Name: 动静脉内瘘失败的新型小鼠模型:在详细介绍手术过程 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 了解动静脉内瘘失败的新型小鼠模型建立方法，该手术技术模拟临床病理生理过程，帮助研究人员探索血管通路并发症机制并开发新治疗策略。

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本研究由荷兰肾脏基金会（KJPB 08.0003）的资助支持。
感谢 Carolien Rothuizen 对本研究的贡献。感谢 Hoang Pham 在病理学检测工作中的协助。

所有实验均经莱顿大学医学中心动物福利委员会批准。
1. 动物准备与麻醉
<ol>
	<li>将小鼠（1-3个月大）置于充满3-4%异氟烷的持续麻醉诱导舱中进行麻醉。</li>
	<li>使用电动剃刀剃除小鼠颈部腹侧及左后肢内侧的毛发，并用胶带粘去残留毛发。</li>
	<li>在双眼上涂抹眼用软膏。</li>
	<li>将动物仰卧位固定在加热毯上，鼻部对准已固定的鼻式通气面罩，并用胶带将头部固定于面罩上。
	<ol>
		<li>使用富氧空气输送异氟烷，氧气流量设定为：空气0.3 L/min，100%氧气0.2 L/min，异氟烷浓度维持在1.5-2.0%。通过夹捏足趾间皮肤评估麻醉深度，并根据需要调整异氟烷浓度。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用胶带将动物四肢固定于设定温度约为37 °C的加热毯上，保持仰卧位。</li>
	<li>在动物侧腹部皮下注射用0.9%氯化钠（NaCl）溶液溶解的丁丙诺啡，剂量为0.1 mg/kg，同时注射0.5 ml&#160;无菌0.9% NaCl溶液。</li>
	<li>在已消毒的手术区域涂抹0.5%氯己定酊。</li>
</ol>
2. 皮肤切口
<ol>
	<li>将动物置于显微镜下，使其头部朝向手术者。</li>
	<li>使用显微剪刀在颈部腹侧正中线处做一条长约1.5 cm的纵向切口。</li>
	<li>用镊子夹住唾液腺，并将右侧唾液腺向头侧移位，直至其部分露出切口外。</li>
</ol>
3. 解剖和准备静脉

<ol>
	<li>沿血管走向，紧贴右侧颈外静脉的背内侧分支，将其从周围血管组织中完全钝性分离。</li>
	<li>在游离的静脉周围放置一个结扎线环（10.0 缝线），打一个单结但不锁紧。</li>
</ol>
4. 去除胸锁乳突肌
<ol>
	<li>使用镊子沿右侧胸锁乳突肌的边缘钝性分离其周围组织。将一对张开的镊子置于游离后的肌肉下方，用6.0缝线在其近端和远端分别结扎。随后使用电灼器切除该肌肉。</li>
</ol>
5. 解剖并准备颈总动脉
<ol>
	<li>使用镊子识别并分离右侧颈总动脉。在动脉周围放置一根6.0规格的缝合线，以辅助操作动脉。</li>
	<li>尽可能在远端和近端应用血管夹。</li>
	<li>使用专用显微剪刀在动脉中部做长约1 mm的纵向切口。</li>
	<li>用肝素溶液［100 IU/ml］冲洗动脉，直至血管内血液完全清除。</li>
	<li>根据需要测量并调整切口长度，使其与血管夹宽度［1.1 mm］相匹配。</li>
</ol>
6. 静脉结扎
<ol>
	<li>在已准备好的静脉近端施加血管夹，并在静脉周围放置缝合线。</li>
	<li>使用夹在缝合线上的止血钳对静脉施加轻柔的尾向牵引，并尽可能远端地用先前放置的10.0缝线结扎静脉。</li>
	<li>用剪刀在结扎处近端稍前方剪断静脉。</li>
	<li>使用血管钳轻轻打开静脉管腔，并用肝素溶液 [100 IU/ml] 冲洗。</li>
</ol>
7. 吻合口的建立 第1部分
<ol>
	<li>使用间断缝合（10.0缝线），在十二点位置打两个方结，将静脉与动脉连接，随后在六点位置缝合一针。确保连接静脉与动脉时，避免其绕自身轴线旋转。旋转动物体位以改善手术视野暴露。</li>
	<li>在静脉周围放置缝线，并使用止血钳施加轻柔的侧向牵引。</li>
	<li>采用相同的间断缝合方式，在吻合口可见的腹侧区域再缝合约3至4针，完成吻合。</li>
</ol>
8. 肝素给药
<ol>
	<li>将加热毯旋转180°，并将显微镜对焦于左上肢。</li>
	<li>通过观察上肢内侧纵向走行并可透过皮肤看到的血管结构，识别股静脉/动脉/神经束。用显微剪刀在股静脉正上方沿纵轴方向做约1 cm的切口。</li>
	<li>仔细分离股静脉周围的血管周围组织，并向股静脉内注射肝素，剂量为0.2 IU/g体重。</li>
</ol>
9. 吻合口的建立 第2部分
<ol>
	<li>返回颈部区域，移除之前放置在静脉周围的缝合线。</li>
	<li>放置一条缝合线（6.0），从颈动脉下方穿过，再经过静脉上方，然后再次从颈动脉下方穿出。（图1L）</li>
	<li>移除静脉血管夹。</li>
	<li>接着，沿颈动脉轴线顺时针方向将尚未完成的动静脉瘘扭转180°，同时扭转两个血管夹，并对缝合线的两端施加向内牵引力。</li>
	<li>以与步骤7.2中所述相同的方式完成吻合。</li>
</ol>
10. 血管钳移除
<ol>
	<li>移除缝合线，并将血管夹逆时针旋转180°。</li>
	<li>先移除远端血管夹，随后移除近端血管夹。</li>
	<li>用血管镊轻轻阻断静脉流出道，以评估吻合口的通畅性。若吻合口通畅，阻断前的静脉段将呈搏动性扩张。使用镊子将右侧唾液腺复位至其原始解剖位置。</li>
</ol>
11. 皮肤缝合与术后护理
<ol>
	<li>使用连续缝合（6.0）缝合大腿部位的皮肤。</li>
	<li>使用连续缝合（6.0）缝合颈部皮肤。</li>
	<li>将动物从加热毯上移开，并皮下注射0.5 ml 0.9%氯化钠溶液。</li>
	<li>将动物置于由加热灯保温的昏暗笼子中，使其完全恢复。若动物未能完全恢复，需确认其是否因手术区域出血而出现血流动力学休克，注意观察颈部肿胀和血液渗漏等迹象。</li>
	<li>在首次注射布托啡诺约6小时后，皮下注射一次缓释型布托啡诺制剂，剂量按制造商推荐量给予，以确保额外72小时的充分镇痛效果。&#160;&#160; &#160;</li>
</ol>
12. 组织采集
<ol>
	<li>通过腹腔注射给予咪达唑仑（5 mg/kg）、美托咪啶（0.5 mg/kg）和芬太尼（0.05 mg/kg）的麻醉混合物，使动物麻醉。</li>
	<li>将动物仰卧位固定，用针穿过其足掌和颊部，插入非加热硅胶垫中。</li>
	<li>使用显微剪刀在颈部瘢痕处做一条长约1.5–2.0 cm的切口。</li>
	<li>解剖动静脉瘘（AVF），并在近端动脉、远端动脉及静脉流出道周围放置缝线（6.0），以便于识别。</li>
	<li>按照方案第10.3节所述方法评估AVF的通畅性。</li>
	<li>使用显微剪刀行正中腹腔切开术，打开腹腔。
	<ol>
		<li>从锁骨中线尾侧开始，用剪刀剪开左右腹侧肋骨笼；使用显微剪刀横断附着于腹侧肋骨笼中部的膈肌，随后用镊子将该部分组织向头侧移位。</li>
		<li>定位下腔静脉，并用显微剪刀将其横断。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将23号针头插入左心室，在约100 mmHg的压力下用PBS灌注，直至血管内液体基本澄清。</li>
	<li>不拔出针头，继续在约100 mmHg的压力下灌注4%甲醛溶液10分钟。</li>
	<li>使用显微剪刀横断动静脉瘘两端的动脉和静脉，将AVF完整切除，并浸入4%甲醛溶液中过夜（O/N）。</li>
</ol>
13. 组织包埋与切片
<ol>
	<li>根据制造商的方案将组织处理成石蜡包埋样品。所采用的方案包括以下步骤：
	<ol>
		<li>在70%乙醇中浸渍1小时，室温。重复2次。</li>
		<li>在96%乙醇中浸渍1小时，室温。重复2次。</li>
		<li>在99.5%乙醇中浸渍1小时，室温。重复1次。</li>
		<li>在99.5%乙醇中浸渍1.5小时，室温。</li>
		<li>在100%二甲苯中浸渍1小时，室温。重复1次。</li>
		<li>在石蜡中浸渍1小时，62 °C。重复2次。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将动静脉瘘（AVF）包埋于石蜡中，使静脉流出道与包埋盒方向垂直。</li>
	<li>使用切片机连续切取12组系列切片，每组包含30张厚度为5 µm的切片。然后从每组系列切片中各取一张，按顺序从第1至第12号位置依次贴于载玻片上，起始位置为最靠近吻合口的区域。</li>
</ol>

<ol><li>Rotmans, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+for+Studying+Pathophysiology+of+Hemodialysis+Access%5BTitle%5D)+AND+%22The+Open+Urology+%26+Nephrology+Journal%22%5BJournal%5D)">Animal Models for Studying Pathophysiology of Hemodialysis Access.</a> The Open Urology & Nephrology Journal. 7, 14-21 (2014).</li>
<li>Kwei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+adaptive+responses+of+the+vascular+wall+during+venous+arterialization+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Pathol%22%5BJournal%5D)">Early adaptive responses of the vascular wall during venous arterialization in mice.</a> Am.J.Pathol. 164 (1), 81-89 (2004).</li>
<li>Castier, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+neointima+lesions+associated+with+arteriovenous+fistulas+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Characterization of neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model.</a> Kidney Int. 70 (2), 315-320 (2006).</li>
<li>Krishnamoorthy, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamic+wall+shear+stress+profiles+influence+the+magnitude+and+pattern+of+stenosis+in+a+pig+AV+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Hemodynamic wall shear stress profiles influence the magnitude and pattern of stenosis in a pig AV fistula.</a> Kidney Int. 74 (11), 1410-1419 (2008).</li>
<li>Ene-Iordache, B., Cattaneo, L., Dubini, G., Remuzzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+anastomosis+angle+on+the+localization+of+disturbed+flow+in+%27side-to-end%27+fistulae+for+haemodialysis+access%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol.+Dial.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Effect of anastomosis angle on the localization of disturbed flow in 'side-to-end' fistulae for haemodialysis access.</a> Nephrol. Dial. Transplant. 28 (4), 997-1005 (2013).</li>
<li>Wong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+remodeling+and+intimal+hyperplasia+in+a+novel+murine+model+of+arteriovenous+fistula+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J.Vasc.Surg%22%5BJournal%5D)">Vascular remodeling and intimal hyperplasia in a novel murine model of arteriovenous fistula failure.</a> J.Vasc.Surg. 59 (1), 192-201 (2014).</li>
<li>Rekhter, M., Nicholls, S., Ferguson, M., Gordon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+proliferation+in+human+arteriovenous+fistulas+used+for+hemodialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb%22%5BJournal%5D)">Cell proliferation in human arteriovenous fistulas used for hemodialysis.</a> Arterioscler. Thromb. 13 (4), 609-617 (1993).</li>
<li>Falk, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintenance+and+salvage+of+arteriovenous+fistulas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Maintenance and salvage of arteriovenous fistulas.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 17 (5), 807-813 (2006).</li>
<li>Tordoir, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospective+evaluation+of+failure+modes+in+autogenous+radiocephalic+wrist+access+for+haemodialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol.+Dial.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Prospective evaluation of failure modes in autogenous radiocephalic wrist access for haemodialysis.</a> Nephrol. Dial. Transplant. 18 (2), 378-383 (2003).</li>
<li>Dixon, B. S., Novak, L., Fangman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodialysis+vascular+access+survival%3A+upper-arm+native+arteriovenous+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Kidney+Dis%22%5BJournal%5D)">Hemodialysis vascular access survival: upper-arm native arteriovenous fistula.</a> Am. J. Kidney Dis. 39 (1), 92-101 (2002).</li>
<li>Yang, B., Shergill, U., Fu, A. A., Knudsen, B., Misra, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mouse+arteriovenous+fistula+model%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">The mouse arteriovenous fistula model.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 20 (7), 946-950 (2009).</li>
<li>Kang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+systemic+hemodynamic+responses+following+the+creation+of+a+murine+arteriovenous+fistula%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regional and systemic hemodynamic responses following the creation of a murine arteriovenous fistula.</a> Am. J. Physiol Renal Physiol. 301 (4), F845-F851 (2011).</li>
<li>Wong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+is+a+key+regulator+of+outward+remodeling+in+arteriovenous+fistulas%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Vasc.+Endovasc.+Surg%22%5BJournal%5D)">Elastin is a key regulator of outward remodeling in arteriovenous fistulas.</a> Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 49 (4), 480-486 (2015).</li>
<li>Kennedy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+renal+failure+cause+an+atherosclerotic+milieu+in+patients+with+end-stage+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Does renal failure cause an atherosclerotic milieu in patients with end-stage renal disease.</a> Am. J. Med. 110 (3), 198-204 (2001).</li>
<li>Cheung, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerotic+cardiovascular+disease+risks+in+chronic+hemodialysis+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Atherosclerotic cardiovascular disease risks in chronic hemodialysis patients.</a> Kidney Int. 58 (1), 353-362 (2000).</li>
<li>Lee, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severe+venous+neointimal+hyperplasia+prior+to+dialysis+access+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol.+Dial.+Transplant%22%5BJournal%5D)">Severe venous neointimal hyperplasia prior to dialysis access surgery.</a> Nephrol. Dial. Transplant. 26 (7), 2264-2270 (2011).</li>
<li>Kokubo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CKD+accelerates+development+of+neointimal+hyperplasia+in+arteriovenous+fistulas%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Soc.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">CKD accelerates development of neointimal hyperplasia in arteriovenous fistulas.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20 (6), 1236-1245 (2009).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。&#160;

动静脉内瘘（AVF）被认为是血液透析治疗中的薄弱环节。遗憾的是，AVF 仍存在较高的失败率8-10。尽管对潜在机制已进行了广泛研究，但其确切的病理生理机制仍不明确。目前文献中已描述了多种用于研究 AVF 失败的小鼠模型2,3,11,12。然而，这些模型均未采用临床上最常用的静脉端与动脉侧吻合的构型。这一点非常重要，因为由此产生的血流动力学特征在血管重塑过程中起着关键作用。此外，部分模型在动脉与静脉连接时使用了合成套管2,11，而此类装置在临床实践中并未应用。
为了提高临床相关性，我们因此建立了一种小鼠模型，在颈外静脉分支与颈总动脉之间采用间断缝合的方式创建单侧静脉端对动脉侧的吻合6。在该模型中观察到关键的组织形态学改变，包括向外重塑和进行性内膜增生，最终导致动静脉瘘功能衰竭。
手术过程中的一个关键环节是麻醉方案。建议使用异氟烷吸入麻醉，因为这是一种安全且简便的方法，可实现长时间的麻醉效果。这一点在训练阶段尤为重要，因为整个手术过程可能长达3...

对于依赖长期血液透析维持生命的肾衰竭患者而言，功能良好的血管通路至关重要。目前，动静脉内瘘（AVF）是血管通路的首选方案。然而，与AVF相关的并发症是接受长期血液透析患者发病的主要原因之一。尽管科学界已付出大量努力，但所有旨在减少AVF通路相关并发症的新型方法均未能显著改善AVF的使用寿命。这一进展令人失望的部分原因在于对血液透析通路失败的潜在病理生理机制尚缺乏充分理解。
为了阐明动静脉通路功能障碍的病理生理机制，建立能够紧密模拟人类病理特征的动物模型至关重要。在这方面，不仅需要考虑动物物种，还应考虑吻合部位、所需的抗凝治疗以及术后随访的持续时间1。尽管大型动物最适合用于开发新治疗策略的干预性研究，但由于存在大量可用的转基因小鼠，小鼠模型在揭示动静脉通路功能障碍潜在分子机制方面具有最大潜力。此外，与使用大型动物相比，使用大量小鼠进行此类研究的成本更低。
首个小鼠动静脉瘘（AVF）失败模型由 Kwei 和 et al.2 于2004年描述。在该模型中，使用血管内导管以端对端方式连接颈总动脉与颈外静脉构建 AVF。尽管该模型可用于研究 AVF 早期的静脉适应性变化，但其端对端的吻合方式以及血管内导管的存在限制了其在模拟人类 AVF 中的有效性。Castier 和 et al.3 随后提出了一种改进的 AVF 模型，将颈总动脉的断端与颈外静脉的侧壁进行吻合。然而，血液透析患者的 AVF 通常是由静脉断端与动脉侧壁吻合而成。AVF 的确切吻合方式是动静脉通路模型的关键特征，因为它决定了血管通路内的血流动力学特征4，而后者是导致内皮功能障碍及继发性内膜增生（IH）的重要因素5。
最近开发了一种新型的小鼠模型，其解剖结构与人类所采用的完全相同6。在该模型中，通过间断缝合将C57BL/6小鼠颈外静脉分支的断端与颈总动脉侧壁吻合，从而建立动静脉瘘（AVF）。在本文中，我们重点介绍该模型的显微外科手术操作，以促进这一小鼠模型的广泛应用，旨在揭示血液透析通路失功的复杂病理生理机制。

<table><tbody><tr><td>解剖显微镜</td><td>Leica</td><td>M80</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Medicon</td><td>07.61.25</td><td></td></tr><tr><td>血管镊</td><td>S&amp;T</td><td>JFL-3D.2</td><td></td></tr><tr><td>血管镊</td><td>S&amp;T</td><td>D-5a.2</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Roboz</td><td>SS/45</td><td></td></tr><tr><td>5 mm 刀头显微剪</td><td>Fine science tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>2 mm 刀头显微剪</td><td>Fine science tools</td><td>15000-03</td><td></td></tr><tr><td>剪刀</td><td>Medicon</td><td>05.12.21</td><td></td></tr><tr><td>血管夹施放器 1</td><td>S&amp;T</td><td>CAF-4</td><td></td></tr><tr><td>血管夹 1</td><td>S&amp;T</td><td>B-1V</td><td></td></tr><tr><td>血管夹施放器 2</td><td>BBraun</td><td>FE572K</td><td></td></tr><tr><td>血管夹 2</td><td>BBraun</td><td>FE740K</td><td></td></tr><tr><td>止血钳</td><td>BBraun</td><td>BH110</td><td></td></tr><tr><td>10.0 缝线</td><td>BBraun</td><td>G1117041</td><td></td></tr><tr><td>6.0 缝线</td><td>BBraun</td><td>768464</td><td></td></tr><tr><td>电凝器</td><td>Fine science tools</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>Medicon</td><td>11.82.18</td><td></td></tr><tr><td>眼用软膏</td><td>Pharmachemie</td><td>41821101</td><td></td></tr><tr><td>0.5% 氯己定酊</td><td>Leiden University Medical Center</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>肝素</td><td>Leo Pharma</td><td>012866-08</td><td></td></tr><tr><td>丁丙诺啡</td><td>RB Pharmaceuticals&amp;nbsp;</td><td>283732</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Pharmachemie</td><td>45,112,110</td><td></td></tr><tr><td>麻醉面罩</td><td>Maastricht university</td><td>custom made</td><td></td></tr><tr><td>咪达唑仑</td><td>Actavis</td><td>AAAC6877</td><td></td></tr><tr><td>右美托咪定</td><td>Orion</td><td>141-267</td><td></td></tr><tr><td>芬太尼</td><td>Bipharma</td><td>15923002</td><td></td></tr><tr><td>持续麻醉诱导室</td><td>Vet-tech solutions</td><td>AN010R</td><td></td></tr></tbody></table>

一种新型的小鼠动静脉瘘衰竭模型：手术步骤详解

A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail

动静脉瘘（AVF）仍然存在较高的失败率，其原因在于血管重塑不足以及内膜增生，而后者的精确病理生理机制尚不明确。为了揭示其病理生理过程，研究人员建立了一种模拟AVF失败的小鼠模型，该模型中吻合口的构型与临床实践中 preferred 的情况相似。该模型通过使用间断缝合法将颈外静脉分支的静脉断端连接至颈总动脉侧壁来构建AVF。在组织学层面，我们观察到静脉流出道出现进行性狭窄性内膜病变，这与人类失败的AVF中所见的病变一致。尽管由于动物体型微小，该手术在技术上具有挑战性，但在经过充分训练后，我们实现了97%的手术成功率。小鼠模型的一个主要优势在于可获得转基因动物。鉴于目前提出的多种可能导致AVF失败的机制，敲除可能参与血管重塑的基因将有助于我们揭示AVF失败复杂的病理生理过程。

吻合完成后（图1），应使用血管钳短暂阻断静脉流出道以评估其通畅性。当吻合口通畅时，阻断部位近端的血管应明显出现搏动性扩张。此外，可通过近红外荧光成像（NIRF）技术进一步确认通畅性，该技术可有效发挥血管造影的作用（图2）。手术操作失败可能导致吻合口闭塞，如（图2）所示。此类失败可能由吻合区域过窄、血管扭曲、肝素剂量不足，或缝合时意外将吻合口前壁与后壁缝合在一起所致。
在组织学水平上，利用该模型可优雅地研究动静脉内瘘（AVF）中的血管重塑过程。AVF中的血管重塑是由于血流量和压力增加所致。在小鼠中，这一反应表现为周长增加（例如，外向性重塑），从而在术后前2周内导致管腔面积增大。此后2周，由于外向性重塑停止且内膜持续增厚，管腔面积逐渐减小。这些进行性狭窄病变的形成导致术后4周时50%的AVF发生闭塞。因此，获取AVF组织的最佳时间点为术后2周，因为在此阶段，仍可对通畅AVF中的血管反应进行充分分析。术后2周对静脉流出道进行免疫染色显示，内膜的细胞成分主要由α-平滑肌肌...

本文介绍了一种结合临床相关吻合构型的动静脉瘘（AVF）失败的小鼠模型。该模型可用于研究其病理生理机制，并测试潜在的治疗干预措施。

动静脉瘘（AVF）仍面临较高的失败率，其主要原因包括血管重塑不足以及内膜增生，由此导致的……

本实验的总体目标是建立一种模拟动静脉瘘失败病理生理过程的活体动物模型。该方法可用于揭示动静脉瘘失败的病理生理机制，并有助于全球研究人员开发新的治疗策略，以预防与血管通路相关的并发症。该技术的主要优势在于，它采用静脉末端与动脉部位的吻合方式，高度接近临床实践中人类所采用的情形。该操作将由我实验室优秀的博士研究生 Chun Yu Wong 演示。使用异氟烷麻醉一只 1 至 3 个月大的小鼠后，剃除其颈部腹侧和左后肢内侧区域的毛发，并用胶带清除散落的毛发。随后，将眼药膏涂抹于双眼，准备一个37摄氏度的加热垫，并配备固定的鼻部通气面罩，用胶带将动物头部固定在适当位置。通过面罩输送1.5%至2%的异氟烷，流速为每分钟0.3升空气，同时输送100%氧气，流速为每分钟0.2升。轻捏脚趾间的皮肤以评估麻醉深度。必要时调整异氟烷的浓度。然后用胶带将小鼠四肢固定在毯子上，使其呈仰卧位。现在，在左侧 flank 皮下注射半毫升 0.9% 氯化钠溶液，其中含有一次剂量的丁丙诺啡。使用 0.5% 氯己定清洁暴露的皮肤以备切口。在解剖显微镜下，沿颈部正中线做一纵向切口，长度约 1.5 厘米，以暴露唾液腺。将右侧唾液腺向头侧移动，直至部分移出切口，以显露右侧颈静脉。接下来，找到该静脉的背内侧分支，通过在血管旁轻轻撑开周围组织，将其从血管周围组织中钝性分离。然后，将一根10/0缝线环绕于分离出的静脉上，并打一个松结。下一个主要步骤是切除胸锁乳突肌。首先使用镊子钝性分离右侧胸锁乳突肌周围组织。然后用两根6/0缝合线结扎该肌肉，并使用电凝器将其切除。接下来，分离并游离颈总动脉。确定后，在其周围放置一根6/0缝线，然后尽可能在血管远端和近端放置血管夹。接着，使用显微剪刀在动脉上做一个一毫米长的纵向切口。切开后，用肝素溶液冲洗动脉以清除血液，然后测量并调整切口长度，使其与血管夹的宽度相匹配。现在将缝线环绕静脉，并在近端夹上血管夹。使用止血钳向尾侧施加轻柔牵引，并利用已放置的10/0缝线尽可能向远端结扎静脉。结扎后，在结扎线近端稍前方剪断静脉，以进入管腔。用血管钳轻轻扩张管腔，将静脉抬起并用肝素冲洗，然后进行吻合。开始吻合时，在12:00位置使用间断的10/0缝线将静脉与动脉连接，并打两个方结，随后在6:00位置缝合一针。确保静脉无扭曲。接下来，在静脉周围放置缝线并施加轻柔的侧向牵引。然后，在吻合口可见的腹侧添加三到四个间断缝合，以完成连接。为了形成通畅的动静脉瘘，缝合过程中防止静脉扭转以及防止缝针穿过血管前壁和后壁至关重要。现在，将加热毯旋转180度，聚焦于左上肢。通过观察上肢内侧沿纵轴走行的血管结构来识别股部血管束，该结构可通过皮肤观察到。沿股静脉纵向做一个约一厘米长的切口，仔细分离股静脉周围的血管周围组织。然后，向股静脉内注射一定剂量的肝素。接着返回颈部区域，移除之前在静脉周围放置的缝合线，随

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动静脉内瘘失败的新型小鼠模型：在详细介绍手术过程

本文介绍了一种优化的显微外科技术，用于构建模拟人类脑动脉分叉部动脉瘤的动脉分叉部动脉瘤模型。将静脉囊缝合至两侧颈总动脉人工创建的真实分叉处。借助改进的显微外科操作技术，以及积极的术后抗凝和镇痛措施，可显著降低动物手术并发症发生率，并实现较高的动脉瘤通畅率。...

兔模型中静脉 pouch 动脉分叉动脉瘤的显微外科技术：技术要点

目标是建立一种简单且可重复的动静脉瘘。该方法不使用缝线或胶粘剂，因此可用于分析的样本所含外来材料最少。...

小鼠主动脉下腔静脉瘘的技术要点

我们描述了一种在成年小鼠中建立可靠的脑静脉高压模型的方法。该模型已在大鼠中得到广泛描述和验证。这一小鼠模型的建立使得能够使用基因修饰动物，从而拓展了该模型的应用范围。...

成年小鼠静脉高压模型：颈总动脉至外颈静脉吻合术

通过下腔静脉（IVC）穿刺主动脉在小鼠体内构建主动脉-下腔静脉瘘后，经同一根针头将含药物的溶液注入下腔静脉，随后进行孵育。与外部给药途径相比，该方法可实现向静脉内皮更有效的药物递送。...

小鼠动静脉瘘血管内皮腔内药物递送

通过穿透小鼠肾下腹主动脉的双层管壁进入下腔静脉，建立主动脉-下腔静脉瘘，随后通过部分结扎下腔静脉在其流出道处形成狭窄。该可重复模型可用于研究中心静脉狭窄。...

利用动静脉瘘合并流出道狭窄建立中心静脉狭窄的小鼠模型

我们介绍一种改良的无接触技术（MNTT），用于构建桡动脉-头静脉动静脉瘘（RC-AVF），该技术可避免静脉和动脉管壁的去血管化，并且不切断桡动脉。...

采用改良无接触技术在前臂建立桡动脉-头静脉动静脉瘘

本方案详细描述了小鼠髂总动静脉瘘创建的手术步骤。我们建立此模型以研究与血液透析通路相关的肢体病理生理学。...

一种用于透析通路相关手功能障碍的小鼠模型

本方案介绍了一种采用改良无接触技术在兔子体内建立动静脉瘘的方法。该技术包括颈总动脉与颈外静脉之间的侧侧吻合，且不分离静脉周围组织，也不切断动脉。...

一种改良的兔动静脉瘘构建技术

本方案介绍了通过建立小鼠腹部动静脉瘘（AVF）来构建和验证出生后右心室容量负荷（VO）模型的方法，该模型可用于研究容量负荷对出生后心脏发育的影响。...

建立与验证新生小鼠右心室容量负荷过重模型

本文介绍了一种用于股动脉吻合的鼠类模型，为研究人员提供了一个有价值的动物模型，可用于研究和模拟血管吻合口狭窄。该模型的建立对于深入理解该疾病的病理生理机制，以及推动血管疾病更准确、更有效的研究具有重要意义。...

小鼠股动脉吻合性狭窄模型的建立

了解动静脉内瘘失败的新型小鼠模型建立方法，该手术技术模拟临床病理生理过程，帮助研究人员探索血管通路并发症机制并开发新治疗策略。

一种新型的小鼠动静脉瘘衰竭模型：手术步骤详解

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