Name: 生物芯片微流控技术在血清过敏源特异性免疫球蛋白 E (sIgE) 检测中的应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: 了解基于微流控芯片化学发光技术的血清特异性免疫球蛋白E检测方法，用于诊断过敏性鼻炎和哮喘等过敏性疾病。该技术具有成本低、样本用量少、操作简便等优势，适用于呼吸道、食物及皮肤过敏原检测。

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作者感谢姜梅教授在统计分析方面的帮助，以及崔锤先生在稿件撰写过程中的协助。本研究由广州市科技计划项目（201804020043）和国家自然科学基金（NSFC 81572063 和 NSFC 81802076）资助。资助机构同意本研究的设计、数据分析、稿件撰写及发表决定。本研究未获得其他资金支持。

本研究及人血清样本的使用已获得广州医科大学附属第一医院伦理委员会（GYYY-2016-73）的批准。所有参与者均独立签署书面知情同意书，或由其父母代为签署（针对儿童参与者）。
1. 研究组的基本信息
注意：国家呼吸系统疾病临床医学研究中心过敏信息库（AIR-SKLRD）是建于广州呼吸健康研究院（GIRH）内部的一个大型血清样本库。该样本库于十年前启动，已开始系统收集和储存过敏性疾病患者的血清样本及其临床资料（表1）4,5。本研究使用的血清样本均来自AIR-SKLRD。
<ol>
	<li>在 AIR-SKLRD 数据库中检索 2015 年 1 月至 2018 年 6 月期间采集的血清样本，筛选出对该地区常见过敏原敏感的过敏性疾病患者。</li>
	<li>确认所有入选患者均患有过敏相关疾病，例如过敏性鼻炎和/或哮喘、过敏性皮炎和/或荨麻疹，并且通过系统 1 检测发现这些患者的血清中含有针对该地区常见过敏原的多种血清特异性免疫球蛋白 E（sIgE）致敏反应。</li>
	<li>排除病历资料不完整、失访、拒绝签署关于其血清样本用于科研目的知情同意书、已确诊存在免疫缺陷、正在接受免疫治疗或免疫调节药物治疗，或被发现患有寄生虫感染的患者。</li>
	<li>确保在采集血清前未给予任何治疗或药物处方，以尽量减少对实验室检测结果的干扰。所有不符合上述标准的血清样本均被剔除。</li>
</ol>
2. 研究流程与关注的测量指标
注意：微流控系统检测19种过敏原需要100 µL血清。使用含分离胶的真空采血管从每位患者采集静脉血5 mL。在1,000 × g条件下离心10分钟后，收集上层液体用于检测。未使用的血清储存于-80 °C。检测前，将血清在室温放置30分钟，并用涡旋混合器振荡混匀。避免反复冻融。
<ol>
	<li>主要检测血清样本中针对以下完整变应原的特异性IgE（sIgE）：粉尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus，d1）、屋尘螨（Dermatophagoides farinae，d2）、热带无爪螨（Blomia tropicalis，d201）、猫皮屑（e1）、狗皮屑（e5）、百慕大草（g2）、梯牧草（g6）、蟑螂（i6）、烟曲霉（Aspergillus fumigatus，m3）、白色念珠菌（Candida albicans，m5）、豚草（w1）、蛋清（f1）、牛奶（f2）、小麦（f4）、花生（f13）、大豆（f14）、杏仁（f20）、蟹（f23）和虾（f24）。操作步骤遵循第3节中的说明。 
	注意：sIgE检测使用变应原特异性IgE检测试剂盒（见材料表），并通过化学发光分析仪进行测定。</li>
	<li>从血清量充足（至少900 µL）的样本中随机选取三个样本，用于重复性研究。在所有条件保持不变的情况下，连续9天每天测定这三份血清样本的变应原sIgE水平（即总共消耗 100 × 9 = 900 µL 血清）。</li>
</ol>
3. 微流控系统的半自动化测试流程
注意：系统2集成了自动微流控技术、蛋白质微阵列、冷光分析、并行IgE分析和图像处理技术。检测流程分为四个部分：仪器准备、加样、孵育和检测。
<ol>
	<li>设备准备
	<ol>
		<li>打开电脑和分析仪电源。 
		注意：电源开关位于底座左侧。</li>
		<li>在电脑上启动 LabIT 程序。如果弹出暗场警告窗口，请点击确定以运行LEAK 测试。随后，点击中央标志进入操作界面。 
		注意：若系统闲置超过 24 小时，将提示用户运行LEAK 测试。</li>
		<li>检查屏幕右下角的反应温度和 CCD（电荷耦合器件）温度。反应温度应在约 10 分钟内升至 37 °C ± 1 °C，CCD 温度应降至 -15 °C ± 1 °C。</li>
		<li>当 CCD 温度降至 -15 °C ± 1 °C 后，运行LEAK 测试。在运行 LEAK 测试前，确保仪器内部无其他物品残留，并关闭门。点击工具 | 系统测试 | LEAK 测试。测试过程中请勿打开门。测试完成后，报告窗口将自动弹出。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>加样
	<ol>
		<li>向微流控芯片的相应试剂槽中加入 620 µL 洗涤缓冲液、120 µL 封闭缓冲液、60 µL 共轭物 A 和 B、60 µL 底物 A 和 B，以及 100 µL 血清样本。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>孵育
	<ol>
		<li>点击芯片 ID，使用条形码扫描仪扫描芯片序列号，输入样本 ID，将芯片放入分析仪中并关闭门，然后点击分析仪和运行以开始分析。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>检测
	<ol>
		<li>检测完成后，将结果导出至统计软件（例如 Excel）。 
		注意：孵育 30 分钟后，分析仪将自动进行检测并报告结果。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>关闭分析仪
	<ol>
		<li>常规维护时，测试结束后取出芯片，并用 75% 酒精轻轻擦拭分析仪内部加热板和电磁铁。 
		注意：请勿用力按压或晃动电磁铁。</li>
		<li>关闭 LabIT 窗口。温度监控窗口将弹出，当 CCD 升温至 5 °C 保护模式时，该窗口将自动关闭。此时方可安全关闭分析仪和电脑的电源。 
		注意：在 CCD 温度升至 5 °C 前，请勿手动关闭温度监控窗口，且在 CCD 升温过程中不得关闭分析仪或电脑电源。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. sIgE 反应性的定义
注意：对于未稀释的血清样本，System 2 的检测范围为 0.21–100 IU/mL。
<ol>
	<li>根据 0.35 IU/mL 的阈值，若 sIgE 水平超过 0.35 IU/mL，则视为阳性6,7。将 sIgE 检测的反应性分为以下等级8：1 级（≥0.35 且 &#60;0.70 IU/mL）、2 级（≥0.70 且 &#60;3.50 IU/mL）、3 级（≥3.50 且 &#60;17.50 IU/mL）、4 级（≥17.50 且 &#60;50.00 IU/mL）、5 级（≥50.00 且 &#60;100.00 IU/mL）和 6 级（≥100.00 IU/mL）。</li>
</ol>
5. 统计分析
<ol>
	<li>使用直方图显示19种过敏原的阳性率（图1），并使用Levey-Jennings曲线展示检测系统的重复性（图2）9。</li>
	<li>选择最常见的三种吸入性过敏原和三种食物过敏原（共六种过敏原），将其检测结果与I System 1进行比较，以评估其临床诊断性能10,11。评估指标包括符合率、灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，以及受试者工作特征曲线（ROC曲线）下的面积（AUC）。</li>
	<li>采用Spearman相关性分析12描述两种系统之间的相关性，并使用kappa值评估一致性。将kappa值分为几乎完全一致（0.8–1.0）、实质性一致（0.6–0.8）、中等程度一致（0.4–0.6）、一般一致（0.2–0.4）或一致性差（&#60;0.2）13。使用SPSS 23.0和MedCalc 11.0进行统计分析，并将P &#60; 0.05定义为具有统计学意义。</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

与许多其他研究的结果相似15,16,17，基于293例过敏患者血清的微流控系统检测结果显示，尘螨（包括D. pteronyssinus、D. farinae和B. tropicalis）是中国南方地区导致过敏性疾病的主要吸入性过敏原，而在食物过敏原中，牛奶、花生、虾和蟹是最常见的引起过敏症状的过敏原。针对三种过敏原进行的重复性研究均显示出良好结果，总体重复率达到88.89%，表明其符合最大允许误差范围。
以系统1为参考，本研究评估了系统2的临床诊断效能。以血清sIgE水平0.35 IU/mL作为临界值2，若样本sIgE &#62; 0.35 IU/mL，则提示患者对该过敏原敏感，且滴度越高，与患者症状的相关性越好18。结果显示，三种吸入性过敏原的一致...

过去几十年中，过敏的患病率持续上升，已影响全球20%至30%的人口1。明确致敏过敏原对于疾病管理具有重要意义。在中国，由于缺乏注册的体内皮肤点刺试验，体外检测血清特异性IgE是I型过敏诊断最重要且最常用的工具2。这一做法与西方国家类似；然而，尽管ImmunoCAP系统（System 1）——一种基于荧光酶联免疫吸附的检测系统——被视为体外过敏诊断的金标准3，但由于其设备和试剂价格昂贵，在中国的应用极为有限。因此，亟需一种性价比高的新型替代性过敏诊断系统。
BioIC系统（系统2）是一种基于化学发光原理的微流控芯片系统，用于血清特异性IgE的多重检测。该微流控芯片尺寸为7 cm × 4 cm，由三层注塑成型塑料构成。上层为3 mm厚的透明聚碳酸酯，具有良好的热组装稳定性；下层为3 mm厚的丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物（ABS）材料；中间层为0.5 mm厚的硅橡胶，夹在上下两层之间。中间层呈黑色，可在化学发光检测过程中降低背景信号。在硅胶层上方，于反应区对应位置喷涂有一层薄硝酸纤维素膜（NC膜），可用于点样多种不同的变应原蛋白。本研究旨在评估该微流控系统在血清中变应原特异性IgE多重检测中的临床性能。

<table><tbody><tr><td>Agnitio BioIC 分析仪</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>BioIC 过敏原特异性IgE检测试剂盒</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC 芯片放置板</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC 试剂分配仪</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>二维条形码图像扫描仪</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>软件包，LabIT</td><td>Agnitio Science &amp; Technology(中国台湾)</td><td>版本 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 涡旋混合器</td><td>海门市麒麟贝尔实验室仪器有限公司</td><td>VORTEX-5</td><td></td></tr></tbody></table>

生物芯片微流控技术在血清特异性免疫球蛋白e（sige）过敏原检测中的应用

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

过敏性疾病在成人和儿童中均较为常见。明确致敏过敏原对于疾病的管理和预防具有重要意义。然而，目前中国大陆地区，尤其是在基层医疗机构，尚缺乏性价比高的特异性免疫球蛋白E（IgE）检测系统。本文介绍了基于微流控芯片的化学发光系统检测血清中过敏原特异性IgE的原理及操作流程，并将检测结果与行业标准方法ImmunoCAP（系统1）进行比较，同时评估该系统对常见过敏原致敏患者检测的重复性。结果表明，与ImmunoCAP（系统1）相比，BioIC系统（系统2）在检测针对多种吸入性和食物过敏原的血清特异性IgE时具有良好的精密度和灵敏度，且成本显著降低。该系统可作为中国大陆经济承受能力较弱的基层医疗机构中替代系统1的良好选择。

19种常见过敏原的阳性率 
293份血清的结果如图3所示。在所有吸入性过敏原中，D. farinae的阳性率最高（80.89%，273/293），其次为D. pteronyssinus（78.84%，231/293）。在食物过敏原中，螃蟹的阳性率最高（20.48%，60/293），其次为虾（13.65%，40/293）。吸入性过敏原的总阳性率高于食物过敏原。
微流控系统的重复性 
基于九轮测试，猫皮屑、狗皮屑和蟑螂的重复性结果分别为 32.98 ± 8.94、1.61 ± 0.48 和 0.76 ± 0.18，一致性水平分别为 100%（9/9）、100%（9/9）和 67%（6/9）。结果分布情况通过 图2 中的Lev...

本文介绍了一种基于微流控芯片化学发光系统的血清特异性免疫球蛋白E检测方法，并评估了其在过敏诊断中的应用价值。

生物芯片微流控技术在血清特异性免疫球蛋白E（sIgE）过敏原检测中的应用

过敏性疾病在成人和儿童中均较为常见。明确致敏过敏原对于疾病的管理和预防具有重要意义。

生物芯片微流控技术系统是一种基于微流控卡盒的检测平台，利用化学发光原理测定血清特异性IgE。与其他检测方法相比，该生物IC系统具有成本低、所需血清量少等优势，适用于血清IgE的检测。该技术的应用前景主要在于过敏性疾病（如鼻炎和哮喘）的诊断，因为许多此类患者对常见的可检测过敏原存在致敏反应。尽管该方法可为呼吸道过敏性疾病提供研究依据，但也适用于其他情况，例如食物过敏和皮肤过敏。由于该技术更易于使用，且对操作人员的培训要求较低，因此新接触该系统的人员能够快速掌握其操作。该操作过程的清晰演示至关重要，因为其直接决定检测是否成功，并需要熟练的手动操作技能。为了检测血清样本中针对完整过敏原的血清免疫球蛋白E抗体，随机选取三份血清量至少为900微升的样本，并从试剂盒中取出芯片并编号。然后，打开计算机和分析仪电源。在计算机上启动Lab IT程序。如果暗场校准警告窗口弹出，请点击“确定”以运行泄漏测试，然后点击中心标志进入操作界面。检查反应温度和电荷耦合器件（CCD）温度，反应温度应在约10分钟内升至37±1°C，CCD温度应降至-15±1°C。当CCD温度降至-15±1°C后，请确认仪器内部无其他物品遗留，然后关闭门。然后点击工具、系统测试、漏液测试。测试完成后，报告窗口将弹出。接下来，向微流控芯片上相应的试剂槽中加入 620 µL 洗涤缓冲液、120 µL 封闭缓冲液、60 µL 结合物 A 和 B、60 µL 底物 A 和 B，以及每份血清样本各 100 µL。单击试剂盒编号后，使用条形码扫描仪扫描试剂盒的序列号，并输入样本编号。然后将试剂盒放入分析仪中，关闭门，单击分析仪并运行以开始分析。分析结束后，将结果导出至适当的统计分析软件，并从分析仪中取出试剂盒。用75%酒精轻轻擦拭分析仪内部的加热铁和电磁体，并关闭Lab IT窗口。温度监测窗口将弹出，并在CCD升温至五摄氏度保护模式时自动关闭，此时可以安全地关闭分析仪和计算机。微流控系统具有良好的重复性，如对猫皮屑、狗皮屑和蟑螂过敏原经过九轮测试所得数据所示。如图所示，所有数据均位于两个标准差范围内，符合临床允许的最大误差范围。根据过敏原阳性率的结果，所有吸入性过敏原的评估结果均优于食物过敏原。由于曲线下面积（AUC）值范围为0.613至0.984，且三种吸入性过敏原的曲线下面积值均大于0.950，因此可以得出结论：相对于系统一，系统二具有较高的准确性。两个系统的一致性分析显示，三种吸入性过敏原的Kappa值均高于食物过敏原的Kappa值，而食物过敏原的Kappa值通常低于0.4。在这些散点图中，x 轴显示系统二的结果，y 轴显示系统一的结果，可以观察到两种系统对六种不同过敏原的血清免疫球蛋白 E 浓度检测结果的分布情况。在开始检测之前，务必检查反应温度和 CCD 温度，因为它们与检测的准确性相关。按照此步骤操作后，还可进行其他方法，如组分解析诊断，以回答有关过敏原交叉标准化和共致敏的进一步问题。微流控芯片技术已成功应用于过敏诊断领域，以解决血清样本不足和医疗成本高等问题。由于操作涉及人源血清，可能存在潜在危险，因此在进行该实验操作时，必须穿戴适当的个人防护装备，并采取其他必要的安全防护措施。

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生物芯片微流控技术在血清过敏源特异性免疫球蛋白 E (sIgE) 检测中的应用

该视频展示了一种基于细胞的检测方法，用于检测抗水通道蛋白-4免疫球蛋白G，该方法使用含有未转染细胞和表达水通道蛋白-4的转染细胞的生物芯片。此方法可用于视神经脊髓炎谱系疾病的诊断，诊断依据为生物芯片上出现强烈的绿色荧光。...

一种检测血清抗水通道蛋白-4免疫球蛋白G的实验方法

本视频展示了人血清中胰岛自身抗体的电化学发光检测。血清中的抗体将钌标记的抗原与生物素化的捕获抗原连接，形成复合物，通过电化学发光测定进行检测。...

使用电化学发光法检测人胰岛自身抗体

本视频演示了一种利用基于微流控芯片的化学发光系统检测血清特异性免疫球蛋白E的方法。血清IgE与固定在芯片反应区内的不同变应原发生相互作用，随后通过辣根过氧化物酶标记的抗IgE抗体和化学发光底物进行检测，从而实现多种变应原特异性IgE的同步检测。...

一种基于微流控芯片的过敏原特异性免疫球蛋白E检测系统

本研究通过将表面等离子体共振成像（SPRi）检测结果与市售酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒直接比较，评估了直接和信号放大SPRi检测方法在检测人工添加人血清中重组人生长激素方面的诊断潜力。...

利用 SPRi、Nano-SPRi 和 ELISA 检测法对血清中人生长激素的比较分析

本文介绍一种可生成定制化抗原微阵列的方法，可用于同时检测人和小鼠血清中的IgG和IgM自身抗体。该阵列可实现针对任何目标抗原或表位的抗体高通量、定量检测。...

同时检测IgG和IgM自身抗体的双色抗原微阵列的制备

本研究描述了一种采用组分解析方法的实验方案，用于研究中国南方一群过敏性鼻炎和/或哮喘患者对禾本科花粉过敏原的致敏情况。...

针对中国南方过敏性鼻炎和/或哮喘患者进行禾本科花粉过敏原研究的组分解析诊断方法

本文介绍了使用电化学发光（ECL）检测法检测人胰岛自身抗体的方法。该方案可用于预测1型糖尿病，也可拓展用于检测其他自身免疫性疾病的自身抗体。...

人胰岛自身抗体的电化学发光检测法

本研究展示了印刷糖阵列（PGA）技术在分析小型动物体内循环抗碳水化合物抗体方面的潜力。...

打印型聚糖芯片：一种用于分析小型动物循环中抗碳水化合物抗体谱的灵敏技术

基于细胞的检测方法是一种广泛用于检测血清抗水通道蛋白-4免疫球蛋白G的常用技术。该方法可应用于视神经脊髓炎谱系障碍的临床诊断和科学研究。...

基于细胞法检测人血清抗水通道蛋白-4免疫球蛋白G

本文介绍了使用转染了人IgE受体的大鼠嗜碱性白血病细胞系进行的介质释放试验，以模拟在I型过敏反应中通常观察到的效应细胞脱颗粒过程。该方法以高度敏感、可重复且可定制的方式研究过敏原的生物活性。...

人源化介质释放检测作为过敏原效力的读出方法

鉴于迫切需要对1型糖尿病、乳糜泻以及2019冠状病毒病进行筛查，我们开发了一种高通量6重电化学发光检测法，可同时检测全部四种胰岛自身抗体、组织转谷氨酰胺酶自身抗体以及针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2的受体结合域抗体。...

一种用于1型糖尿病、乳糜泻和新冠肺炎的高通量多重筛查方法

了解基于微流控芯片化学发光技术的血清特异性免疫球蛋白E检测方法，用于诊断过敏性鼻炎和哮喘等过敏性疾病。该技术具有成本低、样本用量少、操作简便等优势，适用于呼吸道、食物及皮肤过敏原检测。

生物芯片微流控技术在血清特异性免疫球蛋白E（sIgE）过敏原检测中的应用

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