颈动脉肿瘤细胞注射，产生脑转移瘤小鼠模型

这种通过颈动脉显微外科注射癌细胞的总体目标是在小鼠中产生一致的体内实验脑转移模型。因此，这种方法可以帮助回答脑转移领域的关键问题，例如一种新的疗法是否可能在治疗脑转移方面显示出疗效。因此，该技术的主要优点是它允许产生具有高重现性和低变异性的体内实验性脑转移。

一般来说，刚接触这项技术的人最初会很挣扎，因为需要大量的练习才能保持稳定的手在显微镜下将癌细胞注射到这些小鼠的颈动脉中。通过用补充有 10%FPS 的 DMEM F12 培养基接种癌细胞并在注射前培养一到两天来开始此过程。在外科手术当天，从培养箱中取出细胞，当细胞达到 70% 至 80% 汇合时，用无血清培养基洗涤收获它们。

接下来，将细胞与 0.25% 胰蛋白酶在 37 摄氏度下孵育 1 至 2 分钟。然后，将它们从培养箱中取出，并向细胞中加入 10% 含有 DMEM F12 培养基的 FBS 以淬灭芯片。将细胞以 80 倍 G 离心 3 分钟。

然后，去除培养基并在无血清中洗涤细胞两次，以去除残留血清。接下来，用血细胞计数器计数细胞并将它们重悬于 HBSS 中。然后，将细胞保持在冰上直至注射时。

在此过程中，通过腹膜内注射用氯胺酮/甲苯噻嗪混合物麻醉小鼠。通过捏动物的脚确认完全麻醉并观察没有反应。接下来，通过剃须或使用少量脱毛产品去除颈部毛发。

然后，将鼠标放在玻璃板上并用橡皮筋固定。通过在聚维酮碘中涂抹 70% 的酒精来清洁皮肤。现在，用手术刀在皮肤上切开一个约一厘米长的切口。

然后，用手术钳钝头解剖肌肉，露出下面的颈动脉。用手术钳将颈动脉与邻近的迷走神经分开。之后，放置两根缝合线。

一个远端和棉球的近端，打松散的结。收紧近端结以阻止血液流入注射部位。之后，用缓冲液润湿一个小棉球，并将其放在预定注射部位的颈动脉下方。

然后，如果棉球上的颈动脉似乎被新鲜的红色血液完全加压，则继续进行癌细胞注射。在此步骤中，涡旋并将 100 微升癌细胞吸入注射器中。在解剖显微镜下，将斜面向上的 31 号针头缓慢插入位于棉球顶部的颈动脉管腔中。

将注射器中的细胞缓慢注射到颈动脉中。当缓冲的癌细胞被推入循环时，可以通过附近血管和肌肉组织的颜色变化来观察注射成功。注射完成后，轻轻提起远端结扎以防止反流。

然后，快速收紧远端结以完成注射过程。完成注射后，收紧结扎线并用微型剪刀修剪多余的丝缝合线。将分离的肌肉向后移动以覆盖伤口部位，并用两个钉子闭合皮肤。

为了恢复，将动物转移到加热垫上。然后，通过皮下注射丁丙诺啡作为术后镇痛。一旦它恢复意识并恢复正常行为，就将鼠标放回其栖息地位置。

为动物提供术后几天的凝胶食物。这些图像显示，修饰的 MDA MB231 乳腺癌细胞在体外用松散的 foraise 报告基因标记。从颈动脉注射后 24 小时开始，通过重复体内成像系统成像无创监测脑转移发展。

成像数据的量化表明，颈动脉注射后肿瘤负荷最初下降，随后脑转移呈指数级增长，直到动物更加丰富。那么，如果执行得当，每次鼠标注射都可以在不到 10 分钟的时间内完成这项技术。因此，在执行此程序时，要记住的最重要的一点是，在进行癌细胞注射之前，您必须确保、研究并确保将颈动脉放置在棉球顶部。

遵循此程序，可以执行其他方法，例如治疗来回答其他问题。例如，一种新药是否能有效抑制脑转移，则不知所措。经过开发，这项技术为脑转移领域的研究人员在小鼠体内实验模型中探索基本或转化问题铺平了道路。

那么看完这个视频，你应该对如何将癌细胞注射到小鼠的颈动脉中，产生体内实验性脑转移模型有了很好的了解。