Name: 果蝇梅拉诺加斯特的锡酸盐合成酶活性的色度测定 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-01-16T12:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 30 s
Description: 了解如何使用比色法测定黑腹果蝇组织匀浆中的柠檬酸合酶活性，无需分离线粒体即可快速定量完整线粒体质量。该方法适用于幼虫、培养细胞和哺乳动物组织等多种生物样本。

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本工作得到了国家自然科学基金（31401013 和 31471010）、上海市科学技术委员会、上海市浦江人才计划（14PJ1405900）以及上海市自然科学基金（19ZR1446400）的资助。

1. 柠檬酸合酶活性比色法检测 D. melanogaster16
<ol>
	<li>每个样本收集十只成年果蝇。每种基因型至少收集三个重复样本。</li>
	<li>为每个样本在1.5 mL离心管中准备500 µL预冷的提取缓冲液，内含20 mM HEPES（pH = 7.2）、1 mM EDTA和0.1% Triton X-100。</li>
	<li>使用CO2麻醉垫麻醉成年果蝇，并分离所需组织。例如，若要分离成年果蝇的胸部，可用镊子固定果蝇胸部，然后用剪刀沿胸部与腹部交界处剪下，分离腹部。收集果蝇胸部用于肌肉柠檬酸合酶活性测定。 
	注意：若需用组织鲜重对柠檬酸合酶活性进行归一化处理，请在此步骤测定组织鲜重。</li>
	<li>立即将10只成年果蝇的胸部组织转移至100 µL预冷的提取缓冲液中，在冰上用研磨杵充分匀浆。为保持样品处于低温状态，每次在冰上匀浆5-10秒后，将样品在冰上静置5秒，重复此过程直至管内所有组织完全匀浆。 
	注意：可用胶带固定离心管，检查匀浆液中无团块存在，确保组织完全匀浆。所有样品处理步骤均应在冰上进行。</li>
	<li>取10 µL匀浆后的样品转移至新离心管中用于蛋白质含量测定。将用于蛋白质测定的样品保持在冰上。 
	注意：蛋白质样品可冷冻并储存在-80 °C以备后续分析。蛋白质浓度将作为柠檬酸合酶活性归一化的内部参数。</li>
	<li>向每个剩余样品中加入400 µL预冷的提取缓冲液，使总体积达到500 µL。通过轻柔吹打至少5次充分混匀，避免产生气泡。每项反应中，将1 µL稀释后的细胞裂解液加入150 µL新鲜配制的反应液（20 mM Tris-HCl（pH 8.0）、0.1 mM DTNB、0.3 mM乙酰辅酶A、1 mM草酰乙酸）中。立即通过轻柔吹打充分混匀，避免产生气泡。使用具备412 nm波长检测功能的酶标仪，在25 °C条件下每隔10-30秒测定一次412 nm处的吸光度，持续4分钟，最小时间间隔为10秒。 
	注意：吸取不同试剂前应更换枪头，避免在孔中产生气泡。试剂混合不充分可能导致测量结果出现偏差。柠檬酸合酶活性测定应在室温下于样品制备后立即进行，因为该测定用于量化完整线粒体质量。反应缓冲液应在使用前即刻配制，不应储存。</li>
	<li>以光密度（OD）吸光度（abs）为纵坐标（Y轴），时间为横坐标（X轴，单位为分钟）作图。计算曲线线性部分的斜率，该斜率代表反应速率： 
	 
	<img src="/files/ftp_upload/59454/59454eq1.jpg" alt="光密度变化率公式，ΔOD/ΔT，用于吸收分析和光谱研究。" data-altupdatedat="1788282455000"> 
	 
	将该值除以样品的蛋白质浓度，以归一化柠檬酸合酶活性。柠檬酸合酶活性计算公式如下： 
	 
	<img src="/files/ftp_upload/59454/59454eq2.jpg" alt="柠檬酸合酶活性公式，反应速率/蛋白质，酶动力学方程。" data-altupdatedat="1788282455000"> 
	 
	注意：样品蛋白质浓度可通过蛋白质浓度测定试剂盒进行测量。</li>
</ol>

<ol><li>Yee, C., Yang, W., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intrinsic+apoptosis+pathway+mediates+the+pro-longevity+response+to+mitochondrial+ROS+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The intrinsic apoptosis pathway mediates the pro-longevity response to mitochondrial ROS in C. elegans.</a> Cell. 157 (4), 897-909 (2014).</li>
<li>Sarasija, S., Norman, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gamma-Secretase+Independent+Role+for+Presenilin+in+Calcium+Homeostasis+Impacts+Mitochondrial+Function+and+Morphology+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">A gamma-Secretase Independent Role for Presenilin in Calcium Homeostasis Impacts Mitochondrial Function and Morphology in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (4), 1453-1466 (2015).</li>
<li>Oxenoid, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+of+the+mitochondrial+calcium+uniporter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Architecture of the mitochondrial calcium uniporter.</a> Nature. 533 (7602), 269-273 (2016).</li>
<li>Hekimi, S., Wang, Y., Noe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+ROS+and+the+Effectors+of+the+Intrinsic+Apoptotic+Pathway+in+Aging+Cells%3A+The+Discerning+Killers%21%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial ROS and the Effectors of the Intrinsic Apoptotic Pathway in Aging Cells: The Discerning Killers!</a> Frontiers in Genetics. 7, 161(2016).</li>
<li>Kim, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+Biosynthesis+Coordinates+a+Mitochondrial-to-Cytosolic+Stress+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Lipid Biosynthesis Coordinates a Mitochondrial-to-Cytosolic Stress Response.</a> Cell. 166 (6), 1539-1552 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Hekimi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+and+longevity+in+animals%3A+Untangling+the+knot%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction and longevity in animals: Untangling the knot.</a> Science. 350 (6265), 1204-1207 (2015).</li>
<li>Ray, A., Martinez, B. A., Berkowitz, L. A., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction%2C+oxidative+stress%2C+and+neurodegeneration+elicited+by+a+bacterial+metabolite+in+a+C.+elegans+Parkinson%27s+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction, oxidative stress, and neurodegeneration elicited by a bacterial metabolite in a C. elegans Parkinson's model.</a> Cell Death & Disease. 5, e984(2014).</li>
<li>Tronstad, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+and+quantification+of+cellular+mitochondrial+morphology+and+content%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Regulation and quantification of cellular mitochondrial morphology and content.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (35), 5634-5652 (2014).</li>
<li>Wiegand, G., Remington, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Citrate+synthase%3A+structure%2C+control%2C+and+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Citrate synthase: structure, control, and mechanism.</a> Annual Review of Biophysics and Biophysical Chemistry. 15, 97-117 (1986).</li>
<li>Lopez-Lluch, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calorie+restriction+induces+mitochondrial+biogenesis+and+bioenergetic+efficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Calorie restriction induces mitochondrial biogenesis and bioenergetic efficiency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (6), 1768-1773 (2006).</li>
<li>MacInnis, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+mitochondrial+adaptations+in+human+skeletal+muscle+after+interval+compared+to+continuous+single-leg+cycling+matched+for+total+work%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Superior mitochondrial adaptations in human skeletal muscle after interval compared to continuous single-leg cycling matched for total work.</a> Journal of Physiology. 595 (9), 2955-2968 (2017).</li>
<li>Gillen, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twelve+Weeks+of+Sprint+Interval+Training+Improves+Indices+of+Cardiometabolic+Health+Similar+to+Traditional+Endurance+Training+despite+a+Five-Fold+Lower+Exercise+Volume+and+Time+Commitment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Twelve Weeks of Sprint Interval Training Improves Indices of Cardiometabolic Health Similar to Traditional Endurance Training despite a Five-Fold Lower Exercise Volume and Time Commitment.</a> PLoS One. 11 (4), e0154075(2016).</li>
<li>Mukherjee, S., Basar, M. A., Davis, C., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+functional+similarities+and+divergences+between+Drosophila+Spargel%2FdPGC-1+and+mammalian+PGC-1+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Emerging functional similarities and divergences between Drosophila Spargel/dPGC-1 and mammalian PGC-1 protein.</a> Frontiers in Genetics. 5, 216(2014).</li>
<li>Mukherjee, S., Duttaroy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spargel%2FdPGC-1+is+a+new+downstream+effector+in+the+insulin-TOR+signaling+pathway+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Spargel/dPGC-1 is a new downstream effector in the insulin-TOR signaling pathway in Drosophila.</a> Genetics. 195 (2), 433-441 (2013).</li>
<li>Diop, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGC-1%2FSpargel+Counteracts+High-Fat-Diet-Induced+Obesity+and+Cardiac+Lipotoxicity+Downstream+of+TOR+and+Brummer+ATGL+Lipase%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase.</a> Cell Reports. 10 (9), 1572-1584 (2015).</li>
<li>Rera, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+longevity+and+tissue+homeostasis+by+the+Drosophila+PGC-1+homolog%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Modulation of longevity and tissue homeostasis by the Drosophila PGC-1 homolog.</a> Cell Metabolism. 14 (5), 623-634 (2011).</li>
<li>Wei, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNF34+modulates+the+mitochondrial+biogenesis+and+exercise+capacity+in+muscle+and+lipid+metabolism+through+ubiquitination+of+PGC-1+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica+%28Shanghai%29%22%5BJournal%5D)">RNF34 modulates the mitochondrial biogenesis and exercise capacity in muscle and lipid metabolism through ubiquitination of PGC-1 in Drosophila.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica (Shanghai). 50 (10), 1038-1046 (2018).</li>
<li>Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+studying+metabolism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Methods for studying metabolism in Drosophila.</a> Methods. 68 (1), 105-115 (2014).</li>
<li>Bosco, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+oxygen+concentration+and+pressure+on+Drosophila+melanogaster%3A+oxidative+stress%2C+mitochondrial+activity%2C+and+survivorship%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Insect+Biochemistry+and+Physiology%22%5BJournal%5D)">Effects of oxygen concentration and pressure on Drosophila melanogaster: oxidative stress, mitochondrial activity, and survivorship.</a> Archives of Insect Biochemistry and Physiology. 88 (4), 222-234 (2015).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

使用Drosophila作为模型进行代谢研究时，必须考虑果蝇的遗传背景、饮食及品系保种方式18。为避免不同遗传背景对柠檬酸合酶活性测定结果的影响，不同Drosophila品系应与对照品系回交10代。本实验所用的所有Drosophila品系的遗传背景均为w1118，因此我们采用w1118作为对照。通常我们认为w1118是一个良好的对照品系，因为大多数Drosophila品系均以此为遗传背景，且其回交操作比Canton-S更为简便。所有实验组的饮食和品系保种条件必须完全一致。在本实验中，果蝇通常饲养于25 °C、相对湿度50-60%的环境中。样品制备步骤也需谨慎操作。为实验所设置的杂交应保持相似且适当的规模。设置杂交时，将3-4只雌性成年 virgin 果蝇与2-3只雄性成年果蝇共同置于一个直径4 cm、高15 cm并装有新鲜培养基的试管中。培养基配方可根据实验设计而变化（例如高脂饮食、正常饮食、高糖饮食...

线粒体最广为人知的功能是在大多数真核生物中作为产能细胞器，通过三羧酸循环（即 Krebs 循环）和氧化磷酸化产生能量货币 ATP。研究发现，线粒体还在许多其他生理过程中发挥重要作用，例如凋亡调控1、Ca2+ 稳态2,3、活性氧（ROS）生成4以及内质网（ER）应激反应5。线粒体功能障碍可在任何年龄影响机体的任何器官，是代谢性疾病、衰老相关疾病6和神经退行性疾病7的主要病因之一。完整的线粒体结构与其功能密切相关，因此，对完整线粒体数量进行准确量化对于评估线粒体功能至关重要8。柠檬酸合酶是三羧酸循环第一步反应的限速酶9，定位于真核细胞的线粒体基质中，因此可作为完整线粒体数量的定量标志物9,10。柠檬酸合酶活性也可用于对完整线粒体蛋白进行标准化校正11,12。
果蝇， 黑腹果蝇是研究线粒体功能的优良模型系统，因为在线粒体中发挥关键作用的许多分子和通路在进化上从 果蝇 对人类13,14,15. 本文介绍一种通过比色法快速简便测定柠檬酸合酶活性的实验方案 果蝇 组织匀浆16 以96孔板形式进行。在柠檬酸合酶活性检测中，柠檬酸合酶在 果蝇 组织匀浆催化草酰乙酸与乙酰辅酶A（acetyl CoA）反应生成柠檬酸、CoA-SH和H+辅酶A-SH随后与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应生成有色产物2-硝基-5-巯基苯甲酸盐(TNB)，该产物可在412 nm处通过分光光度法易于测定。柠檬酸合酶活性可通过显色反应速率来反映。

<table><tbody><tr><td>2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸（HEPES）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900477</td><td></td></tr><tr><td>2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇（TRIZMA Base）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900483</td><td></td></tr><tr><td>乙酰辅酶A（Acetyl-CoA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2181</td><td></td></tr><tr><td>二硫代双硝基苯甲酸（DTNB）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8130</td><td></td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸（EDTA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900106</td><td></td></tr><tr><td>草酰乙酸（Oxaloacetate）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O4126</td><td></td></tr><tr><td>研磨杵（Pellet pestle）</td><td>Sangon</td><td>F619072</td><td></td></tr><tr><td>研磨杵电机（Pellet pestle motor）</td><td>Tiangen</td><td>OSE-Y10</td><td></td></tr><tr><td>酶标仪（Plate reader）</td><td>BioTek</td><td>Eon</td><td></td></tr><tr><td>蛋白质BCA检测试剂盒（Protein BCA Assay kit）</td><td>Beyotime</td><td>P0010S</td><td></td></tr><tr><td>剪刀（Scissors）</td><td>WPI</td><td>14124</td><td></td></tr><tr><td>曲拉通X-100（Triton X-100）</td><td>Sangon</td><td>A110694-0100</td><td></td></tr></tbody></table>

一种用于黑腹果蝇（drosophila melanogaster）柠檬酸合酶活性的比色测定法

A Colorimetric Assay of Citrate Synthase Activity in Drosophila Melanogaster

线粒体通过氧化磷酸化产生ATP，并调控多种生理过程，在细胞代谢中发挥着最突出的作用。线粒体功能障碍是多种代谢性疾病和神经退行性疾病的主要病因。完整的线粒体对其正常功能至关重要。柠檬酸合酶定位于线粒体基质中，因此可作为完整线粒体数量的定量酶学标志物。鉴于在线粒体中具有重要功能的许多分子和通路在人类与Drosophila之间高度保守，且Drosophila拥有大量强大的遗传学工具，Drosophila是研究线粒体功能的良好模型系统。本文介绍一种无需分离线粒体，直接利用成年果蝇组织匀浆快速简便测定柠檬酸合酶活性的实验方案。该方案同样适用于幼虫、培养细胞以及哺乳动物组织中柠檬酸合酶活性的测定。

图1 展示了使用柠檬酸合酶活性比色法测定过程中，在412 nm处随时间变化的光密度吸光度动力学曲线示例 果蝇 不同基因型的胸部组织匀浆。众所周知，PGC-1α 是线粒体生物发生的主导调控因子。PGC-1α 在不同物种间具有功能保守性。 果蝇 和人类。 果蝇 RNF34（dRNF34）是一种E3泛素连接酶 果蝇 PGC-1α、dPGC-1及其促进dPGC-1蛋白降解17透射电子显微镜和线粒体DNA qPCR结果表明，dRNF34基因敲低后 果蝇 肌肉增加线粒体含量，而dPGC-1的敲低可抑制这一过程17根据这些结果，我们提出假设：在果蝇中敲低 dRNF34 可能 果蝇 肌肉中线粒体柠檬酸合酶活性会增加，而这种效应应可通过敲低 dPGC-1 得以逆转。事实上，利用本文所述的柠檬酸合酶活性比色法检测，我们发现敲低 dR...

我们提出了一种用于定量完整线粒体数量的柠檬酸合酶活性比色检测方案 果蝇 组织匀浆

一种用于黑腹果蝇（Drosophila Melanogaster）柠檬酸合酶活性的比色测定法

线粒体通过氧化磷酸化产生ATP，并调控多种细胞代谢过程，在细胞代谢中发挥着最突出的作用。

果蝇是研究线粒体功能的良好模式系统。本文介绍一种从成年果蝇组织匀浆中测定柠檬酸合酶活性的实验方案。该方案无需分离线粒体。该方法快速简便，适用于检测幼虫、培养细胞和哺乳动物组织中的柠檬酸合酶活性。首先收集每个样本的成年果蝇，确保每种基因型至少收集三个重复样本。为每个样本在1.5毫升离心管中准备500微升冰冷的提取缓冲液，其中包含20毫摩尔HEPES、1毫摩尔EDTA和0.1% Triton X-100。在麻醉垫上用二氧化碳麻醉成年果蝇。为分离胸部，用一对镊子固定果蝇，再用剪刀沿胸部与腹部的交界处剪开，分离果蝇的腹部。收集果蝇的胸部用于柠檬酸合酶活性检测。立即将10只成年果蝇的胸部转移到100微升预冷的裂解缓冲液中，并在冰上用研杵充分匀浆。保持样品低温，每次在冰上匀浆5至10秒，随后在冰上静置5秒，重复此过程直至所有组织完全匀浆。将每份匀浆样品取10微升分装至新的离心管中用于蛋白质含量测定，这些离心管也需保持在冰上。向每个剩余样品中加入 400 微升预冷的提取缓冲液，使总体积达到 500 微升，轻轻吹打混匀。每个反应中，将 1 微升稀释后的细胞裂解液加入 150 微升新鲜配制的反应溶液中。通过轻轻吹打充分混匀，注意避免产生气泡，然后使用酶标仪在 25 摄氏度下每隔 10 至 30 秒测量一次 412 纳米处的吸光度，持续 4 分钟。将数据绘制成吸光度随时间变化的曲线，然后计算曲线线性部分的斜率。最后，用反应速率（即斜率）除以样品的蛋白质浓度，以标准化柠檬酸合酶活性。研究假设在果蝇肌肉中敲低 dRNF34 会增加线粒体柠檬酸合酶活性，而敲低 dPGC-1 则会逆转这一增加效应。每项检测均确定了初始线性酶促反应速率；趋势线的斜率代表最大反应速率，相当于不同基因型的最大柠檬酸合酶活性。最大柠檬酸合酶活性由动力学曲线计算得出，并根据蛋白浓度进行归一化处理。结果表明，果蝇胸部的合酶活性确实随着肌肉特异性dRNF34敲低而升高，而该升高效应可被肌肉特异性dPGC-1敲低所逆转。在匀浆样品时，应倾斜离心管并检查匀浆液，确保无凝块存在，并确认管内组织已完全匀浆。样品采集后，所有样品处理步骤均需在冰上进行。柠檬酸合酶活性测定用于定量完整的线粒体数量。对完整线粒体数量进行准确定量对于评估线粒体功能至关重要。

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生物化学

果蝇梅拉诺加斯特的锡酸盐合成酶活性的色度测定

Drosophila melanogaster 是一种遗传和行为上易于操作的模式生物系统，一个多世纪以来已被用于研究许多重要生命过程的分子与细胞基础1。Drosophila...

Drosophila 行为测定方法

本视频介绍了一种比色法检测，用于测定黑腹果蝇（Drosophila）组织匀浆中线粒体柠檬酸合酶的活性。...

柠檬酸合酶活性检测：一种比色法测定果蝇组织匀浆中线粒体柠檬酸合酶活性的实验方法

向发育中的Drosophila胚胎引入小分子化合物在表征新型化合物、药物和毒素的生物活性，以及探究基本发育通路方面具有巨大潜力。本文所述方法概述了克服该方法天然屏障的步骤，从而拓展了Drosophila胚胎模型的应用价值。...

一种透化方法 果蝇 用于小分子活性检测的胚胎

本文介绍了一种测量黑腹果蝇（Drosophila...

测量放射性标记底物在Drosophila melanogaster中产生的二氧化碳

毛细管饲喂（CAFE）实验是一种简单、经济且高度可靠的用于研究摄食机制的方法。该方法结合高度多能的遗传模式生物Drosophila...

毛细管饲喂实验测定食物摄入量 黑腹果蝇

细胞离子转运通常可通过监测细胞内pH值(pHi)来评估。基因编码的pH指示剂(GEpHIs) 可对完整细胞中的细胞内pH值进行光学定量。本实验方案详细描述了利用一种伪比率型基因编码pH指示剂pHerry，对黑腹果蝇Drosophila melanogaster马尔皮基氏小管进行细胞ex...

利用荧光基因编码pH探针对黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）马氏管上皮细胞内pH进行光学定量

本方案描述了一种简单的检测方法，用于鉴定在正常大气氧浓度下处于缺氧状态的Drosophila...

一种用于检测缺氧的掘穴/隧道形成实验方法 黑腹果蝇 幼虫

本文介绍了一种利用高分辨率呼吸测定法测量果蝇透化胸段耗氧量的方法。与传统的线粒体分离技术相比，该技术所需组织量极少，且获得的结果更具生理相关性。...

利用少量组织测量果蝇透化肌纤维的线粒体耗氧量

我们介绍了一种用于测量黑腹果蝇（Drosophila...

代谢分析 黑腹果蝇 幼虫和成体大脑

本方案描述了一种在成年黑腹果蝇（Drosophila...

利用体内吞噬作用检测法评估果蝇Drosophila melanogaster的细胞免疫反应

库仑呼吸测定法适用于测量小型生物的代谢率。经改进后可用于 黑腹果蝇 在本研究中，测定了 O2 消耗量处于野生型报道的范围内 D. melanogaster 由先前的研究。每只果蝇的O2 消耗由 CASK 突变体体积更小且活性更低，其活性显著低于野生型。...

测量 O2 消耗在 黑腹果蝇 使用库仑法微量呼吸测定技术

了解如何使用比色法测定黑腹果蝇组织匀浆中的柠檬酸合酶活性，无需分离线粒体即可快速定量完整线粒体质量。该方法适用于幼虫、培养细胞和哺乳动物组织等多种生物样本。

一种用于黑腹果蝇（Drosophila Melanogaster）柠檬酸合酶活性的比色测定法

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