小鼠进行预麻醉，然后通过腹腔注射麻醉剂实施麻醉，通过检查足底退缩反射确认手术耐受性。随后将小鼠仰卧位固定于手术区域。然后用氯己定对皮肤消毒三次。现在做正中腹部切口，用湿纱布将肠管向左牵开，暴露下腔静脉。随后将50单位肝素溶于0.4毫升生理盐水中，注入下腔静脉，以防止凝血。一分钟后，切开胸腔，打开膈肌，行双侧开胸术以暴露心脏，将前胸壁向上翻起，并用夹子固定。接着，去除胸腺，钝性分离主动脉与肺动脉干之间的结缔组织，切开右上腔静脉。然后使用30号针头在头臂干水平穿刺已游离的降主动脉，缓慢逆行灌注3毫升冰冻心脏停跳液，使心脏逐渐停搏。不要施加过大的压力，不要注入任何空气。为进一步加强心脏停搏，将冰冻生理盐水滴加到移植片上。然后在无名动脉起始处近端横断主动脉，并在靠近心脏的位置结扎下腔静脉和两侧上腔静脉。使用ATO丝线完成结扎后，在结扎线远端横断各血管。接下来，尽可能向远端游离肺动脉干，并在肺动脉分叉处附近结扎肺动脉。用丝线在结扎远端横断这些血管。最后结扎的血管是肺静脉，可用单根丝线将肺静脉一并结扎。随后横断这些静脉，并将心脏从供体中取出。将心脏保存在冰冷的停跳液中，直至显微镜下操作开始时使用。使用剪刀或11号手术刀片切割聚酰胺管，制备用于吻合的套管。在完成与供体相同的受体手术前准备后，皮下注射0.25毫升温盐水溶液以补充液体。接下来，剃除小鼠右侧颈部区域的毛发，将小鼠仰卧位固定于加热垫上，用胶带固定四肢，但不要过度拉伸前肢，以免影响呼吸。随后涂抹眼膏，并使用氯己定溶液对手术区域进行三次消毒。现在开始手术，从右侧下颌角至胸骨上切迹做一横向皮肤切口。然后钝性游离颈外静脉，使用双极电凝镊电凝其侧支并予以切断。在颈外静脉与下颌下腺静脉汇合处，于结扎线之间切断颈外静脉。隔离后，将颈外静脉穿过套管。然后通过在套管的延伸部分放置血管夹，近端阻断血管。现在移除结扎线，并用1至10单位肝素化生理盐水冲洗血管腔。将血管壁翻转覆盖在套管上，完成与套管的连接，并用预先设置的环形丝线结扎固定血管。现在去除胸锁乳突肌的浅层部分。接着，游离右侧颈总动脉。然后在颈动脉分叉下方放置两道结扎线，并在两道结扎线之间横断血管。现在将颈动脉穿过套管，并在套管近端的延长部分放置一个动脉夹。为阻断血管，移除结扎线，并用1至10单位的肝素化生理盐水冲洗血管腔。然后使用血管扩张器轻柔地扩张管腔。与之前相同，完成血管与套管的连接。该操作中最困难的部分是将移植动脉的血管翻转至套管之上，因为血管容易回弹。因此，必须充分游离动脉，以选择合适的套管尺寸，并在翻转前轻柔地扩张血管腔。为准备移植，切除下颌下腺的右叶，并保持手术区域湿润。将移植物倒置于受体颈部区域，使主动脉朝向内侧，肺动脉朝向外侧。然后将移植物的主动脉拉过套管，与颈动脉对齐，并用一圈八号丝线缝合固定吻合口。接下来，在肺动脉干的前表面做切口，并将其连同颈外静脉一起拉至套管上。使用另一根结扎线固定此吻合口。现在先移除颈外静脉上的夹子，然后移除颈动脉上的夹子，心脏应迅速充盈血液，以增强再灌注效果，同时将预热的生理盐水滴加到移植物上。通常心脏会在一分钟内恢复窦性心律。现在，移除静脉端的套管延长段，并检查血管移植物。吻合口必须无张力，血管不应出现任何扭曲。不要烧灼皮肤血管，因为这可能影响伤口愈合。应等待出血自行停止后，用单根连续缝合线关闭皮肤。手术后，皮下注射0.25毫升温盐水。接下来，皮下注射药物混合物以拮抗麻醉类药物的作用。将动物置于保温垫上使其恢复，直至能够维持胸卧位。在判定动物完全恢复之前，应至少观察一小时。小鼠恢复后应单独饲养至少三天。提供镇痛药物至少72小时。同时每天称重，以检查是否出现严重体重下降，并监测动物的一般健康状况。采用所述方案，对同基因型C57BL/6小鼠进行移植以进行组织病理学分析。移植物经苏木精、伊红和猩红红染色。非移植动物组织切片作为对照，与对照组进行比较。长时间缺血。再灌注导致强烈的炎症反应，伴有组织水肿、星号所示的白细胞浸润性充血以及微血管阻塞。严重的红色染色显示由箭头指示的明显间质性胶原沉积。对照组中未观察到此类胶原沉积。该移植模型是心血管和移植研究中的一个重要工具。在开始实验之前，特别有必要对心肌缺血再灌注损伤进行研究。务必确保您能够以可重复的手术结果执行该技术，否则可能会产生显著偏差；吻合过程中的热缺血时间应限制在20分钟以内。

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