Name: 小鼠远端结肠造口术, 一种新的 C57BL/6 老鼠转移性结肠炎模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: 学习小鼠远端结肠造口术以研究转移性结肠炎中免疫系统与微生物组的相互作用。该模型无需基因改造动物或化学刺激物即可诱导结肠炎，为探索淋巴细胞性结肠炎的发病机制提供了可靠工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本文所述所有方法均已获得兽医政府主管部门（梅克伦堡-前波美拉尼亚州农业、食品安全与渔业局，(LALLF M-V)）的批准。
1. 动物术前护理与准备
<ol>
	<li>到达动物设施后，将动物（C57Bl/6）按体型相近分组，同组动物共同饲养，并在整个实验过程中保持分组不变。 
	注意：使用同性别的动物。本文所述结果均使用雄性小鼠获得。 
	注意：若使用雄性动物，应从7周龄开始将同组动物共同饲养，以建立等级 hierarchy，从而最大限度减少实验期间发生攻击性行为的风险。</li>
	<li>手术前至少一周，更换为高能量（&#62;14 MJ/kg）和高蛋白（&#62;20%）饲料，饲料中需包含所有必需的微量元素和维生素（具体信息见材料清单）。 
	注意：确保所有小鼠在手术时体重均不低于25 g。</li>
	<li>通过腹腔注射氯胺酮（87 mg/kg i.p.）和盐酸赛拉嗪（13 mg/kg i.p.）诱导麻醉和镇痛。&#160;等待至小鼠对机械刺激（如夹趾）无运动反应为止。</li>
	<li>将麻醉后的小鼠用胶带固定于手术台上的加热垫上，保持仰卧位，确保手术过程中体位稳定，并避免体温过度散失。 
	注意：加热垫表面温度应维持在36 °C至40 °C之间；手术室温度应为21 °C。</li>
</ol>
2. 远端结肠造口术
<ol>
	<li>剃除腹部毛发。手术开始前，使用70%酒精和碘伏对术区进行三次消毒。铺巾以确保无菌条件。</li>
	<li>沿腹白线切开腹壁肌肉和腹膜，行15毫米正中剖腹切口，以尽量减少出血。</li>
	<li>使用两把DeBakey无创镊，小心地将盲肠、回肠末端以及升结肠和横结肠从腹腔中取出。 
	注意：应严格限制对肠管的机械操作，以避免损伤肠系膜结构。</li>
	<li>确定盲肠极、升结肠和小肠（图1a和1b）。 
	注意：正确识别升结肠对于结肠造口的准确定位至关重要。当回盲部解剖结构不明确时，派尔集合淋巴结（Peyer's patches）的存在可确认为小肠，而成形粪便的存在则可判定为结肠。</li>
	<li>使用直尺确定未来结肠造口的位置。对于远端结肠造口，应将其置于回盲瓣远端20 mm处。</li>
	<li>在右上腹象限的腹壁上做第二个3毫米切口。将先前已识别的结肠段经此切口拉出，形成肠袢，注意避免扭曲肠袢。</li>
	<li>小心地将22号柔性静脉导管穿过肠系膜。注意避免损伤肠系膜血管结构。</li>
	<li>将肠管复位至腹膜腔内。</li>
	<li>使用简单的缝合和可吸收缝线将柔性管的两端固定在皮肤上例如，聚乳酸-羟基乙酸共聚物910或聚羟基乙酸4-0 1/2c）。</li>
	<li>在关闭剖腹切口前，通过腹腔内注射0.5 mL 0.9%氯化钠溶液进行液体复苏。</li>
	<li>使用可吸收缝线连续缝合腹膜和肌肉层例如， 使用可吸收缝线（如聚乳酸-羟基乙酸共聚物910或Polyfil 4-0 1/2c）行连续缝合关闭皮肤。</li>
	<li>使用精细剪刀对暴露的结肠袢进行次全横断，打开结肠腔。操作时避免损伤肠系膜，切勿将结肠完全切断。</li>
	<li>使用单丝可吸收缝线，以三个单个全层缝合针将每个结肠造口开口固定于腹膜和皮肤例如，聚对二氧环己酮或单丝6-0 3/8圆针）。此时，传入袢（功能性端结肠造口）与传出袢（黏液瘘）已明确分开（图1c). 
	注意：操作时间应少于20分钟，以减少液体和热量的散失。</li>
	<li>手术结束后，根据制造商说明，使用不含醛类的消毒液在超声波清洗仪中对器械进行消毒。</li>
</ol>
3. 假手术（结肠切开术）
<ol>
	<li>执行步骤 1.1 至 2.4</li>
	<li>使用直尺确定未来的结肠切开位置。结肠切开位置应距离回盲瓣与实验组中结肠造口相同的距离。</li>
	<li>用精细剪刀将结肠剪开，切口长度至少达到结肠周长的三分之二。</li>
	<li>用单股可吸收缝线进行单层全层间断缝合关闭肠切口例如， 聚对二氧环己酮，单丝6-0 3/8圆针。 
	注意：对于有经验的外科医生，手术时间应少于20分钟，以减少液体和热能的丢失。</li>
	<li>执行步骤 2.10、2.11 和 2.14</li>
</ol>
4. 术后护理
<ol>
	<li>将动物放回笼中。提供37 °C的适宜环境（例如，使用红外灯），直至小鼠完全清醒。随后，将小鼠置于温度和湿度受控的环境中（21 °C；相对湿度30% ± 10%）。自由供应食物和饮用水。为促进液体摄入，额外提供浸水的动物饲料。</li>
	<li>当动物对机械刺激出现反应时，皮下注射0.1 mg/kg体重的丁丙诺啡，开始术后镇痛。注意避免呼吸抑制。</li>
	<li>在术后第一周内，向饮用水中添加1 mg/mL曲马多，以持续镇痛。</li>
	<li>为弥补因活动减少导致的液体摄入下降，在术后第一周内于笼中提供固体饮水垫。</li>
	<li>术后第一周每日称量动物体重并评估行为学评分，第一个月其余时间每两天一次，第二个月每三天一次，采用Kleinwort et al.6所述的疾病严重程度评分标准。</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

所有作者均声明不存在任何利益冲突。

本方案中介绍的小鼠DC模型能够可靠地再现人类DC的组织病理学特征（例如，在发炎肠段的黏膜下层e.g.，de novo形成淋巴滤泡、隐窝缩短以及杯状细胞数量减少）。除这一优势外，该模型由与人类极为相似的触发因素诱导产生，且临床病程表现为轻度至中度的严重程度，这与大多数患者的情况一致。
为了获得可重复的结果并控制围手术期死亡率在可接受范围内，需要具备一定的显微外科技术经验。然而，结肠造口术和假手术（结肠切开术）均可在围手术期死亡率极低（&#60;10%）的情况下完成。以下操作步骤尤为重要：1）明确识别结肠和回肠末端。当回盲部解剖结构不清晰时，可通过是否存在成形粪便来确认结肠，通过是否存在派尔集合淋巴结（Peyer's patches）来确认回肠末端。2）在将结肠造口袢引出体外时，应确保肠系膜未发生扭曲，以避免肠系膜缺血和机械性肠梗阻。3）使用软管穿刺肠系膜时，应选择无血管区域，以防止出血和肠系膜缺血。4）在腹壁上制作小切口时，需检查止血是否充分；必要时，可采用热凝固法止住肌肉内血管的出血。5）确保结肠袢切口至少达到其周长的三分之二，并使后壁充分外翻，...

近年来，临床上和组织病理学上已鉴定出大量不同于经典炎症性肠病（IBD；即，克罗恩病或溃疡性结肠炎）的非感染性结肠炎类型。这些结肠炎类型的发病生理机制尚未完全阐明，部分原因是缺乏合适的动物模型。分流性结肠炎（diversion colitis）便是其中一种新近描述的类型。尽管该术语由Glotzer于1980年首次提出1，但类似表型的最初描述可追溯至1972年Morson的研究2。该疾病发生于50%至91%的转流性肠造口患者中，其临床严重程度存在差异3,4。鉴于美国每年约有120,000例结肠造口患者，这一疾病类型构成了重要的健康问题。
建立本方案的总体目标是提供一种依赖于与人类移植物抗宿主病（DC）相似的结肠炎触发因素的小鼠DC模型，并能够再现人类疾病的主要组织病理学特征。与其他小鼠结肠炎模型相比，本模型在诱导结肠炎时不需要使用基因修饰动物（例如，IL-7转基因小鼠、N-钙黏蛋白显性负性小鼠或TGFβ-/-小鼠）、化学刺激物质（例如，葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎或三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的结肠炎），也不需要在免疫缺陷小鼠中转移特定细胞群体（如CD45RBhigh细胞转移结肠炎模型）（综述见5）。与其他模型不同的是，本DC模型保留完整免疫系统，因而可用于评估参与DC发展的免疫学机制。黏膜炎症局限于被隔离的肠段，使得研究人员能够评估其对胃肠道其他部位黏膜免疫、肠段其他免疫区室（例如，派尔集合淋巴结和肠系膜淋巴结）免疫稳态以及整个机体免疫稳态的影响。最后，本模型为研究调控局部炎症刺激的机制提供了合适的工具，这些刺激源于局部微环境改变，涉及正常局部微生物组以及食物抗原的变化。

<table><tbody><tr><td>&lt;em&gt;手术材料&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 瓦加热垫</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>70% 乙醇（含甲乙酮）</td><td>格赖夫斯瓦尔德大学医院药房</td><td></td><td></td></tr><tr><td>木制涂药棒，单头小棉签，木柄，150 mm 长</td><td>Centramed GmbH，德国</td><td>8308370</td><td>用于手术区域的消毒</td></tr><tr><td>剪刀</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>无创 DeBakey 镊子</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>持针器</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety &lt;em&gt;i.v.&lt;/em&gt; 导管 22G</td><td>Braun Melsungen AG，德国</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 紫色编织线；V-5 17 mm 1/2 弧；70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>VCP994H</td><td></td></tr><tr><td>PDS II 6-0 单股线；V-18 13 mm 3/8 弧；70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL（带针头的一次性无菌注射器）</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N（N-十二烷基丙烷-1,3-二胺）</td><td>ANTISEPTICA，德国</td><td>18824-01</td><td>用于超声波清洗槽中手术器械的消毒</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;药品&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮 10%，100 mg/mL（盐酸氯胺酮）</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Xylasel，20 mg/mL（盐酸赛拉嗪）</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠</td><td>Braun Melsungen AG，德国</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0.3 mg/mL（丁丙诺啡）</td><td>Bayer，德国</td><td>PZN: 01498870</td><td>0.1 mg/kg &lt;em&gt;s.c.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>Tramal 滴剂，100 mg/mL（盐酸曲马多）</td><td>Gr&amp;uuml;nenthal GmbH，德国</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL 饮用水</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g（头孢曲松）&amp;nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH，德国</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg 体重 &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>甲硝唑 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG，德国</td><td>PZN: 05543515</td><td>12.5 mg/kg 体重 &lt;em&gt;i.p.&lt;/em&gt;</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;饲料&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff，德国</td><td>&amp;nbsp;V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>固体饮料 Dehyprev Vit BIO，袋装</td><td>TripleATrading，荷兰</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>设备</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV，德国</td><td></td><td>光学显微镜</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&amp;nbsp;</td><td>Abaxis，美国</td><td>770-9000</td><td>兽用血液学分析仪，用于 50 &amp;micro;l 静脉 EDTA 抗凝血</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX（超声波清洗槽）</td><td>Bandelin electronics，德国</td><td>RK 100 H</td><td>手术器械的消毒</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;软件&lt;/em&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 软件</td><td>Nikon Instruments Europe BV，德国</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism 版本 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

小鼠远端结肠造口术：c57bl/6 小鼠分流性结肠炎的新模型

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

倒流性结肠炎（DC）是一种常见的临床病症，发生在因转流性肠造口术导致肠段脱离粪流的患者中。该疾病的病因尚不明确，但似乎与克罗恩病和溃疡性结肠炎等经典炎症性肠病的病因不同。由于缺乏合适的鼠类模型，针对导致该疾病发生机制的研究受到严重阻碍。本方案建立了一种DC的鼠类模型，有助于研究免疫系统在DC发生过程中的作用及其与微生物组的相互作用。在该模型中，使用C57BL/6动物，通过建立远端结肠造口使结肠远端部分脱离粪流，从而在被隔离的肠段中诱发轻度至中度炎症，并重现人类DC的典型病变，同时伴随中等程度的全身性炎症反应。与大鼠模型相比，目前已有大量基于C57BL/6背景的基因修饰小鼠模型可供使用。将这些动物与本模型结合，可评估个别细胞因子、趋化因子或生物活性分子受体（e.g.，白细胞介素（IL）-17；IL-10、趋化因子CXCL13、趋化因子受体CXCR5和CCR7，以及鞘氨醇-1-磷酸受体4）在DC发病机制中的潜在作用。此外，基于C57BL/6背景的同源近交小鼠品系的可获得性，极大地方便了细胞转移实验，以明确不同细胞类型在DC病因学中的作用。最后，该模型还提供了评估局部干预措施（e.g.，局部微生物组的调节或局部抗炎治疗）对受累及非受累肠段黏膜免疫以及全身免疫稳态影响的机会。

手术在实验组（结肠造口术）和假手术组（结肠切开术）中均具有良好的耐受性。若手术操作及围手术期管理得当，围手术期死亡率不应超过10%。术后第一周，实验组和假手术组均出现明显的体重下降。假手术组动物通常在术后第4天达到体重最低点，而实验组则延迟一天出现。实验组的体重下降更为显著，可达初始体重的21.7%；相比之下，假手术组动物的体重下降为初始体重的10.8%。图2)6术后第一周体重降至最低点后，两组实验动物的体重均持续上升，但实验组体重增长斜率较慢。严重肠道炎症的体征和症状（即，实验组和假手术组均未出现血性分泌物或液体样排便6）。造瘘组术后前60天的总死亡率约为40%，而肠切开组约为10%。大多数死亡发生在术后第一周（实验组为61%，假手术组为66%）。死亡原因如图所示。 图3.
<p class="jove_content" fo:ke...

小鼠远端结肠造口术为人类分流性结肠炎提供了一种小鼠模型，该模型表现为粪流绕行的结肠节段中以淋巴细胞性为主的结肠炎。

小鼠远端结肠造口术：C57BL/6 小鼠分流性结肠炎的新模型

分流性结肠炎（DC）是一种常见临床病症，发生在因粪流被分流而导致部分肠段未参与排便通路的患者中，其原因是……

本方案的总体目标是促进对分流性结肠炎发病过程中免疫系统作用及其与微生物组相互作用的研究。该方法有助于回答有关分流性结肠炎的关键问题，该疾病可发生于脱离粪流的肠段，并影响高达90%的转流性肠造口患者。该技术的主要优势在于，无需使用基因修饰动物、化学刺激物质，或向免疫缺陷小鼠转移特定细胞群体即可诱导结肠炎。到达动物房后，将小鼠按体型相近分组，每组同笼饲养，并在实验过程中保持分组不变。术前至少一周，更换为含有全部必需微量元素和维生素的高能量、高蛋白饲料。根据文本方案对动物进行麻醉后，为手术做准备，使用胶带将动物固定在加热垫上，保持仰卧位，以防止体温散失。然后，检查小鼠在受到机械刺激（例如脚趾夹捏）时是否无运动反应。手术开始前，使用70%酒精和碘伏对手术区域进行三次消毒。铺巾以确保无菌条件。沿腹白线切开腹肌和腹膜，行15 mm的正中剖腹切口，以尽量减少出血。然后，使用两把德巴克无创镊子，小心地将盲肠、回肠末端、降结肠和横结肠从腹腔中拉出。操作时应注意尽量减少对肠道的机械性牵拉，以避免损伤肠系膜结构，并维持肠道的最佳灌注状态。接下来，辨认盲肠末端、升结肠和小肠。如果回盲部解剖结构不明确，可通过派尔集合淋巴结的存在来识别小肠，而通过结肠袋的形成来确定结肠。使用直尺确定未来结肠造口的位置，远端结肠造口应置于回盲瓣远端20 mm处。在右上腹象限的腹壁上做第二个3 mm的切口。然后，将先前已识别的结肠段经此切口拉出，形成一个肠袢，注意避免扭曲肠袢。小心地将一根22号柔性静脉留置针穿过结肠系膜，注意避免损伤肠系膜血管结构。然后，将肠管放回腹膜腔内。使用单纯缝合和可吸收缝线，将软管的两端固定于皮肤上。在关闭剖腹切口前，通过腹腔内注射0.5 mL的0.9%生理盐水进行液体复苏。使用连续可吸收缝线缝合腹膜和肌肉层，然后以类似方式缝合皮肤。用精细剪刀对外置的结肠袢进行次全横断，以打开结肠。避免对肠系膜造成任何损伤，且不要完全横断结肠。使用单股可吸收缝线，通过三个贯穿全层的单缝线将每处结肠造口分别固定于腹膜和皮肤。此时，输入袢（功能性末端结肠造口）与输出袢（黏液瘘）已明确分开。进行结肠切开术时，在确定盲肠极、升结肠和小肠位置后（方法同远端结肠造口术所示），使用直尺确定未来的结肠切开位置，该位置应与回盲瓣的距离和结肠造口位置相同。使用精细剪刀沿结肠周长至少切开三分之二。使用单丝可吸收缝线，以全层间断缝合法关闭结肠切口，随后按前述方法进行液体复苏，并逐层关闭腹膜和皮肤。操作完成后，将动物放回笼中，并置于37摄氏度的红外灯下，直至其完全清醒，再将其放回温湿度可控的环境中。当动物对机械刺激出现反应时，开始术后镇痛，皮下注射0.1 mg/kg体重的丁丙诺啡。需仔细观察是否有呼吸抑制的迹象。术后第一周内，在饮水中添加1 mg/mL的曲马多，以持续提供镇痛作用。由于活动能力下降可能导致饮水量减少，应在术后第一周内于笼内提供固体饮水平板以弥补液体摄入的不足。最后，在术后第一周每天称量动物体重并评估动物行为评分，第一个月的其余时间每两天进行一次，第二个月每三天进行一次。手术在实验组和假手术组中均具有良好的耐受性。实验组体重下降更为显著，达到初始体重的21.7%。相比之下，假手术组动物体重减少10.8%。术后前60天内，造口组总死亡率约为40%，而假手术组约为10%。大多数死亡发生在术后第一周，死亡原因如本图所示。小鼠远端结肠造口术可导致以淋巴细胞性结肠炎为主的病变，重现人类显性结肠炎（DC）的典型组织学特征。在被旷置的肠段中，隐窝长度显著缩短，并在粪便转流14天后达到统计学显著性。被旷置肠段中含杯状细胞的隐窝长度在30天后减少。术后14天，被旷置肠段隐窝中的杯状细胞绝对数量也显著减少。弥漫性淋巴组织增生（DC）的特征性病变——黏膜中淋巴滤泡的形成，需要更长时间的粪便转流才能出现。尽管早在术后两周即可观察到淋巴滤泡数量增加，但显著差异通常在术后两个月后才显现。观看本视频后，您应能充分掌握小鼠远端结肠造口术的操作方法。一旦熟练掌握，若操作得当，该技术可在不到20分钟内完成。该模型可与其他基因修饰模型或同源近交系小鼠的细胞转移实验相结合，用于研究特定细胞群体中炎症介质的作用以及分流性结肠炎的发病机制。

murine-distal-colostomy-novel-model-diversion-colitis-c57bl6

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

小鼠远端结肠造口术, 一种新的 C57BL/6 老鼠转移性结肠炎模型

在饮水中给予硫酸葡聚糖钠（DSS）是一种已建立的急性结肠炎小鼠炎症损伤模型。本方案概述了DSS处理的方法以及组织制备的步骤。...

使用葡聚糖硫酸钠（DSS）建立小鼠结肠炎模型

我们展示了一种实验方案，该方案通过给予小鼠致基因毒性试剂偶氮甲烷（AOM），随后进行三轮促炎剂葡聚糖硫酸钠（DSS）处理，可快速且稳定地诱导小鼠结肠肿瘤形成，其形态学和分子特征与人类结肠炎相关性癌症中的肿瘤具有相似性。...

使用氧化偶氮甲烷（AOM）和硫酸葡聚糖钠（DSS）建立结肠炎相关性癌症模型

在本视频中，我们介绍了一种用于构建小鼠近端结肠袢（pcLoop）节段的外科手术方法，随后向该节段进行管腔内注射荧光标记物，以研究肠道上皮通透性。...

小鼠近端结肠袢模型的建立：一种通过肠腔内注射荧光标记物并检测血清中荧光信号以评估肠道通透性的外科手术方法

本视频展示了一种通过化学诱导建立小鼠结肠炎模型的技术——结肠炎是一种炎症性肠病。让小鼠饮用右旋糖酐硫酸钠（DSS）溶液足够时间。摄入后，DSS会破坏结肠中的黏液层和上皮屏障，使肠道微生物进入下方组织，被局部免疫细胞识别，从而引发过度的免疫反应，导致炎症发生。...

一种建立右旋糖酐硫酸钠诱导小鼠结肠炎模型的技术

Citrobacter rodentium 小鼠模型：研究病原体与宿主在感染性结肠炎中的作用

近年来，新一代内窥镜已成为评估小鼠结肠炎和结直肠肿瘤的重要诊断与研究工具。本文详细介绍了一种用于小鼠内窥镜下评估炎症及结直肠肿瘤的实验方案，并提出一种新颖的评分系统，该系统采用小数标识符来记录结肠炎和结直肠肿瘤的内窥镜下严重程度。...

利用经验证的内镜评分系统对小鼠进行柔性结肠镜检查以评估结肠炎和结直肠肿瘤的严重程度

通过节段性腺病毒-Cre感染建立结直肠癌基因工程小鼠模型的方案及其监测 通过...

一种用于散发性结直肠癌的基因工程小鼠模型

肠梗阻是指肠道出现部分或完全阻塞，可引起严重腹痛、恶心、呕吐，并阻碍粪便排出。该小鼠肠部分梗阻造模方法可靠，可用于研究肠道内病理性细胞增殖与死亡的潜在机制。...

一种肠道部分梗阻的小鼠模型

术后吻合口漏或吻合失败是导致术后发病率和死亡率升高的主要原因。我们建立结肠吻合的手术方法是一种可靠且可重复的研究吻合口愈合机制的方法。...

小鼠结肠吻合术的建立

本方案描述了一种简便的小鼠阑尾（盲肠斑）切除手术，随后诱导与炎症性肠病相关的结直肠癌。该小鼠阑尾切除模型可用于研究阑尾在人类胃肠道疾病发病机制中的生物学作用。...

通过盲肠斑块精确定位建立小鼠慢性结肠炎相关结直肠癌的阑尾切除模型

我们描述了一种通过肠道操作建立的小鼠术后肠梗阻模型。在手术后24小时评估了胃肠道传输功能、病理变化以及免疫细胞的活化情况。...

术后肠梗阻小鼠模型

学习小鼠远端结肠造口术以研究转移性结肠炎中免疫系统与微生物组的相互作用。该模型无需基因改造动物或化学刺激物即可诱导结肠炎，为探索淋巴细胞性结肠炎的发病机制提供了可靠工具。

小鼠远端结肠造口术：C57BL/6 小鼠分流性结肠炎的新模型

探索更多视频