Name: 3维细胞培养系统研究膀胱癌侵袭和评价治疗方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-13T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: 学习利用三维细胞培养系统研究膀胱癌侵袭机制，通过肿瘤球状体实时监测侵袭过程并评估潜在治疗化合物。该方法为膀胱癌研究提供有价值的体外模型。

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作者感谢密歇根大学Howard Crawford博士实验室为本研究提供的技术支持以及材料和设备，同时感谢Alan Kelleher提供的技术支持。
本工作由密歇根大学罗格尔癌症中心核心资助 CA046592-26S3、NIH K08 CA201335-01A1（PLP）、BCAN YIA（PLP）以及 NIH R01 CA17483601A1（DMS）资助。

1. 培养肿瘤类球体
<ol>
	<li>细胞系培养
	<ol>
		<li>在常规贴壁细胞培养条件下培养人膀胱癌细胞，并置于含5% CO₂的37 °C培养箱中维持培养2. 将细胞维持在 &#60;90% 汇合度。 
		注意：本方案中使用的培养基为含4.5 g/L D-葡萄糖、L-谷氨酰胺、110 mg/L丙酮酸钠的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM），并全程添加10%胎牛血清（FBS）。</li>
		<li>实验开始前一天，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化细胞，定量细胞浓度，并将1 × 10⁶个细胞接种于培养容器中。6 6 孔超低吸附培养板中每孔加入 3 mL 培养基悬浮细胞。</li>
		<li>在37 °C下，于低吸附条件下孵育细胞，时间不少于16小时。此孵育时间应足以使大多数膀胱癌细胞系聚集成球状体。 
		注意：可使用倒置明场显微镜观察类球体的形成。类球体的最佳大小和数量可能因具体实验而异，但我们发现直径在50 µm至150 µm之间的类球体通常适用于使用20倍物镜进行延时成像。</li>
		<li>为将其他细胞类型（如成纤维细胞或免疫细胞）引入类球体，可按所需比例（1:1，1:10， 等等在超低吸附培养板中孵育 ≥16 小时，37 °C 条件下培养，以形成多种细胞类型的球状体。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>由原发性肿瘤生长 
	注意：肿瘤类球体也可来源于原发性膀胱肿瘤，例如由致癌物诱导的膀胱肿瘤模型所形成的肿瘤8例如，可将喂食N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺（BBN）后小鼠产生的膀胱肿瘤取出，切碎成小块（约0.5 mm）3使用无菌外科器械进行操作。该系统也可用于研究经消化处理的人类膀胱癌原代样本。
	<ol>
		<li>收集并清洗 0.5 mm3 5 mL 冰冷的磷酸盐缓冲液（PBS）中离心肿瘤组织块，200 x g 4 °C下离心5分钟。重复洗涤步骤一次。</li>
		<li>通过离心收集肿瘤组织块，离心条件为 200 x g 4 °C下离心10分钟。弃去上清液，加入5 mL含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基。将肿瘤类球体与培养基的混合物转移至6孔超低吸附培养板中。37 °C孵育至少16小时后，包埋于胶原基质中（见步骤2.3）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 准备三维培养室
<ol>
	<li>根据制造商说明，将1型胶原蛋白（源自大鼠尾部）用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM稀释，配制成2 mg/mL的混合液。
	<ol>
		<li>简言之，根据制造商说明，通过轻柔吹打，将胶原蛋白与适量的1 N NaOH溶液及DMEM混合，以达到生理pH值。</li>
		<li>混合胶原蛋白与DMEM后，需在凝固前迅速将胶原蛋白-DMEM混合液涂布于腔室载玻片的孔中（多数应用中，使用1.5号盖玻片的腔室载玻片效果最佳），每孔200 µL。将包被好的腔室载玻片于室温静置15分钟。 
		注意：可根据实验目的，在胶原蛋白基质中添加其他细胞外基质成分（如纤连蛋白或层粘连蛋白）以调整基质组成。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>从6孔超低吸附培养板中，轻柔吹打500 µL含有类球体（或肿瘤组织块，若使用原代肿瘤样本）的培养基至一个空的1.5 mL微量离心管中。静置2分钟，使类球体沉降至管底。</li>
	<li>小心移除上清液。另取一管已与含10% FBS的DMEM混合的1型胶原蛋白（2 mg/mL），迅速加入500 µL至含有类球体的管中。通过缓慢吹打，轻柔混匀类球体与胶原蛋白。</li>
	<li>取250 µL类球体/胶原蛋白混合液加入已预先包被胶原蛋白的腔室载玻片孔中。使含有类球体的胶原蛋白基质完全凝固（约在37 °C下30分钟）。</li>
	<li>待胶原蛋白基质完全凝固后，向每孔加入1 mL含10% FBS的DMEM（图1B）。将腔室载玻片置于37 °C、含5% CO2 的培养箱中孵育，直至准备成像。</li>
</ol>
3. 活细胞延时成像
<ol>
	<li>按照制造商的说明开启共聚焦显微镜，并确保气候箱达到 37 °C 且供应 5% CO₂2. 
	注意：我们的显微镜和培养腔通常需要1小时才能达到系统平衡。</li>
	<li>将腔室载玻片小心转移至显微镜上连接的载玻片适配器中。</li>
	<li>使用低倍物镜定位目标类球体例如，5倍）并使用高倍物镜开始成像（在本方案中，大多数活细胞成像采用20倍物镜，因其成像质量更佳）。 
	注意：对于原发性膀胱肿瘤样本，可能需要使用5倍和10倍物镜以覆盖更大的成像区域。在进行延时成像时，成像时间间隔设置为30分钟，并采用Z轴层扫技术对整个类球体进行成像。通常情况下，使用20倍物镜时Z轴切片间距设置为4 µm，Z轴总扫描距离约为200 µm。若细胞或组织表达荧光蛋白标记物，可同时获取微分干涉差（DIC）图像和荧光图像。</li>
	<li>进行24–72小时的延时成像。 
	注意：孵育时间取决于细胞类型和实验需求。</li>
</ol>
4. 用于冷冻组织切片的含癌球状体样本块的制备
<ol>
	<li>使用小镊子小心地将胶原凝胶块及类球体从腔室载玻片中取出，放入塑料组织学模具中。</li>
	<li>用1×PBS短暂冲洗胶原凝胶，随后在室温下用PBS配制的4%多聚甲醛（PFA）固定30分钟。 
	注意：PFA具有潜在致癌性，操作时应格外小心。</li>
	<li>将胶原凝胶置于摇床上，用1.5 mL 1×PBS洗涤15分钟。更换PBS后，重复此洗涤步骤3次。</li>
	<li>在新的塑料组织学模具底部涂布一层薄薄的（约3 mm）最佳切削温度（OCT）包埋剂。将已固定并洗涤的胶原凝胶置于OCT包埋剂上，然后小心地用OCT包埋剂填满模具，完全包埋整个凝胶，同时避免产生气泡。</li>
	<li>将模具置于4 °C环境中1小时。</li>
	<li>将含有样品和OCT包埋剂的模具放置于漂浮在液氮中的100 mm培养皿上，使样品迅速完全冷冻。</li>
	<li>将冷冻后的样品块储存于-80 °C，以备后续使用。</li>
</ol>
5. 冷冻切片肿瘤类器官的免疫荧光成像
<ol>
	<li>将冷冻样品块从 -80 °C 冰箱转移至冰冻切片机的 -20 °C 冷室中。</li>
	<li>设置切片间隔为 7 µm，进行常规冷冻切片。确保切下的样品平整贴附于载玻片上，无皱褶或气泡。
	<ol>
		<li>染色前将载玻片存放于 -80 °C 冰箱中。 
		注意：可根据实验需求调整切片间隔。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>室温下将载玻片空气干燥 1 小时。</li>
	<li>用含 0.5% Triton X-100 的 PBS 处理样品，透化 15 分钟。</li>
	<li>用 PBS 洗涤样品 3 次，每次 10 分钟。</li>
	<li>使用疏水屏障笔在载玻片上围绕样品画出疏水性边界。</li>
	<li>用封闭液（含 5% 牛血清白蛋白（BSA）的 1x PBS）在室温下处理样品 1 小时。</li>
	<li>向载玻片上的每个样品加入 40 µL 含一抗的溶液（含 5% BSA 的 1x PBS，一抗稀释比例为 1:100）。</li>
	<li>将载玻片在 37 °C 孵育 1 小时，或在室温下孵育过夜（孵育时间和条件根据一抗种类而定）。</li>
	<li>用 PBS 洗涤样品 3 次，每次 15 分钟。</li>
	<li>向载玻片上的每个样品加入 40 µL 含二抗的溶液（含 5% BSA 的 1x PBS，二抗稀释比例为 1:300）。</li>
	<li>用 PBS 洗涤样品 3 次，每次 15 分钟。</li>
	<li>用 Hoechst 33342 溶液（1 µg/mL，用 PBS 稀释）在室温下染色 10 分钟，随后用 PBS 洗涤 5 分钟。</li>
	<li>用封片剂封片，并加盖合适尺寸的盖玻片。将载玻片置于室温避光环境中 24 小时，然后进行共聚焦显微镜观察。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在竞争性财务利益。

本文介绍了一种三维肿瘤球体模型，可实现对膀胱癌侵袭过程的实时观察，而膀胱癌侵袭对于癌症进展和转移至关重要。该系统可整合多种间质和细胞成分，使研究人员能够更真实地模拟膀胱癌侵袭发生的组织微环境。膀胱癌肿瘤球体可通过多种来源制备，例如细胞系（包括适用于研究影响侵袭过程信号通路的基因修饰细胞系）以及小鼠原位肿瘤（本文中已描述）。该模型未来还可能被用于人类原位肿瘤的分析。根据所使用的成像系统，可实时监测荧光信号，或在不同时间点通过固定样本并进行免疫荧光染色来检测。该系统还可用于测试潜在的侵袭抑制剂。因此，该模型是一种多功能且强大的工具，可用于评估膀胱癌生物学特性。
配备气候室的共聚焦显微镜系统，可提供温度控制、湿度控制和CO2供应，是构建本方案所述模型的关键设备。
已有大量报道表明，三维培养可提供特殊的微环境，更接近地模拟细胞生物学和癌症研究中的天然组织19,20许多研究依赖于可渗透膜插入式检测，...

侵袭是癌症进展中的关键步骤，与转移密切相关，并且与患者的生存率降低和预后不良相关。在人类膀胱癌中，这是全球每年导致约16.5万人死亡的泌尿系统最常见恶性肿瘤，癌症的分期、治疗方案和预后直接取决于是否存在侵袭1。大约75%的膀胱癌病例为非肌层浸润性，通常采用局部切除进行治疗。相比之下，肌层浸润性膀胱癌（约占所有病例的25%）属于侵袭性强的肿瘤，具有较高的转移率，需采用积极的多模式综合治疗2,3。因此，深入了解触发侵袭的分子通路，对于更准确地评估侵袭性进展的风险以及开发能够阻止侵袭性进展的治疗干预措施至关重要。
肿瘤侵袭性进展发生在一个复杂的三维（3-D）环境中，涉及肿瘤细胞与其他肿瘤细胞、间质、基底膜以及包括免疫细胞、成纤维细胞、肌细胞和血管内皮细胞在内的多种细胞类型的相互作用。可渗透支持系统（例如，Transwell）常被用于定量分析癌细胞的侵袭能力4，但这些系统存在局限性，因其无法实现对侵袭过程的实时显微监测，且难以回收样本以进行后续染色和分子分析。建立一种用于研究侵袭的三维膀胱肿瘤类球体系统具有重要意义，因为它既可整合明确的微环境组分，又具备体外（in vitro）系统的操作便利性。
在本实验方案中，我们描述了一种利用基于胶原蛋白的凝胶基质结合共聚焦显微镜的三维球状体侵袭实验系统，用于研究人膀胱癌细胞的侵袭过程，使研究人员能够实时监测细胞的运动性与侵袭行为（图1A）。该系统具有良好的可变性和适应性，可经修改后用于研究多种肿瘤微环境/肿瘤相互作用模型。该系统可适用于大多数膀胱癌细胞系或原代膀胱肿瘤组织，并可加入其他间质细胞，如癌症相关成纤维细胞和免疫细胞5,6,7。本方案所描述的基质由I型胶原蛋白组成，但也可根据需要进行调整，加入纤连蛋白、层粘连蛋白或其他胶原蛋白等分子。根据所用显微镜和系统的性能，可对侵袭过程进行长达72小时或更长时间的连续观察。在侵袭发生前、过程中及完成后，对嵌入三维基质中的肿瘤进行固定和免疫荧光染色，可检测侵袭性细胞中上调表达的蛋白质，从而提供其他三维培养模型通常无法获得或难以获取的关键信息。该系统还可用于筛选抑制侵袭的化合物，并阐明这些化合物所影响的信号通路。

<table><tbody><tr><td>人膀胱癌细胞系 UM-UC9、UM-UC13、UM-UC14、UM-UC18、253J</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM 细胞培养基</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11995065</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌剂（100 倍浓度）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA（0.25%），含酚红</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3803</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.4&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Costar 超低吸附 6 孔板&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>常规倒置显微镜&amp;nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td>491206-0001-000</td><td>用于细胞培养和类球体观察</td></tr><tr><td>大鼠尾部 I 型胶原蛋白，高浓度&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>354249</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek II 多孔腔载玻片</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>155382</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜&amp;nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td>LSM800</td><td>配备气候腔、多点成像和 Z 轴层扫功能的共聚焦显微镜&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>冷冻切片机</td><td>Leica Biosystems</td><td>CM3050 S</td><td></td></tr><tr><td>Zen 2 图像处理软件&amp;nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛溶液</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>ImmEdge 疏水屏障 PAP 笔</td><td>Vector Laboratories&amp;nbsp;</td><td>H4000</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. 包埋剂&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23730571</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 溶液&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62249</td><td></td></tr><tr><td>抗 ATDC（Trim29）抗体</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HPA020053</td><td></td></tr><tr><td>抗细胞角蛋白 14 抗体</td><td>Abcam</td><td>ab7800</td><td></td></tr><tr><td>抗波形蛋白抗体</td><td>Abcam</td><td>ab24525</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Diamond&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>封片剂</td></tr></tbody></table>

用于研究膀胱癌侵袭及评估治疗药物的三维细胞培养系统

3-D Cell Culture System for Studying Invasion and Evaluating Therapeutics in Bladder Cancer

膀胱癌是一个重要的健康问题。据估计，今年美国将有超过16,000人死于膀胱癌。尽管75%的膀胱癌为非浸润性，且不易发生转移，但约有25%会进展为浸润性生长模式。高达一半的浸润性癌症患者将发展为致命的转移性复发。因此，理解膀胱癌浸润性进展的机制对于预测患者预后并防止致命性转移至关重要。本文介绍了一种三维癌症浸润模型，该模型可整合肿瘤细胞和间质成分，以模拟膀胱肿瘤微环境中发生的in vivo条件。该模型提供了利用延时成像实时观察浸润过程的机会，可通过共聚焦免疫荧光成像研究参与其中的分子通路，并可筛选具有抑制浸润潜力的化合物。尽管本实验方案聚焦于膀胱癌，但类似的方法也可能用于研究其他肿瘤类型的浸润与运动能力。

成功构建侵袭性膀胱癌肿瘤类球体需要从细胞系或原发肿瘤中形成大小合适的肿瘤类球体。图2A展示了由四种人膀胱癌细胞系（UM-UC9、UM-UC13、UM-UC14、253J和UM-UC18）形成的大小合适的类球体。图2B展示了来自BBN诱导的小鼠膀胱肿瘤的肿瘤类球体，该类球体被包埋于胶原基质中。这些类球体按上述方法进行包埋，并使用配备活细胞成像功能的显微镜采集代表性图像。UM-UC9、UM-UC13、UM-UC14和UM-UC18类球体成像采用20倍物镜，而小鼠膀胱肿瘤类球体则使用5倍和10倍物镜进行观察。
人膀胱细胞系类球体在培养24–72小时后（图2A）以及小鼠BBN原发性膀...

调控膀胱癌侵袭的过程为生物标志物和治疗策略的开发提供了机遇。本文介绍一种膀胱癌侵袭模型，该模型结合了肿瘤类球体的三维培养、延时成像和共聚焦显微镜技术。该技术可用于定义侵袭过程的特征，并用于治疗药物的筛选。

膀胱癌是一个重大的健康问题。据估计，今年美国将有超过16,000人死于膀胱癌。

侵袭性进展是膀胱癌患者临床预后的重要决定因素。本文将介绍一种简单的体外实验方法，该方法利用细胞系或原发肿瘤生成的肿瘤球体来研究侵袭过程。该技术的主要优势在于能够实时监测癌症侵袭过程，并可在实验结束时通过免疫荧光染色对样本进行分析。该技术可进行调整以引入其他细胞类型，例如成纤维细胞或免疫细胞。它也可用于测试可能有助于抑制侵袭的化合物。成功的关键因素包括优化肿瘤类球体的形成及其在胶原中的包埋、使用具有合适工作距离的适当显微镜，以及采用恰当的免疫染色步骤。开始从细胞系生成球状体时，先在常规贴壁细胞培养条件下培养人膀胱癌细胞。实验前一天，用胰蛋白酶消化细胞，并将1,000,000个细胞悬浮于3毫升细胞培养基中，接种至6孔板的每个孔内。随后，在37摄氏度的低吸附条件下培养细胞至少16小时。为了从原发性肿瘤生成球状体，用5毫升冰上预冷的PBS收集并清洗0.5立方毫米的肿瘤组织块。在4摄氏度下以200 × g离心5分钟。随后，在4摄氏度下以200 × g再次离心10分钟，通过离心收集肿瘤组织块。然后去除上清液，加入5毫升添加了10% FBS的DMEM。将肿瘤类球体混合培养基转移至6孔超低吸附培养板中。随后在37°C条件下孵育至少16小时。首先，将I型胶原蛋白溶于添加了10%胎牛血清（FBS）的DMEM中，配制成2毫克/毫升的混合液。然后迅速用该混合液包被腔室载玻片的孔。将腔室载玻片在室温下静置15分钟。此后，用移液器轻轻将500 µL类球体培养基从超低吸附培养板转移至1.5 mL微量离心管中。然后静置2分钟，使类球体沉降至管底。小心吸除上清液。然后迅速向类球体中加入500毫升新鲜的胶原蛋白DMEM混合液。用移液器轻轻吹打，使类球体与胶原蛋白充分混匀。接着将250微升类球体-胶原蛋白混合液加入已包被胶原蛋白的腔室载玻片的孔中。让含有类球体的胶原蛋白基质完全凝固。胶原蛋白基质凝固后，向培养插片的每个孔中加入1毫升添加了胎牛血清（FBS）的DMEM培养基。然后将培养插片置于37°C、5%CO2条件下孵育。根据制造商的说明准备共聚焦显微镜，并确保培养箱环境达到37摄氏度且提供5% CO2。然后将腔室载玻片转移至显微镜载物台适配器。使用低倍物镜定位目标类球体，随后切换至高倍物镜开始成像，并进行24至72小时的延时成像。首先，使用小镊子将胶原凝胶块及类球体从培养皿中取出。然后将胶原凝胶块放入塑料组织学模具中。用1×PBS短暂冲洗胶原凝胶块。在室温下用 4% PFA 和 PBS 固定 30 分钟。随后，在摇床上用 1.5 毫升 1x PBS 洗涤胶原凝胶块 15 分钟。在新的塑料组织学模具底部涂上一层薄薄的 OTC 包埋剂。然后将固定并洗涤后的胶原凝胶块置于OCT包埋剂上，再小心地用OCT包埋剂填满模具的其余部分。将模具置于4摄氏度环境中保持1小时。之后，将模具放在漂浮于液氮上的100毫米培养皿上进行速冻，并将样品储存在-80摄氏度条件下。将冷冻的样品块转移至冷冻切片机的负20摄氏度环境中。随后以7微米的切片间隔进行常规冷冻切片。之后，在室温下将载玻片空气干燥一小时。然后用含有0.5% Triton X-100的PBS孵育样本15分钟以进行通透处理。接着用PBS洗涤样本三次，每次10分钟。然后用疏水性屏障笔在样本周围画圈。将样品在室温下用封闭液处理一小时。然后向每个样品中加入40 µL含一抗的溶液。在37°C下孵育载玻片一小时。此后，用 PBS 洗涤样品，每次 15 分钟，共洗涤三次。接着，向每个样品中加入 40 µL 含二抗的溶液。然后，再用 PBS 洗涤样品，每次 15 分钟，共洗涤三次。在室温下用 Hoechst 33342 溶液染色样品 10 分钟。随后用 PBS 洗涤样品 5 分钟。用封片剂封片，并加盖盖玻片。最后，在进行共聚焦显微镜观察前，将载玻片置于室温避光环境中孵育24小时。在本实验方案中，侵袭性膀胱癌肿瘤类球体由细胞系和原发性肿瘤形成。代表性延时视频展示了膀胱癌肿瘤类球体侵入胶原基质的过程。代表性延时视频展示了单独培养或与RFP标记的成纤维细胞共培养的GFP标记膀胱癌肿瘤类球体的侵袭行为。为验证使用蛋白质标志物免疫荧光染色的可行性，对类球体在24小时或72小时后进行固定、切片和染色。UM-UC-14类球体的高倍镜视野显示，共济失调毛细血管扩张症D组相关蛋白呈丝状染色。UM-UC-18 类球体在侵袭24小时后扩散出的高侵袭性细胞，表达高水平的波形蛋白（Vimentin），即上皮-间质转化的标志物。该检测方法适用于对膀胱癌侵袭的药理学抑制剂进行有限筛选。此处使用细胞松弛素D作为抑制侵袭的药理学示例。本文描述了一种可用于实时观察膀胱癌侵袭过程的模型。该系统可整合多种间质和细胞成分，使研究人员能够更真实地模拟膀胱癌侵袭发生的组织微环境。该系统不仅为研究三维环境中的癌细胞侵袭提供了有效的工具，还可用于对具有抑制癌细胞侵袭潜力的药理化合物进行初步筛选。

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科研

JoVE Journal

Cancer Research

癌症研究

3维细胞培养系统研究膀胱癌侵袭和评价治疗方法

实体瘤中的间质液流动增强，可调节肿瘤细胞的侵袭。本文介绍一种将间质液流动施加于嵌入基质中的细胞，进而测量其对细胞侵袭影响的技术。该技术可轻松适用于其他系统的相关研究。...

用于测量间质流体流动对肿瘤细胞侵袭影响的三维细胞培养模型

本视频提供了一种在三维基底膜蛋白基质中培养乳腺癌细胞的详细方法，展示了三维培养在评估细胞向周围环境侵袭潜力方面的应用价值。...

三维培养基底膜实验：在三维基底膜蛋白基质中培养癌细胞以研究细胞侵袭

本文详细介绍了利用三维（3D）实验方法定量分析乳腺癌细胞侵袭的技术。具体而言，我们讨论了建立此类实验所需的步骤、定量方法与数据分析，以及检测细胞侵袭过程中细胞膜完整性丧失的相关方法。...

三维模型定量分析乳腺癌细胞侵袭性

侵袭周围正常组织是恶性肿瘤的一个显著特征。本文提供了一种简单且半自动化的微孔板检测方法，用于检测细胞对天然三维生物基质的侵袭能力，该方法已成功应用于多种人类晚期癌症模型。...

三维（3D）肿瘤球体侵袭实验

该方法用于评估癌细胞从类球体向周围三维基质的侵袭。类球体通过悬滴培养法生成，随后包埋于含有基底膜成分和I型胶原的基质中，继而监测类球体外的侵袭情况。...

一种用于在三维环境中评估癌细胞球体侵袭能力的实验方法

将癌细胞嵌入胶原凝胶中，然后夹在无细胞的纤维蛋白凝胶内，以构建一种三维培养系统，在该系统中可监测癌细胞的侵袭性及卫星肿瘤的形成。...

三维培养实验用于探究癌细胞侵袭性及卫星肿瘤形成

本方案提供了建立源自致癌物诱导的小鼠膀胱癌的膀胱肿瘤类器官的三维体外培养的详细实验步骤。文中描述了肿瘤类器官的传代、基因工程改造以及原位移植等培养方法。...

小鼠膀胱肿瘤类器官的培养、操作及原位移植

该方法可同时评估三维球状体实验中的癌细胞侵袭和T细胞介导的细胞毒性。球状体在无支架的琼脂糖多微孔模具中生成。共培养及包埋于I型胶原基质均在同一装置内完成，从而可实时监测癌细胞的侵袭行为以及T细胞介导的细胞毒性效应。...

在三维培养中监测癌细胞侵袭和T细胞毒性

患者来源的类器官（PDOs）是转化癌症研究中的有力工具，能够反映疾病的遗传和表型异质性以及对个体化抗癌治疗的响应。本文详细描述了一种用于建立人类原发性膀胱癌PDOs的整合性实验方案，为后续开展表型分析和药物反应评估做好准备。...

膀胱癌类器官培养作为精准医学工具

我们介绍一种实时检测和捕获侵袭性细胞亚群的方法。该实验设计通过监测细胞电阻抗的变化，采用实时细胞分析技术。可在复杂组织中捕获侵袭性癌细胞、免疫细胞、内皮细胞或间质细胞，并评估共培养的影响。...

共培养物中侵袭性细胞亚群的实时检测与捕获

侵袭是癌症发生与进展过程中的一个重要生物学现象。该过程受到肿瘤微环境中非肿瘤性细胞及各种组分的影响。本研究旨在描述一种用于分析肿瘤细胞侵袭的替代方法 体外...

分析三维培养物体外细胞侵袭的替代策略

学习利用三维细胞培养系统研究膀胱癌侵袭机制，通过肿瘤球状体实时监测侵袭过程并评估潜在治疗化合物。该方法为膀胱癌研究提供有价值的体外模型。

用于研究膀胱癌侵袭及评估治疗药物的三维细胞培养系统

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