Name: 多肽和蛋白质量化使用自动免疫-MALDI (iMALDI) (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-18T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 学习使用自动化免疫-MALDI技术对复杂生物体液中的多肽和完整蛋白质进行精确定量。该方法通过免疫富集步骤实现低丰度生物标志物的高灵敏度检测，有助于早期疾病诊断和治疗监测。

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我们感谢加拿大基因组计划（Genome Canada）和不列颠哥伦比亚省基因组计划（Genome British Columbia）通过基因组创新网络（Genome Innovations Network, GIN）为本研究的运行（项目编号：204PRO）和技术开发（项目编号：214PRO）提供的资金支持。我们感谢麦吉尔大学健康中心研究所药物发现平台提供MALDI-TOF仪器用于拍摄实验过程。H.L. 感谢加拿大自然科学与工程研究理事会（National Science and Engineering Research Council of Canada, NSERC）提供的博士后奖学金支持。C.H.B. 感谢前沿捐赠基金（Leading Edge Endowment Fund, LEEF）的支持。C.H.B. 感谢麦吉尔大学分子肿瘤学塞格尔讲席（Segal McGill Chair in Molecular Oncology）的支持（加拿大魁北克省蒙特利尔市）。M.X.C. 和 C.H.B. 感谢沃伦·Y·索珀慈善信托基金（Warren Y. Soper Charitable Trust）和阿尔文·塞格尔家族基金会（Alvin Segal Family Foundation）向犹太总医院（加拿大魁北克省蒙特利尔市）提供的资助。

以下试剂的用量基于20份患者血浆样本的检测需求。下述实验方案遵循维多利亚大学人类研究伦理委员会的指导原则。
1. 人血浆中血管紧张素 I 的生成
<ol>
	<li>将血浆样本（≥200 µL）在室温水浴中解冻5分钟，然后置于冰上直至完全解冻。</li>
	<li>手动将每份血浆样本200 µL转移至1.1 mL深孔板（样本板）的不同孔中，并在离心机中以2 °C、1278 × g离心10分钟。</li>
	<li>使用自动化液体处理系统，将500 fmol/µL的Ang I NAT标准溶液用鸡卵白蛋白（CEWA）进行系列稀释，制备六种校准品溶液（浓度分别为0.1、0.2、0.6、1.9、5.7、17.2 fmol/µL）。</li>
	<li>用移液器将每种校准品200 µL加入相应孔中，并向样本板中加入125 µL生成缓冲液。 
	注意：磷酸盐缓冲液（PBS）中的CEWA需在实验当天新鲜配制。</li>
	<li>使用自动化液体处理系统，在新板中将125 µL血浆上清液或125 µL PBS中的CEWA与25 µL Ang I生成缓冲液混合，该生成缓冲液包含1 M Tris、0.2 mM乙二胺四乙酸（EDTA）和1 mM苯甲基磺酰氟（PMSF）。 
	注意：通过将1 M Tris/0.2 mM EDTA水溶液（用乙酸调节pH至5.5）与PMSF溶液（100 mM甲醇溶液）混合配制Ang I生成缓冲液。两种溶液均可在4 °C保存最多1个月。实验当天将两者混合使用。</li>
	<li>自动将上述混合液转移至96孔板中，每种溶液设3个复孔，每孔34 µL。于37 °C孵育3小时。</li>
</ol>
2. 使用抗体包被的磁珠对血管紧张素 I 进行免疫富集
<ol>
	<li>抗体与磁性 Protein G 珠的偶联 
	注意：抗体与磁珠的偶联在实验当天 Ang I 生成的 3 小时期间手动进行。对于其他分析物，偶联后的磁珠可根据抗体的性质和稳定性，在含有 0.015% CHAPS 的 PBS 缓冲液（PBSC）中于 4 °C 保存三个月或更长时间。
	<ol>
		<li>将 110 µL 磁珠悬液（足够用于检测 20 个样品并绘制 6 点标准曲线）转移至 1.5 mL 离心管中。用 1 mL 的 25% 乙腈/PBSC 溶液洗涤磁珠 7 次，再用 1 mL PBSC 洗涤 3 次。每次洗涤后使用磁力架沉淀磁珠。最后一次洗涤后弃去洗涤液。 
		注意：使用 25% 乙腈/PBSC 洗涤 7 次对于去除磁珠悬液中与质谱不兼容的添加剂（如 Tween-20）至关重要。如果所选磁珠不含此类添加剂，则可能无需进行如此频繁的洗涤步骤。</li>
		<li>将磁珠重悬于 110 µL PBSC 中，并加入 110 µL 抗 Ang I 抗体（最终抗体浓度：100 µg/mL）。通过移液混匀磁珠与溶液，然后在室温下孵育 1 小时，同时以 8 rpm 转动。</li>
		<li>用 1 mL PBSC 洗涤磁珠 3 次，然后重悬于 1100 µL PBSC 中。 
		注意：若孵育过程中有任何磁珠溶液流入管盖内，可使用台式离心机在 2680 × g 条件下离心收集。</li>
		<li>手动将磁珠溶液转移至 96 孔板（磁珠标准品板）。使用自动化液体处理系统将磁珠分装至同一块 96 孔板中，每孔 120 µL。&#160;</li>
	</ol>
	</li>
	<li>磁珠上的免疫富集
	<ol>
		<li>在 3 小时 Ang I 生成期结束后，将孵育板置于冰上 10 分钟，以终止 Ang I 的生成。</li>
		<li>通过自动化系统将 SIS 肽储备液（10 pmol/μL）用 PBS 缓冲液稀释 100 倍，并进一步自动分装至 96 孔 PCR 板中。向孵育板的每孔中加入 1.5 µL 稳定同位素标记标准肽溶液（含 100 fmol），并与血浆样品或 PBS 缓冲液中的 CEWA 混合。</li>
		<li>通过自动化系统将孵育板中的内容物转移至磁珠溶液中，每孔 10 mL，混匀。</li>
		<li>将板在 4 °C 孵育 1 小时，同时以 8 rpm 转动。</li>
		<li>通过自动化系统用 5 mM 碳酸氢铵（AmBic）溶液洗涤磁珠 3 次，每次每孔 100 µL。最后一次洗涤后，将每孔磁珠重悬于 7 µL 5 mM AmBic 溶液中。最后一次洗涤后使用磁铁将磁珠吸附至孔底。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 将珠子转移至MALDI靶板并添加基质溶液
<ol>
	<li>使用自动移液装置将 7 µL 磁珠悬液转移至直径为 2,600 µm 的 MALDI 样品靶板上。让磁珠自然干燥。 
	注意：可使用小型 USB 供电风扇加速磁珠干燥过程。</li>
	<li>从基质孔中自动向靶板上的每个样品点加入 2 µL α-氰基-4-羟基肉桂酸（HCCA）基质溶液（含 3 mg/mL HCCA、1.8 mg/mL 柠檬酸铵、70% 乙腈和 0.1% 三氟乙酸）。</li>
</ol>
4. 通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪进行信号采集与数据分析
<ol>
	<li>使用 MALDI-TOF 仪器在正离子反射模式下分析样品点。通过厂商专用软件自动完成内标校准、数据平滑和基线扣除。 
	注意：MALDI-TOF 测量所选模式（正/负离子、线性/反射）取决于目标肽或蛋白质。</li>
	<li>计算相对响应比（Nat/SIS 强度比），并与标准曲线比较，以确定每个样品中 Ang I 的浓度。使用公式 (1) 计算 PRA，其中 ΔtAng I generation 表示 Ang I 生成所用的时间。 
	PRA = [Ang I]/ΔtAng I generation (1)</li>
</ol>

<ol><li>Aebersold, R., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+spectrometry-based+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mass spectrometry-based proteomics.</a> Nature. 422 (6928), 198-207 (2003).</li>
<li>Nicol, G. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+an+Immunoaffinity-Mass+Spectrometry-based+Approach+for+the+Quantification+of+Protein+Biomarkers+from+Serum+Samples+of+Lung+Cancer+Patients%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+%26+Cell.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Use of an Immunoaffinity-Mass Spectrometry-based Approach for the Quantification of Protein Biomarkers from Serum Samples of Lung Cancer Patients.</a> Mol. & Cell. Proteomics. 7 (10), 1974-1982 (2008).</li>
<li>Webster, J., Oxley, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWebster%2C+J+%22Chemical+Genomics+and+Proteomics%3A+Reviews+and+Protocols%22">Chemical Genomics and Proteomics: Reviews and Protocols</a>. Zanders, E. D. , Humana Press. 227-240 (2012).</li>
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<li>Weiß, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Catch+and+measure-mass+spectrometry-based+immunoassays+in+biomarker+research%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta+%28BBA%29+-+Proteins+and+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Catch and measure-mass spectrometry-based immunoassays in biomarker research.</a> Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Proteins and Proteomics. 1844 (5), 927-932 (2014).</li>
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</ol>

C.H.B 持有 iMALDI 技术的专利。

与传统的基于质谱的蛋白质定量方法相比，iMALDI利用抗体富集分析物并从复杂样品中纯化它们，从而实现对低浓度蛋白质或肽段的定量。iMALDI实验方案中的一个关键步骤是目标肽段的免疫富集。为此，应选择具有高特异性和高亲和力的抗体。在SISCAPA方法中，已有报道指出，为在低至ng/mL水平实现高灵敏度，所需抗体的亲和力需达到10-9 M或更高21。此外，为实现最佳富集效果，应优先选用具有高抗体结合容量的磁珠。
此外，获得目标分子的相对&#34;干净&#34;谱图并尽量降低背景信号水平也非常重要。在免疫富集步骤后，通过充分洗涤磁珠可实现较高的信噪比。此外，我们发现，在靶板上加入基质溶液并干燥后，对磁珠点位进行洗涤，可显著降低噪声信号，从而提高信噪比。
本研究中展示的iMALDI PRA检测方法无需蛋白水解步骤，因为目标分子Ang I本身就是一种肽。通常在样品中定量蛋白质分子时，需先将蛋白质消化为肽段再进行免疫富集；但对于含有表位的肽段，也可在捕获蛋白质后再进行消...

质谱技术已成为定量蛋白质组学中不可或缺的工具。质谱能够测定目标蛋白质或肽段的质量，因此与免疫测定相比，所获得的分析物信号具有高度特异性。电喷雾电离和基质辅助激光解吸电离（MALDI）是检测蛋白质和肽段最常用的两种电离方法1,2,3,4。基于质谱的蛋白质定量面临的主要挑战之一，是在高丰度蛋白质存在的情况下，于复杂样品中检测浓度在 ng/mL 或 pg/mL 水平的低丰度蛋白质，而许多在人血浆中发现的候选蛋白质生物标志物正位于这一浓度范围5。这一问题在很大程度上源于人类蛋白质组固有的宽动态范围和高度复杂性6。
为了克服这些检测挑战，已开发出免疫质谱（immuno-MS）方法，通过将目标蛋白质或肽段从样品溶液中富集到固相载体表面，随后洗脱分析物并进行质谱检测7,8,9,10。通过免疫富集，分析物可从复杂样品中被纯化，从而最大限度地减少其他分子引起的离子抑制效应。在各种固相载体中，磁珠目前应用最为广泛，因其具有高抗体结合容量和操作简便等优势。已有多种不同功能化修饰和尺寸的磁珠被开发并实现商业化，用于免疫沉淀实验。迄今为止，磁珠上的免疫富集已与电喷雾电离（ESI）和基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）联用，用于蛋白质和肽段的检测。在稳定同位素标准品与抗肽抗体捕获技术（SISCAPA）中，样品中的蛋白质首先被消化，然后与包被有抗体的磁珠孵育以实现免疫富集。在&#34;经典&#34; SISCAPA 方法中，捕获的代表性肽段从磁珠上洗脱后，通过液相色谱-电喷雾电离质谱（LC-MS）或直接进样电喷雾多反应监测质谱（ESI-MRM-MS）进行检测11,12。免疫富集使 MRM 检测的灵敏度提高了 3 至 4 个数量级，达到低 ng/mL 水平13。
与电喷雾质谱（electrospray-MS）相比，基质辅助激光解吸电离质谱（MALDI-MS）速度更快，且无需清洗和重新平衡液相色谱柱，因此不存在样品残留和污染问题，更适合高通量研究14。我们实验室已开发出免疫-MALDI（immuno-MALDI）技术，将免疫富集与MALDI-MS相结合，用于对肽段和蛋白质进行高灵敏度、高特异性的定量分析（基于特征性肽段的定量）15,16,17。免疫富集后，将磁珠直接点样至MALDI靶板上，加入基质溶液，干燥后即可用于MALDI-TOF-MS分析。肽段无需单独进行洗脱步骤，当加入基质溶液时，与磁珠亲和结合的分析物即被洗脱，从而简化了样品前处理过程，并最大限度减少了样品损失。iMALDI技术已应用于多种检测场景18,19，近期已实现自动化，并用于血管紧张素I（Ang I）的检测，以评估血浆肾素活性（PRA）20。本方案将演示自动化iMALDI检测的操作流程。以PRA检测为例，通过自动化操作可实现日间变异系数（CV）低于10%，每天最多可检测744个样本20。
本论文中展示的iMALDI PRA检测无需蛋白质消化，因为目标分子（Ang I）是一种分子量为1295.7 Da的肽。在其他需要蛋白质消化的检测中，若使用肽作为完整蛋白质的替代物，则iMALDI所选肽段应为靶蛋白特有且专一，其质量应超过800 Da，以便于与MALDI基质溶液产生的化学噪声明确区分。肽段的免疫富集需要使用抗肽抗体。用于检测PRA的iMALDI检测方案包括四个步骤：1）在人血浆中生成Ang I；2）利用抗体包被的磁珠对Ang I进行免疫富集；3）将磁珠转移至MALDI靶板并加入基质溶液；4）通过MALDI-TOF-MS获取信号并进行数据分析20。

<table><tbody><tr><td>健康对照人血浆</td><td>Bioreclamation</td><td>HMPLEDTA2</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢铵</td><td>Sigma Aldrich</td><td>09830</td><td></td></tr><tr><td>二碱式柠檬酸铵</td><td>Sigma Aldrich</td><td>09833</td><td></td></tr><tr><td>CHAPS（&gt;=98%）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C9426</td><td></td></tr><tr><td>鸡蛋清白蛋白（&gt;98%）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5503</td><td></td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>EDS</td><td></td></tr><tr><td>α-氰基-4-羟基肉桂酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70990</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>苯甲基磺酰氟</td><td>Sigma Aldrich</td><td>78830</td><td></td></tr><tr><td>三氟乙酸</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>85172</td><td>LC-MS 级</td></tr><tr><td>乙腈</td><td>Fluka</td><td>34967</td><td>LC-MS 级</td></tr><tr><td>水</td><td>Fluka</td><td>39253</td><td>LC-MS 级</td></tr><tr><td>乙酸</td><td>Fluka</td><td>320099</td><td>LC-MS 级</td></tr><tr><td>三（羟甲基）氨基甲烷</td><td>Roche Diagnostics</td><td>3118169001</td><td></td></tr><tr><td>Dynabeads Protein G 磁珠</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10003D</td><td>2.8 &lt;span class=&quot;font5&quot;&gt;&amp;mu;m, 30 mg/mL&lt;/span&gt;</td></tr><tr><td>抗血管紧张素 I 山羊多克隆抗体</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-7419</td><td></td></tr><tr><td>Nat 和 SIS 血管紧张素 I</td><td>在维多利亚大学-加拿大基因组学中心蛋白质组学中心合成</td><td></td><td></td></tr><tr><td>自动化液体处理系统</td><td>Agilent</td><td>16050-102</td><td>Agilent Bravo 机器人工作站</td></tr><tr><td>磁铁</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12321D</td><td>Invitrogen DynaMag-2 磁铁</td></tr><tr><td>试管旋转仪</td><td>Theromo Scientific</td><td>400110Q</td><td>Labquake 试管旋转仪</td></tr><tr><td>磁铁</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12027</td><td>DynaMag-96 侧裙式磁铁</td></tr><tr><td>磁铁</td><td>VP Scientific</td><td>771RM-1</td><td>用于将磁珠拉至孔底</td></tr><tr><td>MALDI-TOF</td><td>Bruker</td><td></td><td>Bruker Microflex LRF 仪器</td></tr></tbody></table>

使用自动化免疫基质辅助激光解吸电离（imaldi）进行肽和蛋白质定量

Peptide and Protein Quantification Using Automated Immuno-MALDI (iMALDI)

质谱法（MS）是用于定量复杂样品中蛋白质的最常用技术之一，因其可直接检测每个目标分子的质荷比，具有优异的分析特异性。然而，基于质谱的蛋白质组学与其他大多数分析技术类似，倾向于检测高丰度的分析物，因此在复杂样品中实现低 ng/mL 或 pg/mL 检测限仍具挑战性，而许多与疾病相关的蛋白质在人血浆等生物流体中的浓度正位于这一范围。为了辅助低丰度分析物的检测，已将免疫富集技术整合到检测流程中，在质谱测量前对分析物进行浓缩和纯化，从而显著提高检测灵敏度。本文介绍了一种用于定量生物流体中蛋白质和肽段的免疫基质辅助激光解吸/电离（iMALDI）技术，该技术基于磁珠上的免疫富集，随后在无需预先洗脱的情况下进行 MALDI-MS 检测。抗肽抗体被偶联至磁珠表面，并与样品孵育。洗涤后，将磁珠直接转移至 MALDI 目标靶板，在磁珠表面加入基质溶液后，使用 MALDI-飞行时间（MALDI-TOF）仪器进行信号检测。与其它免疫-MS 检测方法相比，该方法简化了样品前处理流程，且 MALDI 检测速度快。整个样品前处理过程通过液体处理系统实现自动化，提高了检测的重复性和通量。本文中，iMALDI 检测用于测定血浆中血管紧张素 I（Ang I）肽段的浓度，该指标在临床上作为血浆肾素活性的读数，用于原发性醛固酮增多症（PA）的筛查。

一种用于测量血管紧张素 I 的自动化 iMALDI 流程如图所示 图1靶向肽段（内源性肽段或蛋白质消化后产生的肽段）在抗肽段磁珠上富集，随后将磁珠转移至目标板进行基质辅助激光解吸电离（MALDI）检测。与需要额外肽段洗脱步骤的其他免疫质谱技术相比，该流程更为简化。iMALDI检测的自动化可实现对大量样本的高通量分析，且日间变异系数（CV）低于10%。 20. 通过检测人血浆样本中的血管紧张素 I 获得的代表性质谱图如图所示 图2SIS 肽段作为肽段定量的内标。采用自动化 iMALDI 检测法获得的 188 份患者样本的 PRA 值与采用临床 LC-MS/MS 方法获得的 PRA 值之间的相关性17 如图所示 图3两种方法的相关系数为0.98；斜率之间的差异可能是由于两种方法使用了不同的内标物，或iMA...

本文介绍了一种利用自动化免疫基质辅助激光解吸电离（iMALDI）技术对复杂生物液体中蛋白质进行定量的实验方案。

使用自动化免疫基质辅助激光解吸电离（iMALDI）进行肽和蛋白质定量

质谱法（MS）是用于在复杂样品中定量蛋白质的最常用技术之一，具有出色的检测特异性……

本自动化免疫-MALDI 检测方法的总体目标是以准确且高灵敏度的方式定量复杂生物流体中的肽段和完整蛋白质。该方法有助于回答定量蛋白质组学领域的关键问题，例如用于诊断或监测患者对治疗反应的蛋白质水平定量。该方法的主要优势在于，能够从复杂的样品中高度敏感且准确地定量蛋白质水平。该技术能够在疾病早期阶段实现诊断，因为检测中的免疫富集步骤可对丰度较低的蛋白质和肽类生物标志物进行定量分析。尽管该方法可用于研究血浆肾素活性，还可应用于其他与疾病相关的研究，例如对癌症相关蛋白进行定量，以用于预后评估、诊断及治疗管理。开始本实验前，将人血浆样本置于室温水浴中解冻五分钟。然后将样品置于冰上，直至完全解冻。接着，手动将每份血浆样品各 200 微升转移至 1.1 毫升深孔板中的不同孔内。在 2 摄氏度、3,000 转/分钟条件下离心 10 分钟。然后，使用 Bravo 将 500 飞摩尔每微升的 Ang-1 NAT 标准溶液用鸡卵白蛋白进行系列稀释，制备六种校准品溶液。离心后，将每种校准品各 200 微升加入孔板中，并向样本板中加入 125 微升生成缓冲液。使用自动化液体处理系统，在新的 1.1 毫升深孔板中，将 125 微升血浆上清液或 125 微升鸡卵白蛋白溶液与 25 微升血管紧张素 I 生成缓冲液混合。现在，将溶液自动转移至96孔板中，每种溶液设三个复孔，每孔加入34微升溶液。然后在37摄氏度孵育3小时。进行抗体与蛋白G磁珠偶联时，首先将78微升预先制备好的磁珠悬液转移至1.5毫升离心管中。使用磁力架在每次洗涤后将珠子沉淀，先用 1 毫升含 25%乙腈的 PBSC 洗涤珠子七次，再用 1 毫升 PBSC 洗涤三次。洗涤完成后，将珠子重悬于 110 微升 PBSC 中，然后加入 110 微升抗血管紧张素 I 抗体。通过移液混匀珠子与溶液。然后，将珠子在室温下孵育一小时，同时以每分钟八转的速度旋转。随后，用一毫升 PBSC 洗涤珠子三次。接着，将珠子重悬于 1,100 微升 PBSC 中。现在，手动将磁珠溶液转移至96孔板中。然后，使用Bravo将磁珠分装至同一96孔板中。在血管紧张素I生成反应3小时结束后，将孵育板置于冰上10分钟，以终止血管紧张素I的生成。使用PBS缓冲液将稳定同位素标准肽储备液自动稀释100倍。此外，将稳定同位素标记的标准肽稀释液自动分装至96孔PCR板中。取10 µL稀释后的肽溶液转移至孵育板的每个孔中。将稀释后的肽溶液与血浆样本或鸡卵清蛋白溶液混合。自动将样本或标准品溶液加入到含有磁珠的孵育板中并混匀。孵育一小时后，自动使用5毫摩尔浓度的碳酸氢铵溶液洗涤磁珠三次。每次洗涤后，使用磁铁将磁珠吸附至管底。最后一次洗涤后，向每个孔中加入 10 微升碳酸氢铵溶液，以重悬磁珠。使用 2,600 微米的点样尺寸，自动将七微升磁珠悬液转移至 MALDI 目标板上。待磁珠完全干燥后，自动将来自基质孔中预先配制的 HCCA 基质溶液两微升，逐个添加至目标板上的各样品位点。随后，使用 MALDI-TOF 仪器在正离子反射模式下分析样品点。利用厂商配套软件进行内标校准、数据平滑和基线扣除。用于检测血管紧张素 I 的自动化 iMALDI 流程可实现大量样本的高通量分析，日内变异系数低于 10%。此处展示了在人血浆样本中检测血管紧张素 I 所获得的代表性质谱图。本图展示了采用自动化iMALDI检测法获得的188例患者样本的PRA值与使用临床LC-MS/MS方法获得的PRA值之间的相关性。两种方法的相关系数为0.98，斜率差异可能源于使用了不同的内标物或不同的抗体。此处还显示了该检测方法的线性范围和精密度。一旦掌握，该技术可在约五小时内完成。进行此操作时，需注意正确调节移液头和液体处理速度。操作完成后，可采用其他方法进一步确认患者的原发性醛固酮增多症，包括口服盐负荷试验或生理盐水输注试验。自动化的iMALDI技术可实现对生物样本（包括患者样本）中与疾病相关的蛋白质或肽类进行特异、准确且高通量的定量筛选。观看本视频后，您应能够充分掌握如何开展基于质谱分析的自动化iMALDI蛋白与肽段定量实验。请注意，操作生物样本（如人源血浆）具有极高危险性，在实验过程中必须始终采取必要的安全防护措施。

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多肽和蛋白质量化使用自动免疫-MALDI (iMALDI)

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定量免疫印迹法检测细胞系作为常规组织样本中生物标志物蛋白定量免疫荧光验证的标准

我们介绍一种从复杂的生物样品中纯化、检测和鉴定来源于泛素化蛋白质的diGly肽的方法。该方法具有良好的重复性和稳健性，在泛素化修饰组分析的深度方面优于已发表的方法。...

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同时富集两种翻译后修饰以实现定量与修饰位点定位

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免疫肽组学：小鼠和人类MHC I类和II类相关肽段的分离及其质谱分析

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“细胞表面捕获”工作流程用于无标记定量分析细胞表面蛋白质组

学习使用自动化免疫-MALDI技术对复杂生物体液中的多肽和完整蛋白质进行精确定量。该方法通过免疫富集步骤实现低丰度生物标志物的高灵敏度检测，有助于早期疾病诊断和治疗监测。

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