静脉移植模型：一种适用于研究旁路移植物通畅性的模型

本实验的总体目标是研究大鼠静脉移植模型中旁路移植物的通畅性。该方法有助于回答旁路手术领域中的关键问题，例如旁路闭塞过程中潜在的生物学和生理学机制。该技术的主要优势在于手术操作简便且快速，可用于在活体中研究新型治疗方法和作用通路。

本技术操作将由本实验室的显微外科医生 Grigol Tediashvili 演示。手术前，通过轻捏大鼠后肢足部检查麻醉深度是否足够，并确认无反射反应。随后，向眼睛涂抹适量兽用眼膏，以防止麻醉期间角膜干燥。

接着，分开后肢并用胶带固定其位置。然后使用理发器剃除腹股沟部位的毛发，再用聚维酮碘广泛消毒该区域，随后使用80%酒精进行消毒。上述交替擦洗步骤共重复三次。

现在在显微镜下，沿腹股沟线进行纵向切口。接着，使用两把镊子轻轻分离皮下组织，暴露浅表腹壁静脉直至其在股静脉上的起始处。操作时需格外小心，因为该静脉较为脆弱。

接下来，使用两个血管夹夹闭浅表腹壁静脉以阻断血流。然后，切取一段静脉。小心提起分离出的静脉，用显微剪刀剪断血管。

然后，将静脉片段置于无菌纱布上。在此处，小心地将30号针头插入一端，用肝素冲洗静脉。接着，将静脉转入1%利多卡因中，并置于冰上以防止痉挛。

现在，通过将麻醉剂浓度提高至 5% 异氟烷来处死供体大鼠。接下来，为准备吻合，以与供体大鼠相同的方式对受体大鼠进行处理，直至剃毛步骤。给予 5% 异氟烷麻醉 2 至 3 分钟后，沿腹白线切开供体大鼠的腹部，切开膈肌，并取出心脏以终止循环。

继续为受体大鼠进行手术准备。使用毛发修剪器剃除腿部内侧的毛发，并用聚维酮碘和80%乙醇交替擦拭三次对皮肤进行消毒。在继续下一步操作前，再次进行足趾夹捏测试以监测麻醉状态。

现在，从膝关节至腹股沟皱襞处做一正中股部切口。在显微镜下，使用两把镊子将股动脉与其周围组织分离。随后使用两个微型夹子阻断血流，先放置近端夹子。

接下来，剪除一段被夹闭的股动脉并弃去。将剩余的动脉残端修短，使其形成一个比静脉移植物长1至2毫米的间隙。然后，用30号针头中的肝素冲洗动脉残端。

如果外膜略微超出血管残端，可用镊子将外膜轻轻拉过血管末端，然后切除一小段外膜。现在，将获取的静脉节段以正确方向置于动脉残端之间，并调整间隙大小以确保合适贴合。接下来，首先使用10-0 Prolene缝线进行近端吻合。

首先缝合两侧，然后在腹侧添加三针缝合。最后在背侧完成三针缝合。接着采用相同技术吻合远端血管，先在两侧各缝一针，随后在腹侧缝合三针，最后在背侧完成缝合。

完成吻合后，用两个一毫升注射器分别装入纤维蛋白胶的两种组分。然后，用镊子小心抬起移植物，在其下方先注入约100微升的第一组分，随后注入100微升的第二组分。两种组分必须始终以相同体积添加。

现在，将移植物放回原位，并在移植物上均匀滴加每种成分各 100 µL，完全覆盖移植物及吻合口。这一步骤可防止吻合口功能不全以及静脉移植物过度扩张。随后，小心地依次打开血管钳，先从远端血管钳开始。

然后，通过检查移植静脉及移植物远端动脉是否存在可见搏动，确认手术成功。在关闭皮肤前，清除可能影响缝合的过量胶水。随后，使用5-0 Prolene缝线缝合皮肤各层。

在大鼠苏醒前，皮下注射每千克体重4至5毫克的卡洛芬。密切观察动物，直至其恢复足够的意识以维持胸卧位。然后，将大鼠放回饲养笼，笼内不与其他动物同笼。

接下来三天，在饮水中提供安乃近，并每日检查大鼠的恢复情况。完全恢复后，可将大鼠与其他大鼠同笼饲养。动物术后恢复良好，表现出优异的生理状态。

通过双功能多普勒超声无创性地证实了静脉成功整合入股动脉以及移植后血管移植物的通畅性。通过将卢克阳性（luke-positive）大鼠的静脉移植至卢克阴性（luke-negative）大鼠，利用生物发光成像技术监测移植物的存在情况。研究发现，移植物内的肌性内膜增生随时间推移而逐渐发展。

采用马松三色染色法进行组织学染色，显示内弹力膜内存在肌性内膜增生。为证实该模型可重现肌性内膜增生的动态过程，对管腔闭塞程度进行了测量。术后7天至28天期间，移植物通畅性呈逐渐下降趋势，与该模型高度吻合。

一旦掌握，该技术若操作得当，可在20分钟内完成。感谢观看，祝您的实验顺利成功。