使用 Ever 设计自动化、高通量、连续细胞生长实验

eVOLVER 为研究人员提供了实验自由，能够通过对多个参数的自动反馈来定义自己的培养增长实验，并将其缩放到所需的任何规模。eVOLVER 比其他设备更灵活。用户可以通过修改每个区域性的智能套筒，轻松自定义 Python 中的软件以及硬件。

系统在一眼就可能显得复杂，具有多个组件和连接。可视化指南使首次使用的用户对自己运行实验更有信心。正确设置至关重要。

请务必了解每个组件的用量。因此，您可以确认它们正在工作。确保所有内容都正确布线并紧密连接。

虽然 eVOLVER 设计用于不同条件下的细菌和酵母的有氧培养，但也可以修改为厌氧发酵或保持哺乳动物细胞悬浮状态。本视频将演示如何使用 eVOLVER 平台设置、初始化和运行高吞吐量连续培养实验。实验前一天，根据手稿准备媒体、小瓶和花瓶。

在三个大型烧杯中，准备两个10%漂白剂的烧杯和一个70%乙醇的烧杯。使用 eVOLVER 设备上的开关，打开 eVOLVER 上的 5 伏电源，等待 5 秒钟，然后打开 12 伏电源。如果从同一介质瓶中运行多个小瓶，请将多个介质输入线与管道分路器连接。

定制管道分离器可以使用较低的组件进行构造。将介质输入线淹没在第一个漂白剂烧杯中，将介质回流线淹没在第二个漂白剂烧杯中。使用回流线将介质输入线的下游端连接到第二个烧杯。

把废线放进废车里。在废汽车里加入一到两升漂白剂，对实验过程中产生的废物进行消毒。使用 eVOLVER 上的触摸屏，导航到设置部分并运行所有泵 20 秒钟，以 10% 漂白剂填充流体管路。

让漂白剂在生产线上静坐至少 30 分钟进行消毒。使用触摸屏再次运行泵，直到管路不再被淹没，推动空气通过管路，以尽可能多地将漂白剂吸出来。将介质输入管路放在乙醇烧杯中，用乙醇填充管路，用空气冲洗。

然后，将介质输入线与下部连接器连接到介质瓶并运行泵，直到介质完全穿过冲洗出任何残留乙醇的管路。部分插入灭菌小瓶到eVOLVER智能套管，并挂钩输入线到短流入稻草和废物线到长叶草吸管根据颜色编码。在 eVOLVER 触摸屏上进行调整，以 10 秒的增量运行所有泵，以填充小瓶的介质。

通过目视检查，确保 eflux 泵通过 eflux 吸管有效地去除介质，以防止溢出。然后，向下推小瓶，直到完全包裹的智能套筒。在 eVOLVER 触摸屏交互式设置页面上，在触摸屏上拖动手指或按"选择全部"按钮选择所有小瓶，将温度的初始条件设置为 30 摄氏度，搅拌设置为 10。

在计算机上，指定将在操作实验的 eVOLVER 设备。确保已选择所需的校准设置。打开 eVOLVER 仪表板并导航到实验管理器页面。

选择实验导航器面板中的"基础实验"或"现有实验"作为起点，然后单击"克隆"。导航到实验编辑器页面。使用 Vial 选择器和参数定义面板将温度调节到 30 摄氏度，并根据实验设计为每个小瓶设置 OD 的上限和下部阈值。

通过单击"保存"保存实验。然后单击箭头返回实验管理器页面，然后单击"播放"按钮以运行。实验完成后，导航到交互式仪表板中的实时数据面板。

对于每个小瓶，检查 OD 值是否为零。浏览温度图，检查温度是否达到或正在向 30 摄氏度发展。要准备 inoculum，首先测量隔夜培养物的 OD，并计算对隔夜培养物的所需完全稀释，假设小瓶体积为 25 毫升，所需起始 OD 约为 0.05。

通过采样端口，移液器的接种量或接种的混合物的计算体积。检查仪表板上的图形，查看 OD 正在增加到 0.05。随着实验的进行，可以实时监测细胞生长和小瓶状况，允许研究人员在出现任何问题时进行干预。

eVOLVER 是一个自动化的连续培养平台，允许多参数控制培养条件。当根据从eVOLVER增长率数据中插值的各代对数值绘制日志比率时，野生类型、温度敏感和盐敏感组之间的质量差异显示。颜色表示选择温度，而破折号则区分盐浓度。

坡度使用至少三点穿过每个绘图的线性部分，生成一个定量拟合值，该值描述了变异应变如何与参考应变竞争。负的健身值表示变异应变被参考应变所影响。始终检查所有泵是否高效运行，以及流体管路是否清除任何堵塞。

溢出会破坏实验，并可能损坏智能套筒。从eVOLVER采集的样本随后可以测序，以检查实验的结果基因组变化。此信息可用于设计新菌株或系统。

对于使用实验室演化或库选择的研究人员来说，在每个 eVOLVER 实验中很容易施加独特的选择压力。反馈控制和动态环境现在也非常容易访问。实验后，废车将含有少量的漂白剂和乙醇。

请咨询您的实验室安全协调员，以妥善处理废物。