湿化学和肽固定在聚四氟乙烯为改善细胞粘附

该程序的总体目标是为花碳聚合物聚四氟乙烯 （PTFE） 提供基于湿化学的表面处理。这种方法可以帮助回答生物材料领域的关键问题，例如如何提高医用聚合物的生物相容性。这种技术的主要优点是只需要最少的设备，并且与其他方法相比，该方法更普遍适用。

萘系钠溶液的制备需要严格的抗氢条件。将 0.25 克金属钠切成小块以增强溶解。将金属钠加入 1.4 克萘酚和 20 毫升四氢呋喃溶液中，装在一个带螺旋盖的 100 毫升玻璃瓶中，该玻璃瓶配有 PTFE 涂层磁力搅拌棒。

适度加热溶液以进一步增强溶解。最终溶液呈深色、略带绿色，可在严格干燥的条件下储存。从 0.5 毫米厚的箔材料中冲出直径为 12 毫米的 PTFE 盘。

标记一侧，清洁是异丙醇。使用镊子将 PTFE 样品在活化溶液中单独孵育 1 至 2 分钟。颜色从白色变为深棕色表示治疗成功。

随后用 THF 冲洗两次，然后用异丙醇冲洗。将处理过的样品用含有 20% 三氯乙酸的 30% 过氧化氢氧化 3 小时。用水洗净，晾干。

表面现在具有轻微的褐色外观。用 50% HMDI 的干燥 THF 溶液处理氧化的圆盘 2 小时。然后，用 THF 冲洗并晾干。

最后，将含异氰酸酯的样品在水中水解 2 到 3 小时，然后干燥。将每个标记面朝上的胺化圆盘放入 24 孔板的各个孔中。加入 1.5 毫升环氧化物溶液，确保完全覆盖样品。

孵育 2 小时后，用水洗涤 2 次，用碳酸盐缓冲液洗涤 1 次。在新鲜的 24 孔板的各个孔的底部，加入 50 微升 0.5 毫克/毫升肽和 50 毫摩尔碳酸盐缓冲液，pH 9，含有 0.1% 叠氮化钠。小心地将环氧官能团化的圆盘倒置在肽溶液的液滴上。

确保孔底部和 PTFE 盘之间的空间由于毛细管作用而完全润湿。将板孵育至少三个小时，或在潮湿气氛的湿室中过夜，方法是将湿薄纸放在腔室底部。孵育后，用水洗涤 3 次，并在 50% 异丙醇水中消毒至少 30 分钟。

在细胞接种之前，如文本方案中所述，用无菌磷酸盐缓冲盐水冲洗样品。通过红外光谱监测关键化学反应步骤的结果。萘酰胺钠的初始活化会产生双键，并在较小程度上产生羟基官能团。

指示碳双键的信号在氧化时消失，产生几乎完全带有羟基的表面。由于活化和氧化引起的颜色变化与预期的化学性质一致。共轭双键系统预计会呈褐色，而双键系统的损失会导致变亮。

此外，通过扫描电子显微镜研究了表面形态上活化和氧化的可能结果。几乎没有观察到治疗的有害影响。将内皮细胞粘附肽、精氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸缬氨酸固定在聚合物表面，支持内皮细胞生长。

虽然在未经处理的材料上几乎没有细胞粘附和增殖，但该修饰强烈支持两周内的定植。例如临床应用，在由膨体 PTFE 制成的市售移植物的原始材料上进行相同的修饰，在一周内获得相似的结果。掌握后，这项技术大约需要 12 小时。

应该记住，此程序是特定于 PTFE 的。看完这个视频，你应该对如何表面活化 PTFE 以及如何在后续步骤中固定肽有了很好的了解。按照此程序，其他分子，例如多糖或脐带因子，可以以类似的方式固定。

请记住，使用剧毒和腐蚀性化学品是危险的，必须采取标准的预防措施。