Name: 猪临床敷料评价模型中的严重烧伤 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: 了解严重烧伤猪模型的建立方法，用于评估钙藻酸盐多糖敷料在烧伤创面愈合中的效果。该模型模拟人体皮肤结构，为烧伤治疗策略提供重要研究工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

本研究由台湾三军总医院；中国台湾国防医学院（TSGH-C107-042）；中国台湾科技部（MOST 106-2314-B-016 -014）；以及中国台湾国防医学院（MAB-106-055；MAB-106-010；MAB-107-064）资助。

涉及动物受试者的实验程序已获得中国台湾国防医学院动物护理委员会的批准。本研究在国防医学院实验动物中心进行。采用本方案已成功对体重在20至25 kg之间的猪进行仪器植入操作。
1. 动物对人类操作的适应
<ol>
	<li>动物到达设施后，应单独饲养，但允许彼此之间进行互动。</li>
	<li>提供实验动物 随意摄取 食物和水的获取</li>
	<li>在动物设施将猪转运至实验实验室之前，每天至少对猪进行一次人手操作训练，持续一周，以使其适应人类接触和运输过程。</li>
	<li>手术前至少禁食动物12小时，以防止恶心、呕吐和胃液误吸。</li>
</ol>
2. 镇静
<ol>
	<li>在创建烧伤伤口前，对动物进行镇静处理 通过 静脉注射 Zoletil 50（25 mg/kg）。</li>
</ol>
3. 插管与通气
<ol>
	<li>将动物置于桌子和/或推车上，保持胸卧位&#160;位置</li>
	<li>使用口腔扩张器打开动物的口腔。</li>
	<li>如果猪的下颌放松不足或存在妨碍插管的吞咽反射，可使用异氟烷进行面罩麻醉以诱导镇静。</li>
	<li>手术期间通过生理信号监测仪监测血压、心率和体温，以预防潜在并发症。</li>
</ol>
4. 麻醉
<ol>
	<li>诱导并维持麻醉；建议通过肌肉注射替来他明和唑拉西泮（各25 mg/kg）对动物进行麻醉。</li>
	<li>当观察到肌肉松弛，表现为下颌张力消失和眼睑反射减弱时，使用气管导管对动物进行气管插管。</li>
	<li>在整个手术过程中，将所有猪维持在麻醉状态，异氟烷蒸发器设定为0.5–2.5%（v/v）。</li>
	<li>术前通过夹捏后肢脚趾测试疼痛反射，以评估麻醉深度。必要时追加麻醉药物或等待数分钟。手术过程中应定期检查疼痛反射。</li>
</ol>
5. 手术部位的消毒
<ol>
	<li>将动物脊柱两侧至腋窝区域的皮肤剃净并清洁，范围约为25 cm宽。</li>
	<li>用聚维酮碘清洗剂（75 mg/mL）擦洗湿润的皮肤，持续约5分钟。</li>
	<li>使用湿润的无菌纱布从皮肤上去除聚维酮碘皂液。</li>
	<li>用聚维酮碘搽剂（100 mg/mL）对皮肤进行消毒。</li>
	<li>用无菌手术巾覆盖动物，以减少细菌转移及手术部位的后续污染。</li>
</ol>
6. 烧伤创面的制备
<ol>
	<li>使用外科标记笔在猪背部对称标记六个烧伤创面的中心位置，确保每个烧伤创面之间的距离大于创面半径（图1A）。</li>
	<li>将50 mL甘油注入改装的电烙铁中，并插入电子温度计以监测温度。该热烙铁具有约9 cm2的平坦接触面（图1B）。</li>
	<li>使用加热板将烙铁加热至137–139 °C（图1C）。</li>
	<li>将烙铁置于已标记区域，不施加任何压力，持续30秒，以制作六个均匀的烧伤创面（图1C）。</li>
	<li>用0.9%生理盐水冲洗烧伤创面（图1D）。</li>
	<li>测量创面尺寸，并通过显微摄影记录创面情况（图1E）。</li>
</ol>
7. 敷料的制备
<ol>
	<li>通过直接接触，用四层临床敷料的内层接触层覆盖每个伤口。该层可使用含 CAPS 的敷料或其他替代材料（图 1F）。</li>
	<li>在临床敷料上覆盖一层防水膜，以防止细菌侵入（图 1F）。</li>
	<li>用一层纱布（0.5 cm 厚）覆盖每个伤口，并用纸质胶带固定，作为敷料的中间层（图 1G）。</li>
	<li>用外层粘性胶带固定纱布，并将该层延伸至躯干，以防止敷料移位（图 1H-1J）。</li>
</ol>
8. 烧伤后护理与测量
<ol>
	<li>在麻醉苏醒前开始，每 8-12 小时为猪注射一次布托啡诺（0.1 mg/kg，肌内注射），持续一周，以减轻潜在疼痛。</li>
	<li>允许猪自由进食和饮水。</li>
	<li>在研究的前 10 天内每 2 天更换一次临床敷料，之后在 6 周研究期间每周更换两次。</li>
	<li>每次更换敷料前清洁并测量伤口。更换敷料期间给予麻醉剂。</li>
	<li>通过显微摄影记录伤口情况，用于比较伤口愈合速率：前 10 天每 2 天一次，之后在 6 周研究期间每周两次。</li>
	<li>根据先前描述的方法，将伤口再上皮化或收缩程度计算为原始伤口大小的百分比。伤口闭合分析以双盲方式进行。</li>
	<li>使用 VSS 评估烧伤瘢痕，VSS 包含四个变量：血管分布、高度（厚度）、柔韧性及色素沉着，分别在烧伤后第 0、7、21 和 42 天进行测量。每个变量有四至六个可能评分，总分范围为 0 至 14，其中 0 分表示正常皮肤。</li>
</ol>
9. 烧伤后组织的细菌生长实验
<ol>
	<li>在烧伤后第0、7、21和42天对伤口进行拭子采样，用于抗菌检测。</li>
	<li>将拭子放入100 mL的0.9%无菌生理盐水中，轻轻涡旋震荡，以获得均匀的悬浮液。</li>
	<li>对匀浆液进行连续稀释（10−1–10−5），并分别取每种稀释液100 μL接种至选择性和非选择性培养基中。</li>
	<li>将所有稀释液在37 °C有氧条件下培养24–72小时。</li>
	<li>从所有稀释液中各取10 μL的等分试样，共三份，接种至补充5%羊血的血琼脂平板上，以分离需氧的革兰氏阳性菌。</li>
	<li>将样品均匀涂布或倾注于琼脂平板表面，过夜培养，以测定菌落形成单位（CFUs）的数量。</li>
	<li>过夜培养后读取平板结果。将羊血琼脂平板倒置，在培养皿底部使用记号笔和小尺子均分为四个象限。</li>
	<li>将平板置于解剖显微镜载物台上，计数每个平板上的菌落。根据定义，只有菌落数不少于300 CFU时方可进行计数。</li>
	<li>对三个重复样本中的细菌菌落分别计数，计算三个重复样本的平均值，并将该平均值乘以最终稀释倍数，确定每平板的CFU数值。</li>
</ol>
10. 安乐死与组织固定
<ol>
	<li>静脉注射过量的戊巴比妥钠安乐死溶液（80–120 mg/kg）。</li>
	<li>进行整块切除烧伤创面组织，包括下方的肌肉组织及周围未受伤的组织。</li>
	<li>用10%中性缓冲甲醛固定组织。
	<ol>
		<li>将10 mL甲醛（37%）与90 mL磷酸盐缓冲液（PBS）混合，4 °C保存。</li>
		<li>将组织转移至固定液中，并轻轻摇动容器，确保所有组织完全浸没于固定液内。固定液体积必须为组织体积的30倍。</li>
		<li>在 4 ˚C 下固定组织过夜。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用乙醇脱水组织并包埋于石蜡块中。以下步骤在4 ˚C摇床中进行。
	<ol>
		<li>用 PBS 洗涤两次，每次 30 分钟。</li>
		<li>用70%乙醇脱水8小时，80%乙醇过夜，95%乙醇脱水8小时，然后100%乙醇过夜。</li>
		<li>将组织在100%乙醇中继续孵育8小时。</li>
		<li>将组织在三份二甲苯中依次孵育，每份30分钟。</li>
		<li>用新熔化的（52 °C）石蜡替换二甲苯，于52 °C烘箱中孵育1小时。</li>
		<li>用新鲜石蜡替换原有石蜡，在52 °C的烘箱中孵育3小时，然后再次更换石蜡，并在52 °C下过夜孵育。</li>
		<li>将组织分别用新鲜石蜡孵育两次，每次1小时，然后包埋组织并置于4 °C保存。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>对石蜡包埋切片进行HE染色，然后观察 通过 一台配备100倍物镜的光学显微镜× 放大倍数.
	<ol>
		<li>使用旋转式切片机制作石蜡切片。</li>
		<li>用二甲苯脱蜡，每次3分钟，共更换三次。</li>
		<li>用100%、95%、80%和70%乙醇分别水化组织各3分钟，然后浸入蒸馏水中。</li>
		<li>用苏木精染色10分钟，然后用流动的自来水冲洗。</li>
		<li>用0.1%盐酸乙醇分化5分钟，然后用自来水冲洗。</li>
		<li>用0.5%伊红染色1分钟。</li>
		<li>用70%、80%、95%和100%乙醇分别脱水2分钟。</li>
		<li>用二甲苯脱色，并在通风橱中干燥。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+skin+wounds%3A+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair Regeneration. 17, 763-771 (2009).</li>
<li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+healing+essentials%3A+let+there+be+oxygen%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regeneration. 17, 1-18 (2009).</li>
<li>Verhaegen, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+collagen+architecture+between+keloid%2C+hypertrophic+scar%2C+normotrophic+scar%2C+and+normal+skin%3A+an+objective+histopathological+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Differences in collagen architecture between keloid, hypertrophic scar, normotrophic scar, and normal skin: an objective histopathological analysis.</a> Wound Repair Regeneration. 17, 649-656 (2009).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Experimental+Surgery+and+Physiology%3A+Induced+Animal+Models+of+Human+Disease%22">Experimental Surgery and Physiology: Induced Animal Models of Human Disease</a>. Swindle, M. M., Adams, R. J. , Williams and Wilkins. Baltimore. (1988).</li>
<li>Swindle, M. M., Smith, A. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSwindle%2C+MM+%22Swine+as+Models+in+Biomedical+Research%22">Swine as Models in Biomedical Research</a>. , Iowa State University Press. Ames. (1992).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Advances+in+Swine+in+Biomedical+Research.+Vols+1-2%22">Advances in Swine in Biomedical Research. Vols 1-2</a>. Tumbleson, M. E., Schook, L. B. , Plenum Press. New York. (1996).</li>
<li>Wang, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+wound-healing+performance+of+a+phyto-polysaccharide-enriched+dressing+-+a+preclinical+small+and+large+animal+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Wound+Journal%22%5BJournal%5D)">Enhanced wound-healing performance of a phyto-polysaccharide-enriched dressing - a preclinical small and large animal study.</a> International Wound Journal. 14, 1359-1369 (2017).</li>
<li>Rowan, M. P., Cancio, L. C., Elster, E. A., Burmeister, D. M., Rose, L. F., Natesan, S., Chan, R. K., Christy, R. J., Chung, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burn+wound+healing+and+treatment%3A+review+and+advancements%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Burn wound healing and treatment: review and advancements.</a> Journal of Critical Care. 19, 243(2015).</li>
<li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedicine+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 969618, 8(2011).</li>
<li>Gaines, C., Poranki, D., Du, W., Clark, R. A., Van Dyke, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+porcine+deep+partial+thickness+burn+model%5BTitle%5D)+AND+%22Burns%22%5BJournal%5D)">Development of a porcine deep partial thickness burn model.</a> Burns. 39, 311-319 (2013).</li>
<li>Gnyawali, S. C., Barki, K. G., Mathew-Steiner, S. S., Dixith, S., Vanzant, D., Kim, J., Dickerson, J. L., Datta, S., Powell, H., Roy, S., Bergdall, V., Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+harmonics+ultrasound+imaging+for+non-invasive+characterization+of+wound+healing+in+a+pre-clinical+swine+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution harmonics ultrasound imaging for non-invasive characterization of wound healing in a pre-clinical swine model.</a> PLoS One. 10 (3), e0122327(2015).</li>
<li>Eaglstein, W. H., Mertz, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+methods+for+assessing+epidermal+wound+healing%3A+the+effects+of+triamcinolone+acetonide+and+polyethelene+film+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">New methods for assessing epidermal wound healing: the effects of triamcinolone acetonide and polyethelene film occlusion.</a> Journal of Investigative Dermatology. 71, 332-384 (1978).</li>
<li>Swindle, M. M., Smith, A. C. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/279759966_Comparative_anatomy_and_physiology_of_the_pig">Comparative anatomy and physiology of the pig.</a> Scandinavian Journal of Laboratory Animal Sciences. 25, 1-10 (1998).</li>
<li>Swindle, M. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSwindle%2C+MM+%22Swine+in+the+Laboratory%3A+Surgery%2C+Anesthesia%2C+Imaging+and+Experimental+Techniques%22">Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging and Experimental Techniques</a>. , 2nd ed, CRC Press. Boca Raton. (2007).</li>
<li>Mertz, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1+as+a+potent+inducer+of+wound+re-epithelization%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Clinical+and+Biological+Research%22%5BJournal%5D)">IL-1 as a potent inducer of wound re-epithelization.</a> Progress in Clinical and Biological Research. 365, 473-480 (1991).</li>
<li>Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wound+repair+and+regeneration%3A+mechanisms%2C+signaling%2C+and+translation%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translation+Medicine%22%5BJournal%5D)">Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation.</a> Science Translation Medicine. 6, 265-266 (2014).</li>
<li>Aryza, M. J., Baryza, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Vancouver+Scar+Scale%3A+an+administration+tool+and+its+interrater+reliability%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Burn+%26+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">The Vancouver Scar Scale: an administration tool and its interrater reliability.</a> The Journal of Burn & Rehabilitation. 16, 535-538 (1995).</li>
<li>Bystrom, A., Claesson, R., Sundqvist, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antibacterial+effect+of+camphorated+paramonochlorophenol%2C+camphorated+phenol+and+calcium+hydroxide+in+the+treatment+of+infected+root+canals%5BTitle%5D)+AND+%22Endodontics+%26+Dental+Traumatology%22%5BJournal%5D)">The antibacterial effect of camphorated paramonochlorophenol, camphorated phenol and calcium hydroxide in the treatment of infected root canals.</a> Endodontics & Dental Traumatology. 1, 170-175 (1985).</li>
<li>Reig, A., Tejerina, C., Codina, J., Hidalgo, J., Mirabet, V. <a target="_blank" href="http://www.medbc.com/annals/review/vol_4/num_3/text/vol4n3p174.htm">Application of a new cicatrization dressing in treating second-degree burns and donor sites.</a> Annals of Burn and Fire Disasters. 4, 174(1991).</li>
<li>Hindy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+between+sodium+carboxymethyl-cellulose+silver%2C+moist+exposed+burn+ointment%2C+and+saline-soaked+dressing+for+treatment+of+facial+burns%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Burn+and+Fire+Disasters%22%5BJournal%5D)">Comparative study between sodium carboxymethyl-cellulose silver, moist exposed burn ointment, and saline-soaked dressing for treatment of facial burns.</a> Annals of Burn and Fire Disasters. 22, 131-137 (2009).</li>
<li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li>
<li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 13505-13510 (2009).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本研究建立了一种猪的重度烧伤模型，并使用含CAPS的敷料对该模型进行了评估。我们的结果表明，该猪烧伤模型可用于监测实验性敷料的临床性能，包括其抗菌特性。同时采用VSS评分、H&amp;E染色和抗菌试验分析了伤口愈合速率、伤口闭合情况及抗菌活性。动物烧伤模型已被开发为研究烧伤损伤病理生理学的有力工具。使用大鼠作为实验对象具有一些生物学优势，例如存在大量针对大鼠的特异性试剂，以及在获取转基因大鼠方面的实用性，有助于揭示恢复过程中活跃的分子信号通路。然而，大鼠在动物烧伤模型中的主要缺点是其无法完全模拟人类的伤口愈合过程。在人类中，再上皮化是主要的愈合方式8，而大鼠的伤口愈合则主要依赖快速的伤口收缩9。此外，大鼠不易形成增生性瘢痕或瘢痕疙瘩，进一步证实其伤口修复过程与人类存在差异。相比之下，猪近年来受到研究人员的关注，因其皮肤结构与人类皮肤相似。此外，猪与人类的伤口愈合过程均经历生理上类似的阶段，包括炎症期、增殖期、再上皮化期和重塑期。通常情况下，猪的烧伤在21天内愈合，再上皮化发生在伤后7至14天之间10</su...

烧伤会启动炎症过程，并引发复杂的病理效应，这些效应在事故发生后立即影响身体的多种功能，对患者的生活质量产生负面影响。糖尿病患者中，伤口愈合受损会导致显著的发病率和死亡率1,2。大多数烧伤患者在进行烧伤创面清创时会经历疼痛，尽管使用强效阿片类镇痛药，该过程仍被认为是极为痛苦的3。
与其他哺乳动物相比，猪在上皮化过程、细胞增殖和血管生成等方面具有多项与人类相似的解剖学和生理学特征。这使得猪在某些手术和研究中成为潜在更优的模型，常被用于在小鼠中取得有前景结果后的后续研究。这些特点促使猪在临床前测试中作为主要物种的使用日益增加。近年来，在心血管、泌尿、皮肤和消化系统相关的生物医学研究中，观察到显著增长的趋势4,5,6。本研究旨在建立一种严重的烧伤损伤猪模型，该模型可消除伤口收缩，更接近地模拟人类的伤口愈合过程及新生组织的形成。在猪背部对称地制造六个烧伤伤口，脊柱两侧各三个。随后，在严重烧伤损伤的猪模型中评估一种实验性敷料，该模型可被调整以模拟人类的伤口愈合过程（图1）。伤口覆盖临床敷料，该敷料由四层组成：内层接触层为实验材料，内层中间层为防水膜，外层中间层为纱布，外层为粘性胶带。防水膜可保持伤口环境湿润，同时防止细菌感染并允许气体透过敷料。外层中间的纱布覆盖在防水膜上，并由外层粘性胶带固定。实验结束后，评估伤口闭合情况、伤口面积以及温哥华瘢痕量表（VSS）评分。动物安乐死后，取各动物的皮肤样本进行组织学制备，并采用苏木精-伊红（HE）染色。本模型还评估了每种敷料在伤口愈合背景下的抗菌活性。我们之前的研究已通过微创外科技术在大鼠和猪模型中验证了伤口愈合效果7。由于每只猪背部有六个烧伤伤口，每种实验性敷料在所有位置均进行了测试和评估，以尽量减少因猪背部不同部位伤口愈合差异所带来的偏倚。因此，本研究建立的严重烧伤损伤猪模型为临床敷料的评估提供了新方法，并有助于开发烧伤治疗的新策略。本研究提供了揭示烧伤伤口愈合病理生理机制的关键工具。

<table><tbody><tr><td>&lt;强&gt;镇静：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Merial</td><td>2528 ESP</td><td>10 mL 小瓶</td></tr><tr><td>阿扎哌隆</td><td>中国化学 &amp;和药物</td><td>47W406</td><td>100 mL 小瓶</td></tr><tr><td>阿托品&amp;nbsp;</td><td>东方化工厂</td><td>IN120802</td><td>1 mL 小瓶</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;麻醉剂：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>替来他明+唑拉西泮</td><td>Virbac</td><td>BC91</td><td>5 mL 小瓶</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>巴克斯特</td><td>N002A225</td><td>100 mL 小瓶</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;外科手术：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>理发剪</td><td>Moser</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>聚维酮碘洗液</td><td>Ever star</td><td>HA161202</td><td>4 L 桶</td></tr><tr><td>改良铁剂</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>0.9% 生理盐水溶液</td><td>CHI SHENG</td><td>KC130</td><td>500 mL 茄形瓶</td></tr><tr><td>纱布</td><td>中国外科敷料中心</td><td>MO15900080</td><td>10 x 10 cm</td></tr><tr><td>CAPS</td><td>CoreLeader Biotech Co., Ltd，中国台湾台北</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>纸质胶带</td><td>3M</td><td>NDC-8333-1530-01</td><td>2.5 cm × 9.1 m</td></tr><tr><td>防水膜</td><td>3M</td><td>NDC-8333-1600-40</td><td>10 cm × 10 m</td></tr><tr><td>粘性创可贴</td><td>年轻的化学</td><td>BH1426015</td><td>10 cm × 10 m</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;解剖：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>标准直头尖/钝剪刀（14 cm）一对</td><td>Shinetec 仪器</td><td>ST-S114</td><td>-</td></tr><tr><td>Halstead-蚊子（12.5 厘米）</td><td>Shinetec 仪器</td><td>ST-H012</td><td>-</td></tr><tr><td>手柄（#4）</td><td>Shinetec 仪器</td><td>ST-H004</td><td>-</td></tr><tr><td>手术刀片（#21）</td><td>Shinetec 仪器</td><td>ST-B021</td><td>-</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;固定后处理 &amp;和储存：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml 塑料离心管&amp;nbsp;</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td>-</td></tr><tr><td>10% 中性缓冲福尔马林</td><td>Leica</td><td>3800604EG</td><td>-</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;细菌生长实验&amp;nbsp;&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>血琼脂平板（BAP）（含5%绵羊血的TSA）&amp;nbsp;</td><td>CMP</td><td>-</td><td>90 mm 单层</td></tr></tbody></table>

用于临床敷料评估的猪重度烧伤模型

Severe Burn Injury in a Swine Model for Clinical Dressing Assessment

伤口愈合是一个动态的修复过程，也是人类生命中最复杂的生物学过程。烧伤后，生物通路的改变会损害炎症反应，导致伤口愈合延迟。在糖尿病患者中，伤口愈合受损常导致截肢等不良后果。因此，亟需具有促进烧伤伤口修复作用的敷料。然而，由于缺乏合适的动物模型，烧伤伤口治疗的研究十分有限。我们之前的研究已采用微创外科技术，在大鼠和猪模型中验证了伤口愈合效果。本研究旨在建立一种严重的烧伤猪模型，该模型可消除伤口收缩，并更接近人类的再上皮化和新生组织形成过程。本方案提供了在猪模型中制备一致性烧伤伤口，并评估实验性敷料对伤口愈合效果的详细操作流程。在背部对称地制造六个烧伤伤口，覆盖由四层组成的临床敷料：内层接触层为实验材料，内中间层为防水膜，外中间层为纱布，外层为胶带。实验结束后，评估伤口闭合情况、伤口面积及温哥华瘢痕量表评分。动物安乐死后，取各动物的皮肤样本进行组织学制备，并采用苏木精-伊红染色。同时检测每种敷料在伤口愈合背景下的抗菌活性。在猪模型中应用临床敷料可模拟人类伤口愈合的上皮化、细胞增殖和血管生成等生物学过程。因此，该猪模型为评估临床敷料在严重烧伤中的作用提供了一种易于掌握、成本效益高且可靠的实验方法。

使用热铁造成30秒烧伤持续时间，产生的伤口呈圆形，边界清晰，颜色均匀苍白，周围伴有红斑环（图1D）。每只动物背部共有六个烧伤创面。烧伤创面的排列方式见图1K。创面完全覆盖含CAPS的敷料，用于评估烧伤后第0、7、21和42天的瘢痕形成深度以及再上皮化情况，再上皮化程度通过肉眼观察确定。根据肉眼观察，烧伤创面在烧伤后第42天完成再上皮化。在这些动物中，通过评估创面大小以确定创面愈合速率（图2A）。烧伤后第0、7、21和42天的创面面积分别为9、10、8和3 cm2。与烧伤第0天相比，烧伤第42天创面面积显著减小。愈合速率定义为从创面中心到创面边缘的最大平均距离除以创面完全闭合所需时间。使用含CAPS敷料处理的创面在烧伤后第42天达到73.43±6.33%的创面闭合率（图2B）。
<p class="jove_...

为了准确模拟烧伤的损伤模式，需要临床观察与动物模型研究之间的相互结合。本研究建立了一种猪的重度烧伤模型，用于在生理和病理生理条件下评估一种实验性敷料的效果。

伤口愈合是一个动态的修复过程，也是人类生命中最复杂的生物学过程。烧伤损伤发生后，机体在生物学上会发生一系列变化……

该方法有助于解答烧伤研究领域中的关键问题，例如战伤处理或火灾事故后烧伤创面的治疗。这种猪烧伤模型的主要优势在于猪与人类皮肤组织在解剖学和生理学结构上具有高度相似性。尽管该方法可为海藻酸钙多糖敷料对烧伤创面愈合的影响提供研究依据，也可应用于烧伤治疗管理的相关研究。在实施烧伤前，对一只麻醉的成年猪，从脊柱两侧的椎体一直延伸到腋窝处，剃除并润湿约25厘米宽的皮肤区域。然后，用聚维酮碘溶液擦洗暴露的皮肤约五分钟。使用湿润的无菌纱布擦去聚维酮碘皂液，并用聚维酮碘洗剂对清洁后的皮肤进行消毒。使用外科标记笔在动物背部标记出六个烧伤创面位置的中心。随后，用无菌手术单覆盖动物，注意确保各区域之间的距离大于区域本身的半径。当所有区域均标记完毕后，向经过改装、带有约9平方厘米平坦接触面的电烙铁中注入50毫升甘油，并将电子温度计插入电烙铁中以监测温度。将烙铁在加热板上加热至137至139摄氏度后，轻轻将烙铁按压在每个标记区域上，每个区域持续30秒，以制作六个均匀的烧伤创面。当加热的烙铁接触皮肤时，热量会立即在烧伤区域表面扩散，因此务必在实施烧伤前将烙铁和甘油预热至少10分钟。随后，用0.9%生理盐水冲洗创面，并通过显微摄影测量并记录创面尺寸。当所有伤口测量完毕后，将敷料直接贴于每个伤口上，随后在内层敷料上覆盖一层防水薄膜，以起到阻止细菌侵入的屏障作用。然后，在每个伤口上覆盖一块5厘米厚的纱布作为敷料的中间层，并用外层胶带固定纱布，将胶带延伸至躯干部位，以防止敷料移位。前10天每两天更换一次临床敷料，之后每周更换两次直至第42天，每次更换敷料前需按照温哥华瘢痕量表对伤口进行清洁和测量。在烧伤后第0、7、21和42天采集伤口拭子进行抗菌检测，将拭子置于100毫升0.9%无菌生理盐水中。轻轻涡旋震荡拭子以获得均匀悬浮液，并对所得细胞悬液进行系列稀释。然后取每种稀释液100微升接种于选择性或非选择性培养基中，在37°C有氧条件下培养24至72小时。孵育结束后，将每个稀释培养物中的10微升等分试样以三份重复接种于添加了5%羊血的血琼脂平板上，在37摄氏度下过夜培养。次日早晨，使用记号笔和小尺子将每个培养皿底部均分为四个相等的象限，并在解剖显微镜下确定每个象限中的菌落形成单位数量。在此项代表性实验中，烧伤后第42天通过肉眼观察评估烧伤创面的再上皮化情况。与第0天相比，伤口面积显著减小。愈合速率定义为伤口中心到伤口边缘的最大平均距离除以伤口完全闭合所需的时间，结果显示烧伤后第42天伤口闭合程度超过73%。温哥华瘢痕评分在烧伤后第21天达到峰值，到烧伤后第42天已下降至低于初始伤口大小的水平。第42天采集的皮肤样本的组织学检查证实，已形成全层烧伤，且伤口似乎已完全愈合。烧伤引起的坏死可在表皮、真皮及伤口的真皮组分中观察到，但未显著影响 underlying 肌肉。实验敷料下方的组织厚度为5.4毫米

severe-burn-injury-in-a-swine-model-for-clinical-dressing-assessment

Research

科研

JoVE Journal

Medicine

医学

猪临床敷料评价模型中的严重烧伤

对抗生素耐药的慢性伤口对医疗系统构成重大威胁。生物膜感染具有顽固性和破坏性，可导致伤口功能闭合不良。我们报道了一种具有临床相关性的猪源性全层慢性伤口生物膜感染模型。该模型在机制研究以及干预措施测试方面均具有强大应用价值。...

生物膜感染与隐性伤口的猪模型

本方案描述了一种在尤卡坦微型猪中可重复的多深度烧伤伤口模型。...

一种用于研究多种深度烧伤创面愈合过程的猪烧伤模型

大型动物模型在研究新生儿窒息的生理学和药理学方面具有良好的转化价值。我们采用新生仔猪建立了一种模拟新生儿窒息的实验方案，该模型有利于系统研究全身和局部血流动力学、氧转运及其与生化和病理通路之间的关联。...

一种新生仔猪缺氧窒息模型

介绍了一种严重的脊髓损伤挫伤模型。详细描述了为获得稳定模型所需的术前、术中和术后各个步骤。...

大鼠重度脊髓损伤挫伤模型

角膜新生血管（NV）可导致多种视觉病理并发症。通过使用可控的碱烧伤损伤模型，可产生可量化的角膜新生血管水平，用于角膜新生血管的机制研究以及针对新生血管性疾病的潜在疗法的评估。...

小鼠角膜新生血管的碱烧伤损伤模型

本方案通过一种新近引入的基于地面的光电细胞系统，用于评估神经科/骨科患者及老年人的空间和时间步态参数。...

患者及老年人步态时空参数的临床评估

[18F]氟代脱氧葡萄糖（FDG）正电子发射断层扫描-计算机断层成像可用于研究与脑功能相关的葡萄糖代谢。本文介绍了一种针对重度创伤性脑损伤患者中与临床表现相关的目标脑区，进行[18F]FDG示踪剂准备及感兴趣区域半定量评估的实验方案。...

使用[18F]FDG示踪剂对重度脑损伤患者进行半定量评估

提出一种通过手术切除所有眶部泪腺在兔体内诱导慢性干眼病的新型方法。该方法不同于以往报道的方法，可产生稳定且可重复的水样缺乏型干眼模型，非常适合用于研究泪液生理学与病理生理学以及眼表治疗药物。...

通过完全性泪腺切除术建立兔严重干眼模型

本文介绍了一种用于研究重建显微外科中缺血-再灌注损伤病理生理学的临床前动物模型。该模型基于大鼠浅表尾侧腹壁血管的游离皮瓣，还可用于评估不同疗法和化合物对缺血-再灌注损伤相关损害的拮抗作用。...

用于重建显微外科中缺血-再灌注损伤研究的临床前大鼠模型

本方案介绍了利用化学活检方法，随后进行全面的代谢组学和脂质组学分析，以评估分配用于移植的肾移植物质量。...

使用化学活检评估移植物质量

了解严重烧伤猪模型的建立方法，用于评估钙藻酸盐多糖敷料在烧伤创面愈合中的效果。该模型模拟人体皮肤结构，为烧伤治疗策略提供重要研究工具。

用于临床敷料评估的猪重度烧伤模型

探索更多视频