Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sunil Ratnayake; Kristina Ford; Antony Bacic

doi:10.3791/53748

使用酶法，化学（甲基化）和物理（质谱，核磁共振）技术，植物墙Heteroxylans测序

JoVE Journal
Chemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Chemistry

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

使用酶法，化学（甲基化）和物理（质谱，核磁共振）技术，植物墙Heteroxylans测序

Full Text

8,045 Views

11:49 min

March 24, 2016

DOI: 10.3791/53748-v

Sunil Ratnayake¹, Kristina Ford¹, Antony Bacic¹

¹ARC Centre of Excellence in Plant Cell Walls, School of BioSciences,University of Melbourne

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

该协议描述了用于杂木聚糖还原端（RE）和内部区域糖基序列结构表征的具体技术，方法是在酶促（内多聚糖酶）水解之前用 2 氨基苯甲酰胺标记 RE，然后使用质谱（MS）和核磁共振（NMR）分析所得的寡糖。

总体目标是通过标记水溶性 heravenaxylans 的原始还原端糖残基并用内木聚糖酶处理以生成标记 dolara 糖类混合物来表征杂木聚糖的还原末端和内部区域糖基序列。这种方法可以帮助回答糖组学领域中的关键问题，例如寡糖或多糖精细结构的改变，以响应计划的生长发育，以及非生物和生物压力源。该方法的主要优点是它描述了对任何聚糖或多糖的还原 n 序列以及内部再生序列进行测序的综合方法。

在 1 毫升水中制备 1 摩尔的氰基硼氢化钠溶液。然后，通过在 65 摄氏度下加热并将反应混合物的 pH 值调节至 pH 5.5，用 10% 的乙酸将 27.2 毫克 2AB 试剂溶解在氰基硼氢化钠溶液中。在带盖的玻璃管中将 200 微升反应混合物加入 1 毫克水溶性阿拉伯木聚糖中，并使用涡旋混合器混合。

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos