Name: 核密度分析的天然染色质沉淀测序文库的生成 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 5 s
Description: 学习天然染色质免疫沉淀测序技术，结合微球菌核酸酶可及性与组蛋白修饰测量，实现单核小体水平的表观基因组特征分析。该方法优化了核小体密度分析流程。

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A.L. 获得加拿大卫生研究院的加拿大研究生奖学金资助。本研究获得了不列颠哥伦比亚基因组学研究所和加拿大卫生研究院（CIHR-120589）的资助&#160;，作为加拿大表观遗传学、环境与健康研究联盟计划的一部分，同时获得M.H. 的特里·福克斯研究研究所项目资助（#TFF-122869）以及特里·福克斯研究研究所授予M.H. 的新研究员奖（资助号 #1039）。

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作者声明不存在任何竞争性经济利益。

鉴于染色质修饰与核小体定位在转录调控中的组合特性，一种能够同时检测这些特征的方法有望为表观遗传调控提供新的见解。本文介绍的ndChIP-seq方案是一种优化的天然ChIP-seq方法，可实现对稀有原代细胞中组蛋白修饰和核小体密度的同时分析9,10。ndChIP-seq利用染色质的酶消化处理，结合双端大规模并行测序及高斯混合分布模型，能够在单个核小体水平上研究组蛋白修饰，并解析由细胞群体异质性驱动的表观基因组谱型。利用该方案，我们先前已报道了一种独特的免疫沉淀片段大小分布，该分布由双端测序读段边界确定，并与ChromHMM定义的特定染色质状态相关10,24。
ndChIP-seq 文库的质量取决于多个因素，例如抗体的特异性和灵敏度、MNase 消化反应的最佳条件以及染色质的质量。所用抗体的特异性对于成功构建 ndChIP-seq 文库至关重要。理想的抗体应对目标表位具有高亲和力，同时与其他表位的交叉反应性极低。同样重要的是，应选择对目标抗体具有最高亲和力的磁珠。
微球菌核酸酶（MNase）消化是本实验方案中一个关键步骤，对时间和酶浓度敏感。因此，在处理多个样本时，必须确保每个反应的孵育时间相等（见步骤2.2）。染色质的质量是显著影响ndChIP-seq结果的另一个重要因素。染色质若已发生断裂，会导致MNase消化图谱不理想，最终构建的文库信噪比偏低。对于细胞活力低或染色质已降解的原始样本（如福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织），不建议采用本实验方案。
在染色质提取过程中加入PIC可减少非特异性（即，随机）的染色质片段化，并保持组蛋白尾部的完整性。因此，PIC需在使用前立即加入裂解缓冲液和免疫沉淀缓冲液中。在通过流式细胞术筛选细胞时，应选择活细胞，并确保以较低流速分选细胞，以提高细胞数量估算的准确性和细胞活性。避免将细胞直接分选到裂解缓冲液中，因为鞘液会稀释裂解缓冲液，从而阻碍MNase对细胞膜的有效通透。根据细胞类型或生物体的不同，可能需要对MNase进行滴定，以获得最佳的消化效果。
哺乳动物细胞的ndChIP-seq实验要求窄峰标记的测序深度至少为5000万条成对读段（2500万个片段），宽峰标记和输入样本则需达到1亿条成对读段（5000万个片段）。若文库的测序深度显著低于此推荐值，高斯混合分布算法将无法实现最佳性能。对于单核小体与双核小体片段长度的加权分布值之间差异较小的启动子，ndChIP-seq无法将其分类为以单核小体或双核小体为主导的启动子，因此这些启动子必须在后续分析中予以剔除。可通过设置生物学重复以提高预测分布的可信度，并识别MNase消化及文库构建过程中的技术变异。
与以往的天然ChIP-seq方案不同，ndChIP-seq通过利用免疫沉淀后的片段大小，将MNase可及性测定的核小体密度与组蛋白修饰检测相结合，从而研究染色质结构和组蛋白修饰的组合效应。将ndChIP-seq应用于原代细胞和组织，将为表观遗传调控的整合特性提供新的见解，并有助于识别因细胞群体异质性所导致的表观遗传特征。

真核生物基因组通过重复的核小体结构被包装成染色质，每个核小体由两份拷贝的四种组蛋白（例如，H2A、H2B、H3 和 H4）以及缠绕在其周围的146个碱基对的DNA组成1,2。染色质重塑复合物可调控基因启动子区域内的核小体位置，并通过改变DNA对转录因子和RNA聚合酶复合物的可接近性，参与基因表达的调控3,4。
核小体中组蛋白的氨基末端尾部会经历多种共价修饰，包括特异性氨基酸的乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、SUMO化、甲酰化和羟基化5,6,7,8。这些修饰的位置和程度决定了染色质的状态，从而影响染色质结构，并调控分子复合物对转录激活区域的可及性7。鉴于核小体密度和组蛋白修饰均在基因转录的局部调控中发挥作用，我们开发了一种天然染色质免疫沉淀（ChIP）方法，可同时检测核小体密度和组蛋白修饰水平9,10。
天然染色质免疫沉淀测序（Native ChIP-seq）利用微球菌核酸酶（MNase）在细胞核内以其天然状态消化完整的染色质11,12，这一特性已被用于绘制核小体定位图谱13,14,15。核小体密度ChIP-seq（ndChIP-seq）则利用MNase优先进入染色质开放区域的特性，生成结合了MNase可及性与组蛋白修饰信息的测量数据10。ndChIP-seq适用于稀有原代细胞、组织以及培养细胞中组蛋白修饰的分析。本文提供了一项详细实验方案，可用于生成适用于先前所描述分析框架的测序数据集10，该框架通过成对末端测序读段边界确定免疫沉淀后DNA片段大小，从而同时研究MNase可及性与组蛋白修饰状态。此前，将该方案应用于10,000个来源于人脐带血的原代CD34+细胞及人胚胎干细胞时，揭示了这些细胞类型中染色质结构与组蛋白修饰之间的独特关系10。由于ndChIP-seq能够同时测量核小体可及性和组蛋白修饰，因此可在单个核小体水平上揭示细胞群体中的表观基因组特征，并将异质性信号解析为其组成成分。ndChIP-seq对细胞异质群体进行探索的一个实例是双价启动子的研究，即在同一启动子区域同时存在H3K4me3（一种激活标记）和H3K27me3（一种抑制标记）的现象10。

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl &amp;ndash;pH 7.5</td><td>Thermo Scientific</td><td>15567-027</td><td></td></tr><tr><td>1M Tris-HCl &amp;ndash;pH 8</td><td>Thermo Scientific</td><td>15568-025</td><td></td></tr><tr><td>0.5M EDTA</td><td>Thermo Scientific</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>5M NaCl</td><td>Sigma</td><td>1001385276</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>1001412354</td><td></td></tr><tr><td>脱氧胆酸钠</td><td>Sigma</td><td>1001437582</td><td></td></tr><tr><td>SDS</td><td>Thermo Scientific</td><td>15525-017</td><td></td></tr><tr><td>碳酸氢钠</td><td>Fisher Scientific</td><td>S233-500</td><td></td></tr><tr><td>100% 乙醇</td><td>NA</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>V型底96孔板（AB 1400）</td><td>Thermo Scientific</td><td>AB-1400-L</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P2 移液器</td><td>Mandel</td><td>F144801</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P10 移液器</td><td>Mandel</td><td>F144802</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P20 移液器</td><td>Mandel</td><td>F123600</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P100 移液器</td><td>Mandel</td><td>F123615</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P200 移液器</td><td>Mandel</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>Gilson P1000 移液器</td><td>Mandel</td><td>F123603</td><td></td></tr><tr><td>微球菌核酸酶&amp;nbsp;</td><td>NEB</td><td>M0247S</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Mixer C（加热块混匀仪）</td><td>Eppendorf</td><td>5382000023</td><td></td></tr><tr><td>多通道12道P20移液器</td><td>Rainin</td><td>17013803</td><td></td></tr><tr><td>多通道12道P200移液器</td><td>Rainin</td><td>17013805</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml 低吸附管</td><td>Eppendorf</td><td>22431021</td><td></td></tr><tr><td>0.5 ml 低吸附管</td><td>Eppendorf</td><td>22431005</td><td></td></tr><tr><td>塑料板盖</td><td>Edge Bio</td><td>48461</td><td></td></tr><tr><td>PCR盖</td><td>Bio Rad</td><td>MSD-1001</td><td></td></tr><tr><td>铝制板盖</td><td>Bio Rad</td><td>MSF-1001</td><td></td></tr><tr><td>洗脱缓冲液（EB缓冲液）</td><td>Qiagen</td><td>19086</td><td></td></tr><tr><td>1M DTT</td><td>Sigma</td><td>646563</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5810R 离心机&amp;nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>22625004</td><td></td></tr><tr><td>超纯水</td><td>Thermo Scientific</td><td>10977-015</td><td></td></tr><tr><td>Protein G 磁珠</td><td>Thermo Scientific</td><td>10001D</td><td></td></tr><tr><td>Protein A 磁珠</td><td>Thermo Scientific</td><td>10001D</td><td></td></tr><tr><td>蛋白酶抑制剂混合物</td><td>Calbiochem</td><td>539134</td><td></td></tr><tr><td>旋转平台</td><td>Mandel</td><td>1b109-12052010</td><td></td></tr><tr><td>板式磁力架</td><td>Alpaqua</td><td>2523</td><td></td></tr><tr><td>圆顶式12联管盖条</td><td>Bio Rad</td><td>TCS1201</td><td></td></tr><tr><td>Buffer G2</td><td>Qiagen</td><td>1014636</td><td></td></tr><tr><td>蛋白酶</td><td>Qiagen</td><td>19155</td><td></td></tr><tr><td>管式磁力架（DynaMag-2）</td><td>Thermo Scientific</td><td>12321D</td><td></td></tr><tr><td>管式磁力架（DynaMag-2）</td><td>LabCore</td><td>730-006</td><td></td></tr><tr><td>V型塑料储液槽</td><td>Mandel</td><td>S0100A</td><td></td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>Mandel</td><td>C1801</td><td></td></tr><tr><td>迷你离心机</td><td>Mettler Toledo</td><td>XS2035</td><td></td></tr><tr><td>分析天平</td><td>Mandel</td><td>LB109-12052010</td><td></td></tr><tr><td>快速连接反应缓冲液，5X</td><td>NEB</td><td>B6058S</td><td></td></tr><tr><td>DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）</td><td>NEB</td><td>M0210S</td><td></td></tr><tr><td>Klenow片段（3'-5'外切酶活性）</td><td>NEB</td><td>M0212S</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA聚合酶</td><td>NEB</td><td>M0203S</td><td></td></tr><tr><td>T4多核苷酸激酶</td><td>NEB</td><td>M0201S</td><td></td></tr><tr><td>脱氧核苷酸溶液混合物，10mM</td><td>NEB</td><td>N0447S</td><td></td></tr><tr><td>dATP溶液，10mM</td><td>NEB</td><td>N0440S</td><td></td></tr><tr><td>Quick T4 DNA连接酶</td><td>NEB</td><td>M0202T</td><td></td></tr><tr><td>腺苷-5'-三磷酸（ATP），25mM</td><td>NEB</td><td>P0756S</td><td></td></tr><tr><td>DNA聚合酶</td><td>Thermo Scientific</td><td>F549L</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 2</td><td>NEB</td><td>B7002S</td><td></td></tr><tr><td>Hank's平衡盐溶液</td><td>Thermo Scientific</td><td>14025076</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>A3160702</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>H3K4me3</td><td>Cell Signaling</td><td>9751S</td><td></td></tr><tr><td>H3K4me1</td><td>Diagenode</td><td>C15410037</td><td></td></tr><tr><td>H3K27me3</td><td>Diagenode</td><td>pAb-069-050</td><td></td></tr><tr><td>H3K36me3</td><td>Abcam</td><td>ab9050</td><td></td></tr><tr><td>H3K9me3</td><td>Diagenode</td><td>C15410056</td><td></td></tr><tr><td>SeraMag&amp;nbsp;超顺磁性磁珠</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

用于核小体密度分析的天然染色质免疫沉淀测序文库的构建

Generation of Native Chromatin Immunoprecipitation Sequencing Libraries for Nucleosome Density Analysis

我们介绍了一种改进的天然染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）实验方案，该方案与基于高斯混合分布的分析方法（核小体密度 ChIP-seq；ndChIP-seq）兼容，能够实现全基因组范围内微球菌核酸酶（MNase）可及性与组蛋白修饰的联合检测。核小体的位置和局部密度，以及其组蛋白亚基的翻译后修饰，共同协作调控局部转录状态。ndChIP-seq 生成的核小体可及性与组蛋白修饰的联合测量数据，可同时解析这些特征。ndChIP-seq 方法适用于数量较少且无法使用交联依赖型 ChIP-seq 协议的原代细胞。综上所述，ndChIP-seq 能够在罕见原代细胞群体中，结合局部核小体密度对组蛋白修饰进行检测，从而深入揭示调控 RNA 转录的共有机制。

我们提出一种改进的天然染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）方法，用于生成适用于核小体密度ChIP-seq分析框架的序列数据集，该框架整合了微球菌核酸酶（MNase）可及性与组蛋白修饰检测。

我们提出一种经改进的适用于高斯混合分布的原位染色质免疫沉淀测序（ChIP-seq）实验方案……

本实验的总体目标是构建天然染色质免疫沉淀测序文库，用于核小体密度分析。该方法可解答表观遗传学领域的诸多问题，例如在单个核小体水平揭示细胞群体中的表观基因组特征，并将异质性染色质信号解析为其连续组分。该技术的主要优势在于利用MNase对开放染色质区域具有优先可及性的特性，从而获得将MNase可及性与组蛋白修饰信息相结合的测量结果。通常，初次使用该方法的研究人员会遇到困难，因为他们无法获得最佳的MNase消化效果。按照文字版实验方案中的描述，从细胞制备开始本实验。在第一天，将每个细胞沉淀物在37摄氏度水浴中解冻10秒。然后将细胞转移至冰上。向每份细胞沉淀中立即加入预冷的1×裂解缓冲液和1×蛋白酶抑制剂混合物（PIC），使终浓度为每20微升含10,000个细胞。通过上下吹打10次混匀，注意避免产生气泡。在冰上操作，将所得裂解液每孔20微升分装至96孔板中。用塑料封膜覆盖孔板，然后在冰上孵育20分钟。将孔板标记为MNase，并在模板记录表中记录各孔位置。在20分钟裂解即将完成前，用MNase稀释缓冲液将MNase酶稀释至终浓度为每微升20单位，并置于冰上保存。在冰上操作，按照文本方案所述配制MNase消化主混合液。然后，向96孔储液板中每排样品各分装20微升主混合液，并额外加入5微升作为补充体积。裂解液完成孵育后，将MNase消化板从冰上取出。使用多通道移液器，向每排样品中加入20微升MNnase一步消化主混合液，通过上下吹打10次混匀。每处理一排样品之间需更换吸头。然后，将酶标板在室温下准确孵育五分钟。五分钟后，为终止反应，使用多通道移液器向每排样品中加入6 µL 250 µmol/L EDTA，并上下吹打数次以混匀。注意每排之间更换吸头。加入EDTA后，将移液器调至20微升，同前法吹打混匀10次，以确保消化反应完全终止。最后，向每行MNase消化样品中加入6微升10X裂解缓冲液，上下吹打10次充分混匀。用塑料封膜封板，置于冰上孵育15分钟。按照文本方案所述，制备抗体-磁珠复合物板和预清除板。将两块板短暂离心，200 × g 离心10秒。然后将抗体-磁珠复合物板置于磁力架上，静置15秒，直至溶液变澄清。使用移液器小心吸除并弃去上清液，注意不要扰动磁珠。然后，将反应板从磁力架上取下并置于冰上。将预清除反应板放在磁力架上，静置15秒，使磁珠完全沉降，溶液变澄清。在不扰动磁珠的前提下，用移液器小心地将上清液转移至置于冰上的抗体-磁珠复合物反应板的对应孔中。用移液器轻轻吹打每个孔，上下吹打15次。用铝制板盖密封孔板，置于4摄氏度旋转平台上过夜孵育。孵育结束后，将孔板重新标记为IP反应板。第二天，将加热振荡仪设置为65摄氏度，然后在冰上配制低盐洗涤缓冲液和高盐洗涤缓冲液。将免疫沉淀反应板在200 × g 条件下瞬时离心10秒。将免疫沉淀反应板置于磁力架上，静置15秒，直至溶液变澄清。使用多通道移液器，小心移除上清液并弃去，注意不要扰动磁珠。将反应板从磁力架上取下，置于冰上。向免疫沉淀反应板的每排样品中加入150 µL预冷的低盐洗涤缓冲液，缓慢上下吹打10次，充分重悬磁珠。将免疫沉淀反应板重新放回磁力架上，静置后小心吸除上清液，操作同前。然后，将反应板放回冰上，重复洗涤步骤，共洗涤两次。在冰上操作，向免疫沉淀反应板的每排样品中加入150 µL高盐洗涤缓冲液。用移液器轻轻吹打样品10次，使磁珠充分重悬。按照前述方法去除上清液后，将免疫沉淀反应板置于冰上，并在其旁边预冷一个新的96孔板。向免疫沉淀反应板中的每行样品加入150 µL高盐洗涤缓冲液，通过上下吹打10次缓慢混匀，以充分重悬磁珠。重悬后，将每行样品转移至新的预冷96孔板中对应的行。 弃去旧的反应板。将新的免疫沉淀反应板置于磁板架上，弃去上清液，操作同前。将反应板置于室温下保存。向IP反应板的每列样品中加入30微升ChIP洗脱缓冲液，通过上下吹打10次缓慢混匀。注意避免气泡产生。用PCR封板膜密封反应板，在65摄氏度下于加热振荡仪中孵育1.5小时，振荡速度为1,350 RPM。孵育1.5小时后，在4°C条件下以200 × g离心1分钟，使免疫沉淀反应板中的样品沉降。随后将免疫沉淀反应板置于磁板架上，静置至溶液澄清。使用多通道移液器，避免触碰磁珠，为每一排更换新的枪头，小心地将20 µL上清液转移至新的96孔板中。标记为 IP 反应的平皿，并在室温下保存。随后按照文本方案中所述进行蛋白质消化及文库构建。此处展示的是在文库构建前，经 MNase 消化的染色质在消化充分、消化不足和消化过度情况下的代表性结果。最佳消化谱以单个核小体片段大小为主，同时避免过度消化，以保留高级核小体结构片段。染色质消化不足也会在免疫沉淀材料构建的测序文库谱型中显现。为通过qPCR验证文库，检测了免疫沉淀文库相对于输入文库在阳性与阴性靶标上的富集倍数。此外，在基因组浏览器中检查经qPCR评估具有高倍数富集的文库的比对读段时，应能直观地观察到相较于输入文库的富集信号。成功的核小体密度ChIP-sequencing文库应包含高度相关的技术重复，且有显著比例的比对读段位于MACS2鉴定的富集峰区域内。若操作得当，掌握该技术后可在两天内完成。观看本视频后，您应能够充分掌握如何构建天然染色质免疫沉淀测序文库以进行核小体密度分析。在实施该实验流程时，需特别注意确保染色质得到最佳消化，并仅使用对目标表位具有高亲和力且对其他表位无或仅有极低交叉反应性的抗体。完成该流程后，可进一步开展MNase可及性的计算建模分析，以探究细胞群体异质性所导致的表观遗传特征等问题。该方法可揭示核小体定位与局部密度的组合效应，以及其组蛋白亚基的翻译后修饰情况，且可应用于任何体系，如人或小鼠、原代细胞及冷冻组织。

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遗传学

核密度分析的天然染色质沉淀测序文库的生成

在本视频中，我们演示了染色质免疫沉淀技术，用于鉴定少突胶质前体细胞基因组DNA特定区域上的蛋白质结合位点 通过...

染色质免疫沉淀法鉴定基因组DNA上靶蛋白结合位点

染色质免疫沉淀与超深度高通量测序（ChIP-seq）相结合，可识别并定位特定组织或细胞系中的蛋白质-DNA 相互作用。本文以转录因子 TCF7L2 为例，概述了如何制备高质量的 ChIP...

高质量染色质免疫沉淀DNA模板的制备用于高通量测序（ChIP-seq）

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ChroP 方法结合染色质免疫沉淀与质谱技术解析染色质位点特异性蛋白质组景观

用于定位的方法 在体 蛋白质-DNA 相互作用对于基因组研究的各个方面正变得至关重要，但这类实验通常耗时、费力且成本高昂。本文介绍了一种市售的自动化液体处理系统，可实现染色质免疫沉淀的自动化操作，用于绘制 体内...

自动化 ChIP-seq 实验以在 10,000 个 HeLa 细胞中生成表观遗传谱型

本文介绍了一种染色质免疫沉淀（ChIP）及ChIP-seq文库构建方案，用于从稀有鸡胚样本中生成全基因组表观基因组谱图。...

低丰度胚胎样本的染色质免疫沉淀（ChIP）实验方案

我们提出了一种有效且可重复的方法，用于从胚胎期和出生后脑组织中分离和培养神经前体细胞，以进行组蛋白3第79位赖氨酸二甲基化（H3K79me2）的染色质免疫沉淀（ChIP）——该组蛋白修饰位于组蛋白3的球状结构域内。...

神经前体细胞的分离与培养及组蛋白3赖氨酸79二甲基化标记的染色质免疫沉淀

本文介绍了一种优化的高通量染色质免疫沉淀测序（ChIP-sequencing）实验方案及相应的计算分析流程，用于从冻存的肿瘤组织和细胞系中确定全基因组范围内的染色质状态模式。...

利用高通量ChIP-测序在肿瘤组织中进行全基因组染色质状态作图的整合平台

本文介绍了一种高效染色质免疫沉淀（ChIP）后接高通量DNA测序（ChIP-seq）的实验方案，适用于从小鼠分离的棕色脂肪组织（BAT）样本。该方案可用于全基因组范围内组蛋白修饰的定位分析，以及非组蛋白目标蛋白的全基因组定位研究。 体内.

小鼠棕色脂肪组织的染色质免疫沉淀

本文介绍了一种半自动化的微量染色质免疫沉淀测序（ChIP-Seq）方案，该方案利用ChIP液体处理平台，针对与特定组蛋白修饰（H3K27ac）相关的DNA区域进行检测，随后采用标签化片段化（tagmentation）方法构建文库。该流程包含对产物质量和数量的质量控制评估步骤，且可适用于其他组蛋白修饰或转录因子的研究。...

一种用于大规模表观遗传学研究的半自动化ChIP-Seq实验流程

蛋白相关新生DNA富集与测序技术（eSPAN）旨在检测染色质相关蛋白在两条复制DNA链上的相对丰度，从而揭示染色质复制及其偶联过程的分子机制。本实验方案描述了在酵母和小鼠胚胎干细胞（ES细胞）中进行eSPAN的操作步骤。...

通过富集和测序蛋白质相关新生DNA方法对复制DNA链上蛋白质进行链特异性分析

我们提出了一种三色染色质单分子定位显微镜（SMLM）染色与分析方案，可实现常染色质、异染色质和RNA聚合酶II（RNAP...

一种用于在致密核环境中研究染色质的多标记单分子定位显微镜实验方案

学习天然染色质免疫沉淀测序技术，结合微球菌核酸酶可及性与组蛋白修饰测量，实现单核小体水平的表观基因组特征分析。该方法优化了核小体密度分析流程。

用于核小体密度分析的天然染色质免疫沉淀测序文库的构建

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