操纵活细胞构建稳定的3D 蜂窝组件, 无需人工支架

这种新方法使我们能够通过建立稳定的细胞接触，在含有非特异性亲水聚合物的流体缓冲溶液中，根据所需的单个细胞构建三维组件。在此视频中，我们将演示我们如何操作所需的单单元，以及如何构建无需人工基架的 3D 蜂窝组件。在这里，我们将以Dextran为例，在我们的媒介中展示实验过程。

首先，在25立方厘米的烧瓶中，用5毫升DMEM维持NAMRU小鼠乳腺上皮细胞，其中含有10%FBS和1%青霉素-链霉素。当准备继续时，使用吸气器取出补充的DMEM，并添加三到五毫升的PBS，预热至37摄氏度洗涤细胞。使用吸气器，从烧瓶中去除所有 PBS。

加入1.5毫升的尝试性，在37摄氏度下预热。在37摄氏度的CO2培养箱中孵育至少一到两分钟。在此之后，加入含有10%FBS和1%青霉素-链霉素的3.5毫升DMEM。

移液向上和向下混合。将电池悬浮液转移到15毫升离心管中，并在室温下以417倍G离心，3分钟。然后，吸气介质。

加入含有10%FBS和1%青霉素-链霉素的5毫米新鲜DMEM。如果需要，使用低温保存解决方案冷冻保存细胞，如制造商的说明所概述。首先混合10毫升DMEM辅以10%FBS和1%青霉素-链霉素0.8克Dxtran，以准备每毫升Dxtran溶液80毫克。

将这种 Dextran 溶液的 200 微升与先前准备的细胞悬浮液的 200 微升混合，形成每毫升 Dextran 介质含有 40 毫克的细胞悬浮液。首先，打开激光，请注意，使用波长在红色到近红外区域的激光束是最有效的。接下来，通过双击软件图标打开软件。

双击相机的图标，注意相应的显示屏将弹出。然后双击发光二极管的图标，对焦调整，以及移动阶段打开其显示器。首先将两个玻璃空间放在底盖玻璃滑梯上。

转移20微升，以前准备的Dextran补充细胞悬架到底盖玻璃滑梯。然后将顶盖玻璃幻灯片放在覆盖电池悬架的等位器上。将样品细胞放在下物镜上，用10微升蒸馏水进行水浸显微镜。

使用 10 微升蒸馏水将上部物镜连接到样品单元顶部。接下来，单击显微镜照明窗口中的"开/关"按钮以打开 LED。单击目标定位窗口中的方向按钮，调整样品与下部目标镜头之间的距离，直到其聚焦。

在信号衰减窗口中将每个激光束的强度设置为 1500 毫瓦。然后，单击两个激光图标，将激光束照射到位置 1 和位置 2。单击样本定位窗口中的方向按钮以移动样本级，直到单元格被困在位置 1。

单击并拖动光标，指示位置 2，直到另一个单元格被困在位置 2。首先，操作单个单元格，以便它与另一个单元格接触。保持此状态 300 秒，使细胞暴露在激光下 300 秒。

记录 x-y 轴。捕获另一个单元格并传输到前两个单元格以构造任意的 2D 单元格程序集。然后上下移动舞台以构建 3D 蜂窝组件。

确认即使在关闭激光后，组件仍然稳定。本研究将可溶性聚合物用于三元单细胞组件的构建。此处显示了使用双光束光学钳子形成的示例结构。

如果实验成功，即使在激光关闭后，这些蜂窝组件仍保持稳定。这一新方法用于在水介质中构建具有天然亲水聚合物的 3D 蜂窝组件。在再生医学和组织工程领域，它非常期望开始建造这种下一代细胞组件，并配有一些强大的工具。