通过将表达的腺病毒注射到小鼠乳腺腺中,模拟乳腺癌

该协议将帮助研究人员生成一种新型小鼠模型，从乳腺上皮细胞的不同子集综述人类乳腺癌的发展。这项技术允许研究人员以特定的方式在发育阶段组织中生成乳腺癌小鼠模型，而无需大量小鼠繁殖。若要开始此过程，请生成、维护和麻醉像文本协议中描述的浮子小鼠。

将鼠标带到与要进行手术分开的区域。通过进行手趾捏来确认麻醉后，注射 Meloxicam 作为镇痛皮，每公斤5毫克的剂量，为手术做准备。通过应用几滴脱毛霜来暴露奶嘴手术现场。

使用柔软的纸巾去除过多的奶油和松弛的头发。不建议剃须以避免对奶嘴造成损坏。首先使用碘磷消毒手术现场，然后使用 70% 酒精进行消毒，最后使用磨砂碘磷。

使用纱布海绵或棉尖施用器，从工作区中心向外围方向进行圆周运动。重复循环三到四次。在整个外科手术过程中使用无菌技术。

在皮肤上做一个切口部位，长度大约为一厘米，介于两个四分之一的乳腺之间。小心地将皮肤皮瓣与胸膜分离，以便直观地看出乳腺导管树。小心地用制表师的钳子握住奶嘴，无需使用微切除剪刀切割任何附近的皮肤即可去除外部奶嘴。

将大约三到五微升的 Cre-adenovirus 注射混合物装入 25 微升汉密尔顿注射器中，并贴有 33 量金属轮毂针。根据混合物中包含的蓝色染料估计注射器中注射混合物的体积。用细弯钳轻轻握住皮肤皮瓣的边缘，将Cre-adeno病毒注射混合物缓慢注入奶嘴，同时监测蓝色染料在乳腺导管树中的扩散。

尽可能缓慢地保持喷射速度，以避免损坏导管流明。成功进行电内注射，通过在整个导管树中扩散的注入流体表示，而不会泄漏到频闪室。轻轻地从奶嘴上取针，以避免注射液的任何泄漏。

检查乳腺的毛体侧或注射的奶嘴的周围区域。染料扩散到附近的频闪，如此处所示，表明乳腺脂肪垫注射，而不是成功的电内注射。用伤口夹关闭皮肤上的手术伤口。

将鼠标从麻醉中取出，放在清洁笼内的加热垫上，进行恢复。监测乳腺肿瘤的发展，如文本协议所述。能够成功进行电内注射的最年轻的雌性小鼠是大约三周大的雌性小鼠。

虽然大多数乳腺肿瘤诱导实验，年轻的成年雌性小鼠使用。在早孕到中孕期间，可对雌性小鼠进行具有较大体积注射混合物的电内注射，以靶向阿尔维奥细胞。针对不同乳腺上皮细胞亚细胞子组进行乳腺肿瘤诱导，在不同乳腺上皮细胞子特异性启动子的控制之下使用Cre-adeno病毒进行注射。

例如，在角蛋白8促进剂的控制之下的Cre-adeno病毒用于靶向发光乳腺上皮细胞。在角蛋白5促进剂的控制之下的克里腺病毒瞄准了基底血统，导致只有基底乳腺上皮细胞的基因标记。对于一只患有ROSA26-YFP记者的雌性P53絮状同源小鼠来说，角蛋白8 Cre-adeno病毒的电内注射导致注射几个月后乳腺肿瘤的发展。

由于包含有条件的R26-Y检测器，肿瘤上皮细胞通常以YFP标记，可以通过流式细胞学检测。通过YFP正细胞的流动排序，可以丰富细胞，用于进一步分析。尝试此程序时，要记住的最重要的事情是使用小注射量，缓慢注射，并慢慢取针。

按照这个程序，可以通过流动细胞学或注射腺体的联合免疫荧光染色，监测目标YFP阳性乳腺上皮细胞到恶性前和癌症阶段的进展。这项技术将为研究人员研究乳腺癌起源细胞、它们对不同自生事件的反应以及它们如何向癌细胞发展铺平道路。腺病毒和注射针头都有潜在的危险。

因此，在进行电管注射时，应始终戴上手套并使用安全针和注射器。