Name: 嗅球的四次免疫染色用于嗅觉感觉轴突分子识别码的可视化 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: 学习免疫组织化学染色技术用于嗅觉发育研究，通过小鼠嗅球切片可视化轴突分选分子的表达模式。该方法可分析轴突导向和突触形成过程，为神经科学研究提供可靠工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本工作得到了三菱基金会、武田科学基金会、日本科学技术振兴机构（JST）PRESTO 项目以及日本学术振兴会（JSPS）科学研究费补助金（编号 16H06144）的支持。

所有实验操作均经东京大学动物实验伦理委员会批准，并遵循东京大学关于实验动物护理和使用的指南。
1. 溶液的配制
<ol>
	<li>配制 0.01 M 磷酸盐缓冲液（PBS）：将一片 PBS 片剂（含 0.14 M NaCl、0.0027 M KCl、0.010 M PO43-，pH 7.4）加入 1 L 蒸馏水中，在室温下搅拌至完全溶解。</li>
	<li>配制 PBS 中的 4% 多聚甲醛（PFA）：将 4 g PFA 加入 100 mL PBS 中。在 60 °C 下搅拌溶液，直至完全溶解。
	<ol>
		<li>PFA 在 PBS 中溶解后，用 1 N 氢氧化钠（NaOH）将溶液 pH 调至 7.4。然后在冰上冷却，并通过滤纸过滤溶液以去除任何颗粒物质。于 4 °C 保存。 
		注意：使用这些试剂时应采取适当防护措施。务必小心操作，在通风橱内佩戴手套、护目镜和实验服。 
		备注：使用新配制的 4% PFA 溶液，配制时间不超过 2 天。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>配制含 0.3% Triton X-100 的 0.01 M PBS（PBST）：将 3 mL Triton X-100 加入 997 mL PBS 中，在室温下搅拌至完全溶解。</li>
	<li>配制 1% 和 5% 封闭液：将 10 g 脱脂奶粉加入 200 mL PBST 中，配制成 5% 封闭液。在室温下搅拌至完全溶解。用 PBST 将 5% 封闭液稀释 5 倍，得到 1% 封闭液。</li>
</ol>
2. 水平切面嗅球切片的制备
<ol>
	<li>使用 1 至 2 周龄的动物。该年龄段适用于以下实验，因为此时嗅球小球结构清晰可见，且脑组织可连同颅骨进行切片。</li>
	<li>通过腹腔注射戊巴比妥（50 mg/kg 体重）对动物进行麻醉。用冰预冷的含 4% 多聚甲醛（PFA）的 PBS 溶液经心脏灌注动物。操作时需小心谨慎，在通风橱内佩戴手套、护目镜和实验服。</li>
	<li>灌注完成后，用剪刀剪下头部并小心去除皮肤。随后将剪刀尖插入上下牙齿之间的空隙，水平剪开以移除下颌骨。使用镊子和剪刀清除多余组织，保留包含嗅球（OB）和嗅上皮（OE）的嗅觉组织。 
	注意：请勿移除围绕嗅球的颅骨部分，以保持垂直排列的内侧小球结构完整。</li>
	<li>将嗅觉组织浸入 PBS 中以去除鼻腔内的空气。垂直切除脑组织后部，将嗅觉组织切面朝下放置于包埋模具底部。向模具中加入最佳切割温度（O.C.T.）包埋剂，随后将模具浸入液氮中冷冻。
	<ol>
		<li>待组织在包埋剂中完全冻结后，将其置于恒冷切片机中，在 -20 °C 下孵育 1 小时。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用恒冷切片机对嗅球进行连续冠状旁切片（厚度 10 µm），并将切片贴附于 MAS 防脱玻片上收集。贴片后立即用吹风机干燥玻片。</li>
</ol>
3. 第1天：&#160;OB切片的四重免疫染色&#160;
<ol>
	<li>在室温下用 PBS 清洗载玻片 5 分钟。重复 3 次。</li>
	<li>在室温下用 5% 封闭液孵育载玻片 1 小时，以封闭非特异性结合位点。</li>
	<li>在室温下，用 1% 封闭液中的初级抗体混合物（每张载玻片 400 µL）孵育载玻片过夜。使用的初级抗体如下：豚鼠抗 Kirrel2 抗体（1:1000）、山羊抗 Sema7A（Semaphorin-7A）抗体（1:500）、大鼠抗 OL-protocadherin（OLPC）抗体（1:500）和小鼠抗 VGLUT2（vesicular glutamate transporter2）抗体（1:500）。</li>
</ol>
4. 第2天：&#160;OB切片的四重免疫染色&#160;
<ol>
	<li>弃去一抗溶液，用 PBST 在室温下洗涤载玻片 5 分钟。重复 3 次。</li>
	<li>在室温下用二抗混合液（每张载玻片 400 µL）孵育 1 小时。使用的二抗包括：驴抗小鼠 Alexa Fluor 405（1:400）、驴抗山羊 Alexa Fluor 488（1:400）、驴抗豚鼠 Alexa Fluor 555（1:400）和驴抗大鼠 Alexa Fluor 647（1:400）。 
	注意：所有二抗应来源于同一宿主物种。为确保荧光波长无重叠，每种一抗对应的二抗应选择不同的荧光波长。</li>
	<li>弃去溶液，用 PBS 在室温下洗涤载玻片 5 分钟。重复 3 次。</li>
	<li>用封片剂将盖玻片封固在载玻片上。操作时，在每张载玻片上滴加 2 滴封片剂，然后盖上盖玻片，并去除气泡。</li>
</ol>
5. 强度测量
<ol>
	<li>使用荧光显微镜获取荧光图像。采用以下滤光片组：DAPI滤光片组（360/40 nm激发光，460/50 nm发射光，400 nm二向色镜）用于Alexa Fluor 405信号，GFP滤光片组（470/40 nm激发光，525/50 nm发射光，495 nm二向色镜）用于Alexa Fluor 488，TRITC滤光片组（545/25 nm激发光，605/70 nm发射光，565 nm二向色镜）用于Alexa Fluor 555，Cy5滤光片组（620/60 nm激发光，700/75 nm发射光，600 nm二向色镜）用于Alexa Fluor 647。 
	注意：调整曝光时间，以获得无信号饱和的荧光图像。</li>
	<li>通过VGLUT2的免疫荧光信号界定肾小球结构。使用ImageJ测量肾小球内轴突分选分子的染色强度。</li>
</ol>
6. 数据分析
<ol>
	<li>从轴突分选分子的染色强度中减去背景信号。</li>
	<li>构建表达数据矩阵，其中列表示轴突分选分子，行表示肾小球。</li>
	<li>利用准备好的表达数据集进行主成分分析（PCA），然后获得每个主成分的PCA得分、贡献率和因子载荷。</li>
</ol>

<ol><li>Mori, K., Sakano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+is+the+olfactory+map+formed+and+interpreted+in+the+mammalian+brain%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">How is the olfactory map formed and interpreted in the mammalian brain?</a> Annu Rev Neurosci. 34, 467-499 (2011).</li>
<li>Takeuchi, H., Sakano, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+map+formation+in+the+mouse+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Neural map formation in the mouse olfactory system.</a> Cell Mol Life Sci. 71, 3049-3057 (2014).</li>
<li>Mombaerts, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+an+olfactory+sensory+map%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Visualizing an olfactory sensory map.</a> Cell. 87, 675-686 (1996).</li>
<li>Feinstein, P., Mombaerts, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+contextual+model+for+axonal+sorting+into+glomeruli+in+the+mouse+olfactory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A contextual model for axonal sorting into glomeruli in the mouse olfactory system.</a> Cell. 117, 817-831 (2004).</li>
<li>Ishii, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoallelic+expression+of+the+odourant+receptor+gene+and+axonal+projection+of+olfactory+sensory+neurones%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Cell%22%5BJournal%5D)">Monoallelic expression of the odourant receptor gene and axonal projection of olfactory sensory neurones.</a> Genes Cell. 6, 71-78 (2001).</li>
<li>Nakashima, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agonist-independent+GPCR+activity+regulates+anterior-posterior+targeting+of+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Agonist-independent GPCR activity regulates anterior-posterior targeting of olfactory sensory neurons.</a> Cell. 154, 1314-1325 (2013).</li>
<li>Serizawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+neuronal+identity+code+for+the+odorant+receptor-specific+and+activity-dependent+axon+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A neuronal identity code for the odorant receptor-specific and activity-dependent axon sorting.</a> Cell. 127, 1057-1069 (2006).</li>
<li>Kaneko-Goto, T., Yoshihara, S., Miyazaki, H., Yoshihara, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BIG-2+mediates+olfactory+axon+convergence+to+target+glomeruli%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">BIG-2 mediates olfactory axon convergence to target glomeruli.</a> Neuron. 57, 834-846 (2008).</li>
<li>Ihara, N., Nakashima, A., Hoshina, N., Ikegaya, Y., Takeuchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+axon-sorting+molecules+in+mouse+olfactory+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neuro%22%5BJournal%5D)">Differential expression of axon-sorting molecules in mouse olfactory sensory neurons.</a> Eur J Neuro. 44, 1998-2003 (2016).</li>
<li>Williams, E. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delta+Protocadherin+10+is+Regulated+by+Activity+in+the+Mouse+Main+Olfactory+System%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neural+Circuits%22%5BJournal%5D)">Delta Protocadherin 10 is Regulated by Activity in the Mouse Main Olfactory System.</a> Front Neural Circuits. 5, 9(2011).</li>
<li>Brunet, L. J., Gold, G. H., Ngai, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+anosmia+caused+by+a+targeted+disruption+of+the+mouse+olfactory+cyclic+nucleotide-gated+cation+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">General anosmia caused by a targeted disruption of the mouse olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel.</a> Neuron. 17, 681-693 (1996).</li>
</ol>

作者声明不存在竞争性财务利益。

对嗅球矢状切面进行四重免疫染色，可同时在更多数量的嗅小球中可视化并定量多达四种轴突分选分子的表达水平。通过主成分分析（PCA）对这些多变量数据进行分析，可推测这些分子的表达特征。
为了获得成功的染色效果，组织样本的制备至关重要。一些实验方案建议使用4%多聚甲醛（PFA）对组织进行后固定，并用30%蔗糖进行冷冻保护处理。然而，本方案中省略了这些步骤，因为在许多情况下，这些处理会降低染色信号强度并增加背景信号。此外，在任何操作步骤中均应避免切片干燥，以防止染色过程中出现高背景。
最佳染色条件因所用组织类型和抗体的不同而有所差异。因此，有必要为每个实验确定特定的染色条件。此外，一抗的浓度也至关重要。当浓度过高时，会增加背景信号；而浓度过低时，则会减弱目标信号。因此，确定合适的一抗浓度对于获得高质量的染色结果非常重要。该方法的一个局限性在于，其结果在很大程度上依赖于一抗的质量以及一抗与动物种属的匹配情况。
嗅球的冠状切片已常规用于免疫染色。然而，在本方案中，采用了嗅球内侧的旁矢状...

在发育过程中，神经元会精确地相互连接，形成正确的神经环路，这对大脑的正常功能至关重要。由于大脑中异常的神经环路被认为是自闭症和精神分裂症等精神疾病的原因，因此解析神经环路形成的机制是神经科学领域面临的主要挑战之一。
在小鼠嗅觉系统中，嗅上皮（Olfactory Epithelium, OE）内的每个嗅觉感觉神经元（Olfactory Sensory Neuron, OSN）仅表达一种有功能的嗅觉受体（Olfactory Receptor, OR）基因，而表达相同OR的OSN会将其轴突汇聚至嗅球（Olfactory Bulb, OB）内特定且位置保守的一对小球结构1,2。小鼠嗅觉系统是研究神经环路形成分子机制的理想模型系统，因为研究人员可利用OR的表达来鉴定特定类型的OSN，并将OSN轴突的投射位点以清晰的小球结构进行可视化观察。OSN投射的一个显著特征是，OR在引导OSN轴突投射至OB的过程中发挥指令性作用3,4,5,6。更具体而言，在OSN轴突被引导至大致目标区域后，它们会以依赖于OR的方式分离并形成独立的小球结构。先前的研究表明，OR分子通过调控轴突分选分子的表达来控制小球的分离过程7,8。此外，越来越多的证据表明，OR分子通过轴突分选分子的独特组合生成神经元身份编码9。因此，要理解OR依赖性小球分离的机制，必须明确OSN中轴突分选分子的表达谱型。
荧光免疫染色是可视化特定基因表达的常用方法。由于轴突分选分子的蛋白质主要定位于嗅觉感觉神经元（OSN）的轴突上，研究人员需要利用嗅球（OB）切片来表征这些分子在OSN中的表达模式。冠状切片是免疫染色中常规使用的OB切片方式。然而，这种切片方式在同一OB切片中丢失了沿前后轴的拓扑信息。因此，我们开发了一种OB内侧的旁矢状面切片方法，可在同一OB切片上尽可能多地呈现周围的小球结构。结合多种抗体的免疫染色，该切片方法能够在无嗅球切片间染色差异的情况下，实现对轴突分选分子表达模式的比较与分析。
此外，本文介绍了一种无需经PFA后固定和蔗糖处理的免疫组织化学染色方法。该方法可使研究人员获得足够高质量的染色数据，用于多变量数据分析。本文提供的方案将为研究嗅觉神经环路形成的科研人员提供一系列强大方法的详细操作步骤。

<table><tbody><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）片剂，pH 7.4</td><td>TAKARA BIO</td><td>T9181</td><td></td></tr><tr><td>脱脂奶粉</td><td>nacalai tesque</td><td>31149-75</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗 Sema7A 抗体</td><td>R&amp;D Systems</td><td>AF2068</td><td></td></tr><tr><td>大鼠抗 OLPC 抗体</td><td>Merck Millipore</td><td>MABT20</td><td></td></tr><tr><td>小鼠抗 VGLUT2 抗体</td><td>Merck Millipore</td><td>MAB5504</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗 BIG-2 抗体</td><td>R&amp;D Systems</td><td>AF2205</td><td></td></tr><tr><td>豚鼠抗 Kirrel2 抗体</td><td>Operon Biotechnologies</td><td></td><td>Anti-Kirrel2 抗体通过用 KLH 偶联的合成肽（644-673aa）：CRLYRARAGYLTTPHPRAFTSYMKPTSFGP 免疫豚鼠制备</td></tr><tr><td>驴抗小鼠 Alexa Fluor 405</td><td>Abcam</td><td>ab175658</td><td></td></tr><tr><td>驴抗山羊 Alexa Fluor 488&amp;nbsp;</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>705-545-003</td><td></td></tr><tr><td>驴抗豚鼠 Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A21432</td><td></td></tr><tr><td>驴抗大鼠 Alexa Fluor 647</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>712-605-153</td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛（PFA）</td><td>Wako</td><td>162-16065</td><td></td></tr><tr><td>MAS 涂层载玻片</td><td>MATSUNAMI</td><td>MAS-01</td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-27</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 弹簧剪</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>解剖剪</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>荧光显微镜</td><td>KEYENCE</td><td>BZ-X700</td><td></td></tr><tr><td>DAPI 滤光片组</td><td>KEYENCE</td><td>OP-87762</td><td></td></tr><tr><td>GFP 滤光片组</td><td>KEYENCE</td><td>OP-87763</td><td></td></tr><tr><td>TRITC 滤光片组</td><td>KEYENCE</td><td>OP-87764</td><td></td></tr><tr><td>Cy5 滤光片组</td><td>KEYENCE</td><td>OP-87766</td><td></td></tr><tr><td>滤纸</td><td>ADVANTEC</td><td>00011185</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. 包埋剂</td><td>Sakura Finetek</td><td>M71484</td><td></td></tr></tbody></table>

用于可视化嗅觉感觉轴突分子身份编码的嗅球四重免疫染色

Quadruple Immunostaining of the Olfactory Bulb for Visualization of Olfactory Sensory Axon Molecular Identity Codes

由于小鼠嗅觉系统具有简单的解剖结构，常被用于研究神经环路形成的机制。嗅觉感觉神经元（Olfactory Sensory Neuron, OSN）是一种双极细胞，具有单一树突和单一无分支的轴突。每个OSN仅表达一种嗅觉受体（Olfactory Receptor, OR）基因，而表达同一种OR的OSN会将其轴突投射至嗅球（Olfactory Bulb, OB）中少数几组位置恒定的嗅小球。OSN投射的一个显著特征是，所表达的OR在轴突投射过程中发挥指导性作用。OR可调控多种轴突导向分子的表达，并在OSN轴突末端产生这些轴突导向分子的组合型分子编码。因此，为了理解OR特异性轴突导向的分子机制，关键在于表征同一嗅小球内OSN轴突末端的这些分子表达谱型。本文旨在介绍在单个OB切片上尽可能收集多个嗅小球的方法，以及使用多种抗体进行免疫染色的技术，从而能够在不同OB切片间无染色差异的前提下，对轴突导向分子的表达模式进行比较与分析。

嗅觉小球图谱由嗅觉感觉神经元轴突的初始全局投向以及随后的小球分离过程共同形成1,2。小球分离过程受轴突排序分子介导的黏附/排斥性轴突相互作用调控，而这些分子的表达水平由所表达的嗅觉受体（OR）分子决定7。参与小球分离的轴突排序分子在嗅球（OB）中以位置无关的马赛克方式表达9。在本研究中，我们选取了以下基因：Kirrel2、Sema7A、OLPC、BIG-2 和 PCDH17。其中部分轴突排序分子以依赖神经元活动的方式表达7,8,10。
<p class="jove_content"...

嗅觉感觉神经元表达多种轴突分选分子，以建立正确的神经环路。本方案描述了一种免疫组织化学染色方法，用于可视化嗅觉感觉神经元轴突末端处轴突分选分子的组合表达。

小鼠嗅觉系统因其结构简单，常被用于研究神经环路形成的机制。嗅觉……

该免疫组织化学染色方法的总体目标是可视化嗅觉感觉神经元轴突末端中轴突分选分子的共表达情况。该方法有助于表征嗅觉发育领域中的关键过程，例如轴突导向、突触形成以及嗅觉感觉神经元的再生。该技术的主要优势在于，能够在不因切片间差异而受影响的情况下，使科研人员比较和分析嗅球中轴突分选分子的表达模式。该方法的可视化演示至关重要，因为包埋步骤难以掌握，嗅觉组织样本在模具中的位置和角度很难用文字描述清楚。取经心脏内灌注4%多聚甲醛固定的1至2周龄小鼠头部开始操作。将剪刀刀片插入上下牙齿之间的间隙，水平剪切以去除下颌骨。然后用镊子和剪刀修剪掉多余的组织，保留嗅觉组织，包括嗅球和嗅觉上皮。将嗅觉组织浸入磷酸盐缓冲液（PBS）中以去除鼻腔内的空气，随后进行垂直切割，去除脑组织的后部，并将嗅觉组织切面朝下放置于包埋模具底部。向模具中加入适量的冰冻切片包埋剂（optimal cutting temperature compound），然后浸入液氮中。 组织和OCT完全冷冻后，在-20摄氏度的冷冻切片机中平衡组织1小时。随后使用冷冻切片机对嗅球进行连续冠状切片，并将切片贴附于MAS涂层载玻片上。贴片后立即用吹风机干燥载玻片。开始免疫染色，将干燥的载玻片在室温下用 PBS 洗涤五分钟。在室温下用 5% 封闭液孵育载玻片一小时，以封闭非特异性结合位点。然后向每张载玻片加入 400 µL 用 1% 封闭液稀释的一抗混合液。将切片在室温下孵育过夜。次日，弃去一抗溶液，用PBST在室温下洗涤切片，每次5分钟，共洗三次。随后向每张切片加入400微升二抗混合液与PBS的混合溶液。避光，室温孵育一小时。孵育结束后，弃去溶液，再用 PBS 在室温下洗涤载玻片三次，每次五分钟。最后，向每张载玻片滴加两滴封片剂，盖上盖玻片，去除气泡，完成封片。使用荧光显微镜并针对每种荧光染料选择适当的滤光片获取荧光图像。调整曝光时间，以获得无饱和的荧光信号图像。通过GLUT2的免疫荧光信号界定肾小球结构。使用 Image J 测量嗅小球内轴突分选分子的染色强度。该图像显示了来自两周龄小鼠的副矢状位嗅球切片，经 VGLUT2、Kirrel2（红色）、Semaphorin 7A（绿色）和 OLPC（蓝色）抗体免疫染色。合并图像表明，参与嗅小球分离的轴突分选分子以位置无关的镶嵌模式表达。每个肾小球由突触前标记物VGLUT2的荧光信号界定，肾小球结构周围以虚线标出。在每个肾小球内测量了轴突分选分子的信号强度。如图所示，轴突分选分子在每个嗅小球中呈差异性表达。例如，嗅小球3中OLPC表达水平较高，Semaphorin 7A表达水平中等，Kirrel2表达水平较低，这种差异可通过检测染色强度进行量化。而嗅小球4中OLPC表达水平较高，Kirrel2和Semaphorin 7A表达水平较低。再次，这种差异可通过测量染色强度进行量化。在尝试该操作时，需注意省略通常推荐的PFA后固定及蔗糖溶液处理步骤。观看本视频后，您应能够充分理解如何在单个嗅球切片上放置更多肾小球，以及如何使用多种抗体进行高质量免疫染色，该技术也可应用于其他脑区。不要忘记保持希望，这种方法将帮助您在未来实验中取得成功。

quadruple-immunostaining-olfactory-bulb-for-visualization-olfactory

Research

科研

JoVE Journal

Neuroscience

神经科学

嗅球的四次免疫染色用于嗅觉感觉轴突分子识别码的可视化

我们介绍一种利用慢病毒技术对单个嗅觉感觉神经元轴突及其终末分支进行遗传操作和可视化的方法 体内.

慢病毒介导的嗅觉感觉神经元遗传操作与可视化 体内

本文介绍了固有光学信号和黄素蛋白自体荧光信号成像的技术方案，用于绘制小鼠嗅球表面由气味诱发的神经活动图谱。...

利用光学反射和自发荧光信号成像小鼠嗅球中的气味诱发活动

本文描述了黑腹果蝇（Drosophila）触角的整体免疫染色过程，该方法有助于我们更深入理解嗅觉受体神经元（ORN）多样化所涉及的分子机制。...

完整组织免疫标记嗅觉感受神经元 果蝇 触角

我们描述了一种实验方案 体内...

嗅觉系统作为研究体内轴突生长模式与形态的模型 In Vivo

嗅觉感觉神经元的纤毛中含有信号转导级联相关的蛋白质，但在冷冻切片中对其分布进行精细的空间分析较为困难。本文介绍了一种优化的全装片标记及纤毛蛋白的正面观（en...

小鼠主嗅觉系统中纤毛的全组织染色标记

由于缺乏特异性抗体，将基因表达定位到特定细胞类型可能具有挑战性。本文中，我们描述了一种通过结合双重荧光RNA原位杂交与免疫染色技术，实现基因表达同时三重检测的实验方案。...

双荧光联合检测 原位 小鼠脑切片中三种基因表达检测的杂交与免疫标记联合方法

本文介绍了一种用于测量和分析非洲爪蟾（Xenopus...

通过监测嗅球内钙离子变化记录温度诱导的神经元活动 Xenopus laevis

Xenopus 蝌蚪为在活体条件下研究神经系统功能提供了一个独特的平台。我们描述了在正常饲养条件或损伤后，评估活体 Xenopus...

活体中嗅觉通路的功能评估 非洲爪蟾 蝌蚪

采用多重原位杂交（ISH）技术，同时可视化成年小鼠整个迷走神经节复合体中两种G蛋白偶联受体和一种转录因子的转录本。该方案可用于生成迷走传入神经元转录谱的精确图谱。...

使用多重技术检测小鼠迷走感觉神经元中G蛋白偶联受体的表达 原位 杂交

本方案描述了用于研究嗅觉环路组装的触角-脑离体系统的解剖步骤、培养条件以及活体成像方法。...

一种用于嗅觉环路组装延时成像研究的组织块培养系统 果蝇

学习免疫组织化学染色技术用于嗅觉发育研究，通过小鼠嗅球切片可视化轴突分选分子的表达模式。该方法可分析轴突导向和突触形成过程，为神经科学研究提供可靠工具。

用于可视化嗅觉感觉轴突分子身份编码的嗅球四重免疫染色

探索更多视频