Name: 基于显微 CT 和荧光分子层析成像的多模态成像方法对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的纵向评价 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: 了解利用显微CT和荧光分子层析成像技术对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化进行纵向评估的非侵入性多模态成像方法。该技术可监测解剖结构变化及特定分子事件，为研究特发性肺纤维化疾病进展和评估新疗法提供重要工具。

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作者谨此感谢 Daniela Pompilio 博士和 Roberta Ciccimarra 提供的技术支持。

本文所述所有动物实验均经Chiesi Farmaceutici和ERASMUS MC机构内动物福利委员会批准，批准编号：EMC 3349（138-14-07），符合欧盟指令2010/63/UE、意大利D.Lgs 26/2014及修订版 &#34;实验动物护理和使用的指南&#34;23.
注意：使用前，将雌性近交系 C57Bl/6（7-8 周龄）小鼠在本单位动物饲养室条件下适应至少 7 天（室温：20-24 °C；相对湿度：40-70%；12 小时光照-黑暗循环），可自由摄取标准啮齿类饲料和软化自来水。
1. 博来霉素气管内治疗小鼠
<ol>
	<li>准备气管内滴注所需的设备12,13,14.</li>
	<li>将小鼠放入与异氟烷挥发器相连的麻醉舱内，异氟烷浓度设定为2.5%，以氧气作为混合气体。通过夹捏脚趾无反应判断麻醉深度。麻醉作用在3–5分钟后起效。</li>
	<li>将麻醉后的小鼠置于插管平台上，使其门齿钩住金属丝，呈悬吊状态。</li>
	<li>打开喉镜，取一把钝头镊子，用镊子或喉镜的尖端轻轻张开口腔。</li>
	<li>拉出舌头并用镊子将其固定于一侧。将喉镜片移至口腔后部，直至看到气管开口，并保持喉镜位置不动。</li>
	<li>用另一只手将连接在聚乙烯导管末端的输送管插入气管，同时旋转三通阀。注入50 µL博来霉素（每只小鼠0.020 µg）。灌注后，迅速将导管从气管中拔出，以防窒息。将小鼠保持直立姿势数秒钟。
	<ol>
		<li>第0天和第4天经气管内给予博来霉素图1).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将小鼠从插管平台移开，并监测小鼠30分钟（此为完全从麻醉中恢复所需的时间）。</li>
	<li>执行 体内 在第7、14和21天两次滴注博来霉素后，通过FMT和Micro-CT对小鼠肺部进行成像。</li>
</ol>
2. 体内 荧光分子断层成像
注意：提前在生理盐水（0.9% 氯化钠）中配制新鲜的 MMP 敏感性荧光底物 680 储备液（浓度为 6 nmol/mL），避光保存于 4 °C，使用前取出。该储备液在 4 °C 下可稳定保存长达 6 个月。在注射入动物体内前，需将 MMP 成像试剂平衡至室温。
<ol>
	<li>探针注射
	<ol>
		<li>准备用于静脉注射MMP探针溶液的设备。预先将水加热至50 °C，用于加热小鼠尾巴。</li>
		<li>牢固抓住小鼠颈背部皮肤，一手持尾并让其抓握笼盖。将小鼠固定于肩部位置，将尾巴浸入温水烧杯中，持续4至最多8秒，以造成热损伤但避免尾部皮肤过度烫伤。&#160;观察尾静脉是否膨胀，以便更清晰地识别血管并进行穿刺。</li>
		<li>在注射过程中，将小鼠放入塑料固定器中以保持稳定，并将尾巴从后方的专用孔中拉出。找到位于尾巴两侧的两条尾静脉；注意不要误穿位于尾腹侧的动脉。</li>
		<li>将1 mL注射器上的针头（26G）插入静脉。若针头位置正确，推注应顺畅，探针溶液可顺利进入血管。</li>
		<li>以10 mL/kg剂量注射MMP探针溶液。</li>
		<li>丢弃针头。 
		注意：MMP探针注射后24小时为最佳成像时间点，因为这是探针被激活所需的时间。若进行纵向研究，建议在7天后再次注射，以确保探针试剂已从小鼠体内完全清除。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>FMT成像 
	注意：开始前，务必去除动物待成像区域及其周围的毛发（本实验中为胸部），以避免组织对光的散射和吸收。
	<ol>
		<li>将小鼠放入麻醉舱中，调节异氟烷旋钮至2.5%用于诱导麻醉，维持麻醉时调整为2%。</li>
		<li>启动数据采集软件，并在数据库中为本次实验创建新的研究项目。</li>
		<li>在开始FMT成像前，将小鼠转移至成像盒中。将麻醉后的小鼠置于成像盒中央，以充分利用FMT系统的视场范围。保持小鼠体位平直、固定稳妥，并轻柔地压紧在成像盒的两个窗口之间。通过调节成像盒上的旋钮调整高度，然后将其滑入对接站。</li>
		<li>在扫描界面中点击受试者，然后点击预览以查看实时图像。</li>
		<li>绘制足够大的扫描区域，确保覆盖预期荧光区域周围的组织。总共包含25个扫描点可保证肺部区域被完整扫描。</li>
		<li>绘制完感兴趣区域（ROI）后，先点击添加到重建队列，然后点击扫描以对小鼠进行成像。确保选择正确的680 nm激光。</li>
		<li>图像采集完成后，将小鼠放回笼中，并确保其完全从麻醉状态恢复。</li>
		<li>在分析软件的分析窗口中，使用ROI工具量化皮摩尔级别的荧光信号，围绕来自肺部区域的信号将ROI缩小至约700–800 mm3。注意排除肝脏信号的干扰。将同一ROI复制到其他受试动物图像中，使其尺寸一致，并根据每只动物图像调整其位置。</li>
		<li>将图像导出为jpg格式文件。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 体内 微型计算机断层扫描成像
警告：开始之前，务必移除成像区域附近的任何金属首饰或金属物品，以避免 X 射线散射。
注意：放射性肺纤维化是放射性肺损伤中的常见发现24。在接受生理盐水处理的对照组小鼠中，于第21天进行四次微型CT成像后，未观察到与肺纤维化相关的微型CT衍生指数或组织学改变，表明微型CT检查过程中对动物施加的X射线剂量不足以影响实验结果。
<ol>
	<li>按下绿色的电源按钮启动 Micro-CT，并运行软件以预热 X 射线源。使用小孔径和动物床进行小鼠成像。</li>
	<li>通过点击新建数据库创建新数据库，并根据实验中小鼠的数量建立浏览器；或点击连接到现有数据库，将数据保存至先前创建的数据库中。</li>
	<li>开始扫描前，在软件控制窗口中选择采集参数：X 射线管电压 90 kV；CT X 射线管电流 160 µA；实时 X 射线管电流 80 µA；视场（FOV）36 mm；不使用门控技术；扫描模式选择高分辨率 4 分钟。</li>
	<li>通过吸入 3% 异氟烷对小鼠进行麻醉，并将其放置在插入孔径内的动物床上，鼻罩持续供给麻醉气体。用胶带将小鼠的四肢固定在床面上，以便暴露胸部。</li>
	<li>滑动仪器门并按下采集按钮，开启实时模式以实时观察小鼠位置。使用 CT 仪器上的按钮移动动物床，使胸部与视场（FOV）对齐。以小鼠为中心进行扫描；若未对准，可使用 CT 仪器上的左右箭头调整位置。</li>
	<li>通过选择90°并点击设置，确认最佳床位位置。确保待成像区域完全位于视场（FOV）内。</li>
	<li>不采用任何门控技术，点击CT 扫描按钮开始扫描。当提示 X 射线源将被开启时，点击是。 
	注意：X 射线开启后，仪器顶部的橙色指示灯将亮起，滑动门出于操作者安全考虑将无法打开。扫描完成后，2D Viewer 软件的新窗口将自动弹出，显示重建后的横断面、冠状面和矢状面切片图像。</li>
	<li>检查图像质量，确保未因麻醉深度不足导致动物移动而产生模糊图像。如有必要，重新进行扫描。</li>
	<li>将动物放回笼中，并确保其完全从麻醉中恢复。</li>
</ol>
4. 支气管肺泡灌洗
<ol>
	<li>用3%异氟烷麻醉动物，并通过腹主动脉放血处死。</li>
	<li>使用剪刀暴露胸腔和颈部，然后暴露气管并做一小切口，以便使用连接1 mL无针注射器的21号灌洗管进行支气管肺泡灌洗（BAL）操作。注意不要切断气管。</li>
	<li>进行BAL时，将1 mL无针注射器吸取0.6 mL无菌溶液［10倍浓度的Hank's平衡盐溶液（HBSS）；100 mM乙二胺四乙酸（EDTA）；1 mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸（HEPES）；蒸馏水］。</li>
	<li>将灌洗管插入气管切口，缓慢推注并回抽溶液3次，在第三次回抽时暂停片刻，以充分收集支气管肺泡灌洗液（BALF）用于后续分析。</li>
</ol>
5. 组织学与组织形态计量学
<ol>
	<li>暴露并取出肺组织，通过气管插入套管，缓慢注入0.6 mL 10%中性缓冲甲醛溶液进行肺灌注固定，随后将样本于室温下保存24小时。</li>
	<li>使用自动组织处理机，将样本依次通过浓度递增的酒精溶液进行脱水处理（60%乙醇1小时，70%乙醇1小时，90%乙醇1小时，95%乙醇2小时，100%乙醇2小时）。</li>
	<li>将组织样本置于二甲苯中处理2小时以使其透明；脱水结束后，在60 °C条件下用石蜡浸润3小时，并在自动组织处理机中完成包埋。</li>
	<li>使用旋转式切片机获取厚度为5 µm的连续切片。</li>
	<li>将切片经梯度乙醇脱蜡并水化，随后使用自动组织处理机进行Masson三色染色。</li>
	<li>手动对肺组织切片进行聚焦，利用切片扫描仪在20倍放大倍数下进行扫描，并通过观察软件以451 nm/像素的分辨率采集整张肺组织切片的数字图像。</li>
	<li>通过以下半定量与定量参数对肺纤维化损伤进行形态学评估：
	<ol>
		<li>确定Ashcroft评分。根据Ashcroft10提出并由Hübner et al.25改良的评分标准，对肺组织切片中的形态学改变进行半定量分级。采用0–8分评分系统，评估肺切片中全部肺实质的纤维化程度。</li>
		<li>测定胶原含量。使用显微图像分析软件对纤维化程度10,25进行定量分析。每张切片在10倍放大倍数下随机选取三个感兴趣区域（ROI）。通过标准化颜色阈值设置，识别染成绿色的胶原区域。</li>
		<li>测定肺泡气腔面积。将肺泡气腔面积作为纤维化的间接参数进行量化10,25。使用与纤维化区域分析相同的软件及ROI，通过设定白色阈值，检测ROI内的气腔区域。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争利益。

尽管许多研究团队致力于开发治疗特发性肺纤维化（IPF）的新药物，但目前仅有两种药物可供患者使用。由于只有肺移植能够延长4-5年的生存期26，因此迫切需要寻找更有效的治疗方法7。转化医学和新药研发的基本前提是拥有能够模拟IPF特征、且干预研究结果可预测临床疗效的动物模型。然而，现有肺纤维化动物模型的有效性仍存在争议27。我们开发了一种新的肺纤维化小鼠模型，该模型需要按照图118所述进行两次博来霉素滴注。成像技术是可视化疾病进展和药物治疗反应的有力工具。该动物模型能更好地再现人类IPF的特征，且无创技术可在临床前研究与临床实践之间建立桥梁27。
然而，为了获得可靠且可重复的数据，某些步骤至关重要。气管内灌注必须在小鼠完全麻醉的状态下，采用标准化操作程序进行。微计算机断层扫描（Micro-CT...

特发性肺纤维化（IPF）是一种慢性肺部疾病，其肺功能呈进行性下降，不幸的是，多数患者在确诊后四年内死亡1。IPF的主要特征是细胞外基质沉积和成纤维细胞增殖，但其发病机制尚未完全阐明。目前最受支持的假说是，反复发生的肺损伤导致肺泡上皮细胞破坏，进而引起间充质细胞周期增殖异常、成纤维细胞和肌成纤维细胞过度积聚以及基质生成增加。参与这些过程的介质，如基质金属蛋白酶（MMPs），已在人类IPF患者或博来霉素诱导的动物模型的纤维化发展中被发现存在表达失调。不受控制的MMP产生会导致肺间质和肺泡腔内胶原沉积失衡，模拟异常的伤口修复过程1,2。
药物发现与开发的主要障碍之一是缺乏能够模拟人类发病机制和疾病表型的可及性小鼠模型。已有多种方法用于在动物模型中诱导肺纤维化，包括辐射损伤、石棉和二氧化硅暴露、促纤维化细胞因子以及博来霉素的给药3,4；然而，博来霉素在小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、兔5以及大型动物（非人灵长类、马、犬和反刍动物）6,7中应用最为广泛。博来霉素是由轮枝链霉菌（Streptomyces verticillus）产生的一种抗生素8，临床上用作抗肿瘤药物9。肺纤维化是该药物常见的副作用，因此被用于实验性动物模型中以诱导肺纤维化的发生。
在博来霉素诱导的肺纤维化模型中，纤维化病变通常在给予博来霉素后14至21天出现。在本研究中，我们采用了一种新的方案，通过两次经气管滴注博来霉素在小鼠中诱导肺纤维化。博来霉素小鼠模型耗时较长，因为新药需要在已形成的纤维化病变上进行评估，并需验证其抗纤维化作用与抗炎作用的区别。
胶原蛋白含量的生化测定、形态计量学和组织学分析均基于死后分析，限制了在同一动物体内追踪疾病发病过程的可能性。尽管这些参数被视为纤维化评估的金标准，但它们无法提供纤维化病变的时间或空间分布信息，也无法用于研究疾病进展的过程。10
近年来，非侵入性成像技术已被用于监测小鼠模型中气道重塑、炎症及纤维化进展：磁共振成像（MRI）、微型计算机断层扫描（Micro-CT）、荧光分子断层成像（FMT）和生物发光成像（BLI）11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21。我们提出一种非侵入性成像方法，通过在博来霉素刺激后不同时间点进行FMT和Micro-CT扫描，对肺纤维化进展进行纵向监测22。
许多信号通路参与了纤维化的建立与发展，但目前对此了解尚浅。只有更深入地理解这些过程，才可能转化为更多的药物靶点，并进一步应用于临床。未来，通过荧光分子断层成像技术对基质金属蛋白酶（MMP）活化进行纵向监测，同时结合显微CT检测肺实质结构变化，或可用于评估临床治疗反应。

<table><tbody><tr><td>FMT 2500 荧光断层成像系统</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>MMPsense 680</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td>NEV10126</td><td>避光保存，探针储存于 4 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>TrueQuant 软件</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>雌性近交系 C57BL/6 小鼠</td><td>San Pietro NatisoneHorst, 荷兰（UD）,&amp;nbsp;</td><td></td><td>使用前，动物需在本单位实验动物房条件下适应至少 5 天</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>ESTEVE spa</td><td>571329.8</td><td>避免吸入</td></tr><tr><td>自动细胞计数仪</td><td>Dasit XT 1800J</td><td>Experimental Builder</td><td></td></tr><tr><td>生理盐水，0.9% 氯化钠（NaCl）</td><td>Eurospital</td><td>15A2807</td><td></td></tr><tr><td>Quantum FX 显微 CT 扫描仪&amp;nbsp;</td><td>Perkin Elmer Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>链球菌素青霉素 V 来源的博来霉素硫酸盐&amp;nbsp;</td><td>Sigma</td><td>&amp;nbsp;B2434&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>全自动组织处理仪&amp;nbsp;</td><td>ATP700 Histo-Line Laboratories</td><td>ATP700&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>包埋系统&amp;nbsp;</td><td>EG 1160 Leica Biosystems</td><td>EG 1160</td><td></td></tr><tr><td>旋转式切片机&amp;nbsp;</td><td>Slee Cut 6062</td><td></td><td></td></tr><tr><td>数字切片扫描仪&amp;nbsp;</td><td>NanoZoomer S60, Hamamatsu Photonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-AR 图像分析软件&amp;nbsp;</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masson&amp;rsquo;s 三色染色试剂</td><td>Histo-Line Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林</td><td>Sigma</td><td>HT5012-1CS</td><td></td></tr><tr><td>Penn-century DP-4M 型干粉喷雾器</td><td>Penn-century</td><td>DPM-EXT</td><td></td></tr><tr><td>PE190 微型医用导管</td><td>2biological instruments snc</td><td>BB31695-PE/8</td><td></td></tr><tr><td>5 mL 无针头注射器</td><td>Terumo</td><td>SS*05SE1</td><td>用剪刀剪去活塞的端部</td></tr><tr><td>Hamilton 0.10 mL（型号 1710）</td><td>Gastight</td><td>81022</td><td></td></tr><tr><td>Discofix 三通阀</td><td>Braun</td><td>4095111</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 带针头注射器</td><td>Pic solution</td><td>3,071,260,300,320</td><td>使用时去除针头</td></tr><tr><td>塑料喂养管 18 号 × 50 mm</td><td>2biological instruments snc</td><td>FTP-18-50</td><td>将管尖斜向剪切&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

一种基于显微ct与荧光分子断层成像的多模态成像方法用于小鼠博来霉素诱导肺纤维化的纵向评估

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

特发性肺纤维化（IPF）是一种致命性肺部疾病，其特征是肺组织结构进行性且不可逆地破坏，导致肺功能显著恶化，并最终因呼吸衰竭而死亡。
在实验动物模型中，特发性肺纤维化（IPF）的发病机制可通过博来霉素给药诱导产生。本研究探讨通过两次气管内滴注博来霉素建立类似IPF的小鼠模型。目前用于研究肺纤维化的标准组织学评估方法属于侵入性终末实验操作。本研究的目标是通过非侵入性成像技术，如荧光分子断层成像（FMT）和微型计算机断层扫描（Micro-CT），对肺纤维化进行监测。若这两种技术的检测结果能与组织学发现相互验证，则有望成为实时、无创评估IPF疾病严重程度与进展的革命性功能学方法。多种技术的融合应用为进一步理解IPF疾病提供了新途径：FMT可用于观察病理状态下发生的分子事件，而后续的解剖结构变化则可通过Micro-CT进行追踪监测。

单次博来霉素给药后三周观察到肺纤维化病灶的自发性缓解及中度结构改变，凸显了该模型的局限性。由于治疗时间窗狭窄，仅能进行预防性治疗，无法模拟临床实践。17.
在此，我们证明了采用两次气管内滴注博来霉素的实验方案可在小鼠中诱导出持久的肺纤维化18。实验设计见图119,20,21。本研究旨在利用无创成像技术观察小鼠肺纤维化的进展过程。博来霉素通过气管内给药两次（分别在第0天和第4天；每次50 µL溶液中含1 mg/kg博来霉素）。对照组每组12只小鼠，在与博来霉素组相同的时间点，仅气管内给予相同体积的溶剂。为评估纤维化程...

我们介绍一种基于显微CT和荧光分子断层成像的非侵入性多模态成像方法，用于对通过两次气管内滴注博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型进行纵向评估。

一种基于显微CT与荧光分子断层成像的多模态成像方法用于小鼠博来霉素诱导肺纤维化的纵向评估

特发性肺纤维化（IPF）是一种致命性肺部疾病，其特征是肺部结构进行性且不可逆地破坏，从而……

本研究在类似特发性肺纤维化（IPF）的小鼠模型中，旨在通过FMT和微型CT等非侵入性成像技术对肺纤维化进行纵向监测。该方法有助于深入理解肺纤维化过程中特定分子事件的发生时序。该技术的主要优势在于能够以非侵入性方式监测特定分子事件相关的解剖学变化。该技术的应用可拓展至特发性肺纤维化（IPF）病理的治疗，因为FMT与微计算机断层扫描（micro-CT）的融合为研究疾病进展及评估新疗法提供了可能。首先，将麻醉后的小鼠置于插管平台，使其门齿钩住金属丝以固定悬吊。打开喉镜，然后取一把钝头镊子，轻轻张开小鼠口腔。将喉镜片移至口腔后部，直至看到气管开口。用另一只手将连接在PE管末端的给药管插入气管中。旋转三通阀，以输送50 µL博来霉素。安装后应迅速将导管从气管中取出，以防止窒息。将小鼠保持直立姿势数秒钟。进行探针注射时，抓住小鼠尾巴，使其抓住笼盖。然后跨过小鼠肩部抓握，用手捏住颈部皮肤固定小鼠。将尾巴浸入盛有温水的烧杯中，使静脉膨胀，便于观察和进针。在尾巴两侧寻找两条尾静脉，注意不要将位于尾巴腹侧的动脉误认为静脉。将装有1毫升MMP探针溶液的1毫升注射器上的26号针头插入静脉，并以每公斤体重10毫升的剂量注射MMP探针溶液。开始前，启动数据采集软件，并在数据库中为该实验创建一项新研究。开始成像前，将脱毛并麻醉的小鼠转移至成像盒的中央位置。将小鼠平放、固定，并轻轻压紧成像盒的两个窗口。然后在软件的扫描窗口中，点击“Subject”，再点击预览以查看实时图像。绘制扫描区域时应足够大，以确保覆盖预期荧光区域周围的组织。绘制好 ROY 后，单击“添加到重建队列”，然后单击“扫描”以对小鼠进行成像。图像采集完成后，将小鼠从成像盒中取出并放回饲养笼中。使用 ROY 工具定量荧光的皮摩尔量，并将来自肺区域信号的 ROY 范围减小至约 700 至 800 立方毫米。每七天重复成像一次，或根据需要进行。如需进行显微CT成像，首先按下绿色电源按钮启动显微CT设备，并启动软件以预热X射线源。通过点击“New Database”创建数据库，并根据实验中涉及的小鼠数量建立浏览器信息。开始扫描前，在软件控制窗口中选择以下采集参数：将X射线管电压设置为90千伏，CT X射线管电流设置为160微安，实时X射线管电流设置为80微安，视野设置为36毫米。扫描技术选择“无门控技术”、“高分辨率”和四分钟。通过吸入3%异氟烷使小鼠麻醉后，将其放置在插入小孔径设备的动物床中，鼻罩持续供应麻醉气体。用胶带将小鼠四肢固定在床面上，以暴露胸部。随后关闭仪器门，按下采集按钮进入实时成像模式，实时观察小鼠的位置。使用CT仪器上的按钮移动动物床，使胸部与视野对齐。当小鼠处于中心位置后，通过选择90度并点击“Set”来旋转机架，确认床的最佳位置。然后点击CT扫描按钮。当出现提示X射线源将被打开的消息时，点击“是”。成像后将动物放回笼中，并监测至完全从麻醉中恢复。每七天重复成像一次，或根据需要进行。使用马松三色染色可显示肺组织中的形态结构。博来霉素处理组的图像显示，从第7天开始出现明显的纤维化模式，主要表现为单个纤维化病灶，到第14天进展为融合成片的胶原替代区域，并持续至第21天未见明显改变。通过重复的微型CT成像，可对纤维化肺叶中的气道进行定量分析和分割。气道被分为中央部分和远端部分。气道的远端部分为肺内气道，分支进入肺叶，包括右 cranial 肺叶、右 middle 肺叶、右 caudal 肺叶、右 accessory 肺叶以及左肺。气道半径的定量分析显示，与生理盐水对照组小鼠相比，博来霉素处理组小鼠的气道半径增大。每个数据点代表五只动物的均值标准误，共30只小鼠。对不同时间点给予溶剂或博来霉素处理的小鼠进行全肺纤维化定量，结果表明这些微型CT参数与组织学结果一致。掌握该技术后，可常规用于药物筛选。该技术建立后，为肺纤维化疾病领域的研究人员探索在类似特发性肺纤维化（IPF）动物模型中重复治疗的效果开辟了道路。

a-multimodal-imaging-approach-based-on-micro-ct-fluorescence

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

基于显微 CT 和荧光分子层析成像的多模态成像方法对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的纵向评价

通过心内注射表达荧光素酶的乳腺肿瘤细胞，建立小鼠骨转移实验模型。利用生物发光成像和微型CT对肿瘤的发展及其导致的溶骨性病变进行纵向监测。...

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扩散荧光断层成像为临床前研究提供了一种相对低成本且潜在高通量的方法 体内...

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我们介绍一种结合荧光介导断层成像（FMT）与微型计算机断层扫描（µCT）的融合成像方案。在完成图像融合与重建后，进行交互式器官分割，以提取荧光分布的定量测量数据。...

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我们描述了一种通过预先对气道造成损伤以显著增强肺癌细胞在小鼠肺部原位移植效率的方法。该方法还可用于研究肺部微环境中的基质相互作用、肿瘤转移扩散、肺癌共病情况，以及更高效地建立患者来源的异种移植模型。...

用博来霉素对小鼠气道进行预处理可提高原位肺癌细胞移植效率

在此，我们采用生物发光、X射线以及正电子发射断层扫描/计算机断层扫描成像技术，研究抑制mTOR活性对异种移植模型中骨髓植入性骨髓瘤肿瘤的影响。该方法可对靶向骨髓植入性骨髓瘤肿瘤的治疗手段的抗骨髓瘤效应进行符合生理条件的、无创的和多模态的分析 体内.

NOG小鼠中多发性骨髓瘤骨髓异种移植的多模态生物发光与正电子发射断层扫描/计算机断层扫描成像

本文介绍了一种有效的方法，用于研究经尾静脉输注来源于C57BL/6小鼠脐带全长的人类间充质基质细胞在博来霉素经气管注射诱导肺损伤后所表现出的抗纤维化活性。该方案可轻松扩展应用于其他治疗药物的临床前测试。...

经气管注射博来霉素诱导小鼠肺损伤

本文介绍了一种利用显微计算机断层扫描（micro-CT）通过气管内滴注在病灶侧建立单侧博来霉素诱导的肺纤维化模型，以定量分析通气区域的实验方案。...

利用微型CT进行单侧肺容积分析以加强临床前模型中肺纤维化的评估

本方案演示了在博来霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中应用的经口咽部吸入技术。...

小鼠肺纤维化模型中博来霉素的口咽部给药

在此，我们介绍一种通过气溶胶化博来霉素递送在小鼠中建立肺纤维化模型的实验方案 通过 气管。该优化方法能够在无需手术切口的情况下实现均匀、定量且精确的递送，从而提高博来霉素诱导纤维化的可重复性和可靠性。...

一种改进的基于气溶胶的经气管博来霉素递送方法，用于建立可重复且微创的小鼠肺纤维化模型

了解利用显微CT和荧光分子层析成像技术对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化进行纵向评估的非侵入性多模态成像方法。该技术可监测解剖结构变化及特定分子事件，为研究特发性肺纤维化疾病进展和评估新疗法提供重要工具。

一种基于显微CT与荧光分子断层成像的多模态成像方法用于小鼠博来霉素诱导肺纤维化的纵向评估

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